王琴容
- 作品数：23 被引量：39H指数：4
- 供职机构：贵州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵阳市科学技术计划项目贵州省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程更多>>
- CDH1受幽门螺杆菌感染调控及其在胃癌组织中表达分析被引量：2
- 2022年
- 目的探究幽门螺杆菌(Hp)对E-钙黏蛋白(CDH1)表达的影响及CDH1在胃癌(GC)组织中的表达情况,为进一步探索CDH1在Hp引起胃癌中的作用提供理论基础。方法用Hp灌胃蒙古沙鼠,3、12、24个月后分别取其胃组织,进行免疫组化染色检测CDH1的表达;Hp感染胃上皮细胞AGS,24 h后收集样本,Western blot检测各组CDH1的表达。通过TCGA和Kaplan-Meier Plotter数据库比较胃癌组织和癌旁组织中CDH1的表达差异及CDH1与胃癌的预后分析;通过R语言对CDH1基因进行KEGG富集分析;另收集胃癌组织和癌旁组织标本各10例,免疫组化染色检测CDH1的表达。结果Hp灌胃蒙古沙鼠胃组织免疫组化染色结果显示,Hp感染3、12、24个月胃组织CDH1阳性率分别为13.70%、13.20%、22.90%,对照组阳性率分别为0.04%、4.50%、4.77%,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,Hp感染AGS细胞组CDH1蛋白表达增高,差异有统计学意义(P<0.05);TCGA胃癌数据库中共收集449例具有临床病理参数的病例及其对应的CDH1 mRNA表达量,癌旁组织中CDH1 mRNA表达水平(76.36±0.48)显著低于胃癌组织中CDH1 mRNA的表达水平(147.59±0.11),差异有统计学意义(P<0.05);Kaplan-Meier Plotter数据库分析表明胃癌CDH1高表达时,生存率降低(P<0.05);KEGG富集显示CDH1表达与胃癌、甲状腺癌、膀胱癌、子宫内膜癌、黑色素瘤等肿瘤相关,功能显著富集到细菌侵袭上皮细胞和黏附连接,通路显著富集到Apelin信号通路、Hippo信号通路和Rap1信号通路等;CDH1阳性率在人胃癌组织为76.27%,高于癌旁组织45.68%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Hp感染引起CDH1表达水平升高,可能是Hp引起胃癌的原因之一。
- 陈定宇何小凤程薇全欣莹张瑜赵艳王琴容周建奖谢渊
- 关键词：E-钙黏蛋白幽门螺杆菌胃癌
- 阻断胃泌素受体对胃癌细胞增殖和凋亡及其信号通路的影响被引量：1
- 2017年
- 目的探讨阻断胃泌素受体对胃癌细胞增殖、凋亡及其相关通路中关键蛋白表达的影响。方法试验组使用终浓度为5mmol/L的丙谷胺(胃泌素受体阻断剂)处理胃癌细胞SGC-7901和AGS 6d,以不加丙谷胺培养的胃癌细胞SGC-7901和AGS为对照组。四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测各组细胞的生长并绘制细胞生长曲线;流式细胞术检测各组细胞的细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞的凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测典型Wnt/β-catenin通路、核因子κB、磷脂酰肌醇3激酶-丝氨酸-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白中关键蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、核转录因子RelA、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、糖原合酶激酶3βmRNAs的表达;免疫蛋白印迹检测β-catenin蛋白质的表达。结果用丙谷胺处理后,试验组细胞的生长速度低于对照组细胞,细胞周期中S期细胞百分数也低于对照组细胞,而G_0/G_1期细胞百分数高于对照组细胞(P<0.05);试验组的细胞凋亡数高于对照组(P<0.05);RT-qPCR结果显示:丙谷胺处理后,胃癌细胞中β-catenin的mRNA表达量降低(P<0.05)。Western blot结果显示丙谷胺处理后,β-catenin蛋白质的表达量降低(P<0.05)。结论阻断胃泌素受体能下调胃癌细胞中β-catenin的表达,抑制细胞增殖,同时促进细胞凋亡。
- 袁航汪闯王琴容赵艳李雅洁龙妮娅周建奖
- 关键词：胃泌素类丙谷胺Β-CATENIN
- ALX1基因过表达促进非小细胞肺癌细胞系PC-9上皮间质转化被引量：2
- 2017年
- 目的:探讨ALX1(aristaless-like homeobox 1)基因过表达对非小细胞肺癌细胞系PC-9上皮间质转化(EMT)能力的影响。方法:构建pc DNA3.1-ALX1过表达重组载体,将pc DNA3.1-ALX1和pc DNA3.1分别转染PC-9细胞;采用细胞划痕实验和Transwell实验分析PC-9细胞迁移及侵袭能力的改变,用qRT-PCR和Western印迹法检测EMT过程相关标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)、紧密连接蛋白(ZO-1)以及转录因子slug和snail表达水平的改变。结果:与对照组相比,ALX1过表达组中PC-9细胞的迁移和侵袭能力明显增强(P<0.001),ZO-1表达量明显降低(P<0.05),N-cadherin、slug和snail表达量明显增高(P<0.001)。结论:ALX1基因过表达能够促进非小细胞肺癌细胞PC-9的EMT转化,其机制可能与ZO-1表达量下调和N-cadherin、slug和snail表达量上调有关。
- 王琴容宋科伟吴昌学赵艳谢渊周建奖
- 关键词：上皮间质转化迁移
- DKK1对胃癌AGS细胞增殖、周期和凋亡的影响被引量：4
- 2019年
- 目的:探讨沉默厚体1(DKK1)基因对胃癌AGS细胞增殖、周期和凋亡的影响及其作用机制。方法:构建DickkopfsiRNA(DKK1-siRNA)稳定转染细胞株,提取稳定转染细胞的RNA及总蛋白,qPCR和WB实验分别检测DKK1 mRNA及蛋白的表达水平。实验分为空白对照(Control)组、阴性对照(shNC)组及沉默DKK1(DKK1-shRNA)组,CCK-8实验检测各组培养0、24、48、72、96、120、144 h后AGS细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡水平。检索HPA数据库,分析DKK1与胃癌临床病理的关系。结果:成功建立了稳定沉默DKK1基因的胃癌细胞株AGS,证实DKK1-shRNA组细胞中DKK1 mRNA及蛋白表达水平分别比Control组和shNC组降低到72%和47%(均P<0.05)。细胞增殖曲线显示,与Control和shNC组比较,DKK1-shRNA组细胞培养72h后其增殖显著降低(P<0.05)。与shNC组比较,DKK1-shRNA组S期细胞从32.06%降低到25.87%,G2/M期细胞由8.49%上升到21.26%,细胞凋亡率从10.34%上升到20.65%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。HPA数据库的分析显示,胃癌组织中DKK1 mRNA水平显著高于胃正常组织,DKK1 mRNA的高表达与胃癌患者生存率呈负相关(均P<0.05)。结论:沉默DKK1基因可抑制胃癌AGS细胞的增殖,阻滞细胞于G2/M期并促进细胞凋亡;DKK1在胃癌中发挥促癌作用。
- 骆梅周建奖王琴容王琴容陈学书陈学书谢渊谢渊
- 关键词：胃癌AGS细胞增殖细胞周期凋亡
- 幽门螺杆菌感染蒙古沙鼠胃组织NLRP3炎症小体相关因子和自噬相关蛋白表达分析
- 2023年
- 目的探究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染对蒙古沙鼠胃组织中NLRP3炎症小体相关因子和自噬相关蛋白表达的影响。方法采用Hp国际标准株11637灌胃处理蒙古沙鼠,隔天一次,共5次,以相同体积无菌脑心浸液肉汤灌胃的沙鼠作为对照组。于感染第3、6、12和24个月后处死沙鼠,取胃黏膜组织并切片,HE染色后作病理学检查;免疫组织化学染色观察Hp定植;试剂盒法检测胃组织NLRP3炎症小体及其相关因子IL-18、IL-β和自噬相关蛋白P62、LC3的表达。结果Hp感染蒙古沙鼠胃组织检测到Hp的定植,HE染色检查显示不同时间感染组沙鼠胃黏膜均出现糜烂黏膜下层组织水肿、黏膜局部浅表糜烂和淋巴浆细胞浸润等不同程度的慢性胃炎病理改变,感染24月部分区域出现非典型增生甚至癌变。对照组沙鼠均无Hp定植及组织学病变。与未感染对照组比较,Hp感染蒙古沙鼠胃组织中NLRP3、IL-18、IL-1β和LC3、P62的表达水平均显著升高(均P<0.05);其中NLRP3、IL-18、LC3表达3到12个月随着Hp感染时间的延长呈升趋势,12到24个月呈下降趋势。IL-1β表达无显著变化,P62呈持续上升趋势。结论蒙古沙鼠感染Hp后可出现与人极相似的胃粘膜病理组织学改变,并促进蒙古沙鼠胃组织NLRP3炎症小体活化和自噬水平升高,这可能是Hp引起胃部病理变化的其中一个原因。
- 吴丽霞鲍丽雅陈定宇桂书琴赵艳王琴容周建奖谢渊
- 关键词：幽门螺杆菌自噬
- 活性氧ROS在幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞NLRP3炎症小体激活中的作用被引量：4
- 2021年
- 目的探讨细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导胃上皮细胞NLRP3炎症小体激活中的作用。方法培养Hp国际标准株NCTC11639和胃黏膜上皮细胞株GES-1。用Hp感染细胞GES-1 6 h,采用活性氧检测试剂盒检测细胞内ROS;用25 mmol/L的活性氧ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)预处理GES-1细胞30 min,再按照MOI为100∶1、200∶1加入Hp与细胞共孵育6 h和12 h,通过Western blot检测细胞内NLRP3、caspase-1 p10、ASC蛋白水平,采用ELISA检测上清液中IL-1β含量;实验设未感染对照组。结果与未感染组比较,Hp感染组细胞内ROS生成增多;无论是感染6 h还是感染12 h, NLRP3、caspase-1及ASC蛋白的表达及细胞培养上清液中IL-1β的浓度均随着感染复数的增加而增加(均P<0.05);NAC预处理后再用Hp感染,细胞NLRP3、caspase-1、ASC蛋白表达降低,IL-1β的浓度也降低(均P<0.05);Hp感染6 h和12 h结果一致。结论 ROS途径可能参与Hp对GES-1细胞NLRP3炎症小体的激活。
- 谢渊刘正美周建奖赵艳鲍利雅王琴容
- 关键词：幽门螺杆菌活性氧
- “一锅法”绿色合成2-氨基-5-氟苯硫酚
- 2020年
- [目的]2-氨基-5-氟苯硫酚的绿色合成新工艺研究。[方法]以4-氟苯胺和硫氰酸铵为起始原料,经缩合、环合、水解,“一锅法”合成2-氨基-5-氟苯硫酚的新工艺,并对环合步骤进行了单因素试验,探讨了投料比、反应温度、反应时间等因素对反应效果的影响。[结果]总收率为78.5%,纯度大于95.0%。[结论]该工艺避免了有毒试剂和有机溶剂的使用,绿色环保,操作简便,经济效益较好。
- 毛远湖汤磊何强齐双双张敏王琴容张吉泉
- 关键词：一锅法
- 腺病毒载体介导CagA基因表达对原代胃癌细胞糖酵解代谢酶表达的影响
- 2019年
- 目的研究过表达CagA对原代胃癌细胞糖酵解代谢酶表达的影响。方法构建CagA重组腺病毒载体pAdeno-MCMV-CagA-3Flag-IRES2-EGFP(pAdeno-CagA),转染HEK293细胞,包装腺病毒,以感染复数(Multiplicity of infection, MOI) 50感染原代胃癌细胞72 h,并用幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)东亚株GZ7(CagA^+)以MOI 50感染原代胃癌细胞24 h,通过Western blot检测CagA和已糖激酶2(HK2)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、烯醇化酶1(ENO1)、丙酮酸激酶1/2(PKM1/2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)糖酵解代谢酶的蛋白表达,采用流式细胞术检测胃癌细胞周期分布。结果成功构建了CagA重组腺病毒载体pAdeno-CagA,用pAdeno-CagA腺病毒和Hp GZ7感染原代胃癌细胞后糖酵解代谢酶HK2、ENO1、GLUT1的表达与空载组或Hp非感染组比较均显著下调(P<0.05)。与空载组比较,pAdeno-CagA感染胃癌SGC-7901细胞24、48、72 h,其G2/M期细胞百分比显著增加(P<0.05),感染72 h的空载组和CagA腺病毒组G2/M期的比值分别为16.90%和65.93%。结论 Hp通过CagA使原代胃癌细胞糖酵解代谢酶表达下调,可能与DNA损伤使细胞阻滞在G2/M期有关。
- 杨丽萍贾岑岑龙妮娅骆梅杨丹王珺谢渊赵艳赵艳周建奖
- 关键词：腺病毒CAGA胃癌糖酵解
- 基于生物信息学数据分析ATM在胃癌组织中的表达及其临床意义被引量：1
- 2021年
- 目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染对胃癌细胞共济失调毛细血管扩张突变(ataxia-telangiectasia mutated,ATM)基因表达的影响及其临床意义。方法:从TCGA数据库中获取胃癌相关RNAseq数据,比较ATM基因的表达差异,分析ATM表达与患者临床病理参数的相关性及预后价值,用Kaplan-Meier法进行生存分析,LinkedOmics数据库分析ATM相关基因,用R语言进行GO、KEGG富集分析。选用2019年3月至2019年12月贵州医科大学附属医院12例手术切除的胃癌及癌旁组织标本,以及胃癌细胞系AGS和BGC823,用感染复数40∶1的Hp GZ7菌感染细胞,用免疫组织化学染色法检测胃癌组织中ATM蛋白的表达,qPCR法检测胃癌组织和细胞中ATM mRNA的表达。结果:TCGA数据显示胃癌和Hp感染胃癌组织中ATM miRNA表达水平均显著高于癌旁组织(均P<0.01);胃癌组织中ATM miRNA表达与患者的T分期、AJCC分期等病理参数呈正相关(均P<0.05),ATM高表达时生存率显著降低(P<0.05)。实验检测显示,胃癌组织标本中ATM蛋白的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01);Hp感染胃癌细胞中ATM miRNA表达水平显著高于未感染胃癌细胞(P<0.01)。胃癌中ATM基因与NPAT等12461个基因呈正相关(P<0.05),与MIF等7764个基因呈负相关(P<0.05)。GO、KEGG富集分析显示,ATM富集到DNA修复复合体、癌症中的转录失调等信号通路。结论:ATM基因在胃癌组织中高表达,患者生存率随表达水平的增高而降低,其与患者的T分期、AJCC分期等病理参数相关,且Hp感染引起ATM表达水平升高可能是Hp引起胃癌的原因之一。
- 何小凤陈定宇周建奖赵艳赵艳王琴容王琴容
- 关键词：胃癌AGS细胞BGC823细胞
- 幽门螺杆菌CagA对胃上皮细胞线粒体功能的影响被引量：2
- 2021年
- 目的评价幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)细胞毒素相关蛋白CagA对胃上皮细胞线粒体功能的影响。方法用CagA基因失活突变Hp菌株(1004Hp△cagA)和野生型1004Hp菌株分别感染人胃上皮细胞GES-1和AGS 24 h,收集标本。Western blot检测各组细胞中CagA蛋白、线粒体融合分裂蛋白Mfn1、Mfn2、Fis1和Drp1的表达情况;加入JC-1荧光探针后,荧光显微镜观察各组细胞线粒体膜电位变化;ATP检测试剂盒检测各组细胞中ATP生成水平的变化。结果Western blot鉴定显示野生型1004Hp中有CagA的表达,而1004Hp△cagA无CagA的表达。1004Hp感染组与1004Hp△cagA感染组比较,线粒体融合蛋白Mfn1、Mfn2表达下降(P<0.05),线粒体分裂蛋白Fis1、Drp1表达上升(P<0.05),线粒体膜电位下降,且在GES-1和AGS两株细胞结果一致。1004Hp感染组和1004Hp△cagA中AGS和GES-1细胞ATP相对生成量分别为0.30±0.03、0.64±0.04和0.64±0.01、1.23±0.19,AGS中1004 Hp感染组较1004 Hp△cagA感染组ATP生成水平下降53.1%,GES-1中1004 Hp感染组较1004 Hp△cagA感染组ATP生成水平下降48.0%(P<0.05)。结论Hp/cagA影响线粒体动态平衡,诱发功能障碍,可能是Hp引起胃部病理变化的原因之一。
- 陈定宇何小凤张瑜赵艳王琴容周建奖谢渊
- 关键词：幽门螺杆菌线粒体膜电位
