孔令慧
- 作品数：8 被引量：12H指数：2
- 供职机构：上海理工大学医疗器械与食品学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市自然科学基金上海市教育发展基金会“曙光计划”项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学交通运输工程更多>>
- 干酪乳杆菌胞外多糖基因簇的调控基因在大肠杆菌中异源表达被引量：1
- 2017年
- 为研究干酪乳杆菌胞外多糖的生物合成和转录调控,对其生物合成基因簇中假定的转录调控因子LC2W_2170进行克隆,并在大肠杆菌(Escherichia coli)中异源表达。首先,利用PCR技术从干酪乳杆菌LC2W中扩增出目的基因LC2W_2170,将其插入到大肠杆菌表达载体p ET24a和p ET30a中,构建出LC2W_2170 N端或C端和N端均含有His蛋白标签的重组质粒。含上述质粒的E.coli经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析并未发现LC2W_2170蛋白可溶性表达。对LC2W_2170氨基酸序列利用Phobius服务器分析,发现该蛋白N端存在跨膜区(前27个氨基酸为跨膜序列)。切除此跨膜区域重新构建重组表达质粒后,在E.coli中成功实现LC2W_2170蛋白可溶性表达。研究为进一步纯化该转录调控因子,并研究其功能和对胞外多糖生物合成基因簇的转录调控机制奠定了基础。
- 孔令慧周炜王光强夏永军张汇李红梅艾连中熊智强
- 关键词：干酪乳杆菌胞外多糖转录调控因子异源表达大肠杆菌
- 4种胆盐水解酶在发酵乳杆菌AR497中的异源表达被引量：1
- 2020年
- 为提高发酵乳杆菌耐胆盐能力,将植物乳杆菌AR113来源的4种BSH基因(BSH1、BSH2、BSH3和BSH4)转化至发酵乳杆菌AR497中进行表达。结果表明,植物乳杆菌来源的4种BSH同功酶异源表达可提高发酵乳杆菌的耐胆盐能力。在2.0mg/mL甘氨脱氧胆酸钠浓度下,表达BSH2的工程菌致死率最低,其他菌株生长被完全抑制;BSH酶活测定表明,BSH2表达菌株酶活最高,达57.74U/mL,比对照空质粒菌株提高了2.88倍。
- 印伯星石俊康孔令慧杨仁琴艾连中艾连中
- 关键词：发酵乳杆菌胆盐水解酶异源表达酶活
- 基于分子对接策略在干酪乳杆菌中异源表达胆盐水解酶
- 胆盐水解酶(Bile salt hydrolase,BSH,EC 3.5.1.24)是乳酸菌降胆固醇作用中的关键酶,能水解结合态牛磺胆酸盐和甘氨胆酸盐,将其转变成氨基酸和游离胆酸.本文利用Swiss-Model 服务器对...
- 熊智强孔令慧王光强夏永军张汇艾连中
- 关键词：胆盐水解酶植物乳杆菌干酪乳杆菌分子对接异源表达
- 四种胆盐水解酶基因在干酪乳杆菌中的异源表达
- 胆盐水解酶（Bile salt hydrolase,BSH,EC 3.5.1.24）是乳酸菌降胆固醇作用过程中的关键酶,该酶能水解结合态牛磺胆酸盐和甘氨胆酸盐,将其转变成氨基酸和游离胆酸。本文根据GenBank上报道的植...
- 熊智强王巧慧宋馨孔令慧王光强夏永军张汇艾连中
- 关键词：胆盐水解酶植物乳杆菌干酪乳杆菌异源表达
- 文献传递
- 响应面法优化嗜热链球菌AR333电转化条件被引量：2
- 2020年
- 【背景】嗜热链球菌AR333是本实验室从发酵乳中筛选出的一株高产活性胞外多糖乳酸菌。【目的】建立嗜热链球菌AR333高效电转化体系。【方法】通过单因素试验和Box-Behnken响应面法优化电转化条件。【结果】嗜热链球菌AR333最优电转化条件为甘氨酸浓度8.3g/L,OD600为0.8,10%甘油(体积比)和0.5 mol/L蔗糖的电转缓冲液,pIB184质粒80 ng,电场强度14 kV/cm,0.4 mol/L山梨醇、2 mmol/L CaCl2和20 mmol/L MgCl2的LM17复苏培养基,复苏时间5 h。【结论】在最优电转化条件下,嗜热链球菌AR333电转化效率达到3.68×10^5 CFU/μg-DNA,比优化前提高了14倍,实现了嗜热链球菌AR333的高效遗传转化,为其功能解析和基因工程改造奠定基础。
- 石俊康贺紫瑾连若琪李晓凤孔令慧艾连中熊智强
- 关键词：响应面法嗜热链球菌电转化
- 四种胆盐水解酶基因在干酪乳杆菌中的异源表达
- 胆盐水解酶(Bile salt hydrolase,BSH,EC 3.5.1.24)是乳酸菌降胆固醇作用过程中的关键酶,该酶能水解结合态牛磺胆酸盐和甘氨胆酸盐,将其转变成氨基酸和游离胆酸.本文根据GenBank 上报道的...
- 熊智强王巧慧宋馨孔令慧王光强夏永军张汇艾连中
- 关键词：胆盐水解酶植物乳杆菌干酪乳杆菌异源表达
- 嗜热链球菌胞外多糖生物合成的研究进展被引量：8
- 2019年
- 嗜热链球菌是一种公认的安全性益生菌,作为重要的食品发酵剂,广泛应用在发酵乳和奶酪等食品工业生产中,在发酵过程中起着重要的作用,日益成为食品科学研究的热点之一。由于与其他微生物菌株相比安全性高,目前在医药保健等行业中也有着广泛的应用。在嗜热链球菌代谢产物研究中,胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)因独特的理化特性和生理功能而备受研究者青睐。嗜热链球菌来源的EPS不但具有降低胆固醇、抗肿瘤和促进肠道粘附等生理功能,而且还能够作为食品添加剂和稳定剂显著改善食品物性。本文重点介绍了嗜热链球菌EPS的生物合成、EPS合成基因簇及其代谢调控,期望为嗜热链球菌EPS生物合成的深入研究提供参考。
- 孔令慧赵林森夏永军张汇艾连中熊智强
- 关键词：嗜热链球菌胞外多糖生物合成
- 基于分子对接策略在干酪乳杆菌中异源表达胆盐水解酶
- 胆盐水解酶（Bile salt hydrolase,BSH,EC 3.5.1.24）是乳酸菌降胆固醇作用中的关键酶,能水解结合态牛磺胆酸盐和甘氨胆酸盐,将其转变成氨基酸和游离胆酸。本文利用Swiss-Model服务器对植...
- 熊智强孔令慧王光强夏永军张汇艾连中
- 关键词：胆盐水解酶植物乳杆菌干酪乳杆菌分子对接异源表达
- 文献传递
