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抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白的构建与表达: 2009年; 目的:抗转铁蛋白受体单链抗体(TfR-scFv)-EGFP融合蛋白真核表达载体的构建与表达。方法:设计两对引物引入连接肽(Gly4Ser)3以及酶切位点HindⅢ和BamHⅠ,采用重叠延伸PCR扩增与构建具有前导肽的L-VH-Linker-VL单链抗体基因,亚克隆至pEGFP-N1,转染COS-7细胞,倒置相差荧光显微镜下观察荧光蛋白表达,流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清与乳腺癌细胞MCF-7及黑色素瘤细胞A375结合活性。结果:测序表明获得了正确的L-VH-Linker-VL单链抗体基因序列;亚克隆至pEGFP-N1后,表达载体转染COS-7细胞,经荧光显微镜观察转染细胞,及通过流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清,证实抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白在转染细胞中分泌性表达,并能够与天然高表达TfR的细胞特异性结合。结论:抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白真核表达载体构建成功,其表达产物具有与TfR阳性细胞结合的活性。; 代维刘静黄鹤文雪袁晓梅雷萍朱慧芬沈关心; 关键词：转铁蛋白受体单链抗体重叠延伸PCR

不同粒径纳米血竭和普通血竭对肿瘤细胞的体外效应被引量：9: 2007年; 目的观察不同粒径血竭纳米颗粒在体外对宫颈癌细胞株Hela、肺癌细胞株A549、肝癌细胞株SMMC7721、卵巢癌细胞株A2780和粒细胞白血病细胞株HL-60的杀伤作用,并探讨其作用机制。方法以不同浓度和不同粒径纳米血竭分别加入培养的上述肿瘤细胞株中,流式细胞仪检测各种细胞的死亡率、凋亡率及其细胞周期,并与普通血竭比较。结果粒径为171,167和23.8 nm的纳米血竭在浓度3.9～31.2 mg.L-1范围对细胞株HL-60的杀伤百分率明显高于普通血竭,其主要作用机制不是诱导细胞凋亡,细胞周期测定表明血竭纳米颗粒主要将HL-60细胞阻滞在G0/G1期。纳米血竭对其他肿瘤细胞的作用与普通血竭差别不明显。结论粒径为171,167和23.8 nm的纳米血竭对肿瘤细胞株HL-60有明显的杀伤作用,其效率高于非纳米血竭。; 朱慧芬杨道锋王敏刘静文雪张悦冯玮龚非力沈关心; 关键词：血竭纳米肿瘤细胞杀瘤效应

转染不同基因的NIT细胞体外抗细胞毒T细胞杀伤作用: 2007年; 目的研究转染FADD缺失突变体（FADDdel）和WeelHu／GFP的胰岛β细胞株（NIT细胞）抵抗细胞毒T细胞的杀伤作用及其分泌胰岛素与细胞增殖所受的影响。方法采用免疫磁珠法测量转染WeelHu基因的NIT细胞培养上清中的胰岛素水平及观察其增殖速度。将分别转染空载体pUC-pIC、pCMV和转染pFADDdel、pCMV-WeelHu、pCMV-WeelHu／GFP的NIT细胞与活化的淋巴细胞共培养，利用^51Cr释放试验检测淋巴细胞对NIT细胞的杀伤作用。结果转染weelHu基因与未转染的NIT细胞胰岛素的分泌和生长速度没有明显变化（P〉0．05）。转染pCMV-WeelHu／GFP或pCMV-WeelHu的NIT细胞其抗淋巴细胞杀伤能力明显高于转染空载体的NIT细胞（P〈0．01），表达weelHu或WeelHu／GFP融合蛋白的胰岛细胞之间抗凋亡能力差异无统计学意义，转染FADDdel在低剂量效靶比时对胰岛β细胞有一定保护作用（P〈0．05），但在高剂量效靶比时与转染空载体比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论表达WeelHu或FADDdel的胰岛细胞可抵抗T细胞的杀伤，且对胰岛素的分泌及细胞增殖无明显影响。; 廖雯君周新荣周华蓉雷萍王敏刘静文雪黄鹤朱慧芬沈关心; 关键词：绿色荧光蛋白质类 FADD

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文雪