林密
- 作品数：37 被引量：147H指数：7
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 羊支原体性肺炎多重PCR病原快速诊断与敏感性药物筛选试验研究
- 该试验从多重PCR病原快速诊断方法和药物防治等方面对羊肺炎霉形体病进行了研究,为生产上防治该病提供了科学依据.建立了一种可以同时识别山羊肺炎支原体和绵羊肺炎支原体的多重PCR检测方法.根据这两类病原的16SrRNA保守核...
- 林密
- 关键词：绵羊肺炎霉形体多重PCR药物防治
- 文献传递
- Pt-Pd合金纳米颗粒标记口蹄疫A型病毒抗体检测的免疫层析方法被引量：1
- 2021年
- [目的]为建立一种新型、高灵敏度,可直观与定量分析的快速检测方法,本研究创新使用具有氧化还原酶活性的合金纳米材料,将其作为标记物制备免疫层析试纸。待反应结束,使用TMB显色剂对免疫反应进行级联放大,可以显著提高检测的灵敏度,不仅可直观判断,也可精确定量分析,这为免疫层析技术标志物筛选与敏感性提高开拓了新的思路与方法。[方法]采用超声水浴法,通过抗坏血酸(AA)还原K2Ptcl4和Na2Pdcl4成功出制备Pt-Pd合金纳米颗粒,将其用于标记口蹄疫A型纯化抗原FMDV-146S,作为捕获抗原纳米标记物,再将纯化的A型表达抗原及其抗体(FMDV-146S-Ab)包被在硝酸纤维素膜(NC)上,分别作为检测线(T线)和质控线(C线),经条件优化,建立口蹄疫A型病毒抗体Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条检测方法。对该免疫层析检测技术进行方法学考核,检测结果定量分析并建立标准曲线,同时与LPB-ELISA进行结果比对。[结果]该试纸条可在10 min内完成定性和定量检测,定量检测灵敏度为1:28/test,线性范围1:26/test—1:29/test;检测A型FMDV阳性血清,敏感性为98%,检测FMDV阴性血清、O型和Asia 1型的FMDV阳性血清以及其他动物常见病毒病阳性血清,特异性为94.8%;该试纸条重复检测效果良好;与OIE推荐LPB-ELISA法比较,相关性好,相关系数为0.9112。[结论]本研究开拓采用Pt-Pd合金纳米颗粒为标记物建立免疫层析方法,并首次应用于口蹄疫病毒抗体检测,结果证实其具备较高灵敏度,相比胶体金灵敏度可提高24倍,同时具备可操作性与重现性。该研究是快速免疫层析技术的新尝试,为合金类纳米材料应用提供新的思路,未来具有实践应用前景。
- 孙燕燕李昕林密李峰松包艳芳陈夏辉杨光曾巧英蒋韬
- 关键词：免疫层析法过氧化物酶
- 八种抗菌药物对绵羊肺炎霉形体的体外敏感性研究被引量：4
- 2003年
- 测定了环丙沙星、单诺沙星、氧氟沙星、红霉素、泰乐菌素、枝原净、四环素、多西环素等 8种抗菌药物对绵羊肺炎霉形体Y98株的体外最小抑菌浓度 (MIC)以及四环素、多西环素分别与红霉素、泰乐菌素和枝原净的联合药敏作用。结果表明 ,环丙沙星、单诺沙星、氧氟沙星、红霉素、泰乐菌素、枝原净、四环素、多西环素对MOY98的MIC分别为 0 .0 2 6、0 .0 4 2、0 .0 73、0 .583、0 .1 67、0 .0 4 2、0 .2 92、0 .2 0 8μg mL。四环素与红霉素的联合药敏指数是 1 ,为相加作用 ;其他联合药敏指数是 0 .5 。
- 刘聚祥林密孙继国乔健
- 关键词：抗菌药物绵羊霉形体体外敏感性
- 口蹄疫病毒单链抗体基因的构建及其推导蛋白三维结构的分子模拟
- 2009年
- 用口蹄疫病毒(FMDV)Asia1/JS/China/2005株灭活抗原免疫家兔,从兔脾细胞中提取RNA作为模板,通过PCR及重叠PCR方法构建出FMDV的单链抗体基因。测序结果显示,序列中有重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)基因,经Blast比较,发现VH、VL的相似性最高分别可达81.0%和93.0%,且在序列中有连接VH及VL的柔性接头(Gly4Ser)3。用EXPASY软件包预测了推导蛋白的特性。运用Swiss-pdb viewer软件的SWISS-Model处理器对构建的单链抗体基因推导的蛋白序列进行了三维结构的分子模拟。拉马钱德兰图证明,所模拟的单链抗体的三维结构较为合理。
- 刘涛周广青马军武林密祁淑芸冯霞马明仁
- 关键词：口蹄疫病毒单链抗体分子模拟
- 口蹄疫病毒定量检测试纸卡及其制备方法
- 本发明涉及口蹄疫病毒定量检测试纸卡及其制备方法，属于口蹄疫病毒快速检测技术领域。本发明所述试纸卡包括卡壳、PVC衬板、吸收垫、硝酸纤维素膜、金标垫和样品垫，所述金标垫上标有兔抗O型、A型或亚洲I型口蹄疫病毒抗体；所述硝酸...
- 蒋韬林密李昕孙燕燕李峰松包艳芳陈夏辉杨光
- 文献传递
- 一种管式化学发光免疫分析技术检测口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体的试剂盒及其应用
- 本发明提供了一种基于管式化学发光免疫分析技术检测口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体的试剂盒及其应用，属于体外检测技术领域。本发明提供的试剂盒包括磁微粒偶联3ABC融合蛋白、酶标3A抗体、标准品、稀释液、浓缩洗涤液和发光底物...
- 付元芳包艳芳林密孙普曹轶梅何莉蒋韬卢曾军刘在新
- 核糖体展示口蹄疫单链抗体库的构建被引量：2
- 2011年
- 目的:构建库容量大、多样性好的核糖体展示口蹄疫单链抗体(scFv)库。方法:分离口蹄疫病毒免疫的兔脾细胞,提取总RNA,用RT-PCR扩增兔抗体的重链可变区(VH)基因和轻链可变区(VL)基因,同时扩增作为间隔区的兔抗体Ck基因;采用重叠延伸PCR(简称SOE-PCR)技术连接VH-VL基因,同时引入T7启动子和核糖体结合位点序列,体外构建核糖体展示scFv库模板,连接pMD18-T载体转化E.coli DH5α大肠杆菌,挑取阳性克隆测序以鉴定scFv组装。结果:成功构建了库容量达8.21×1013的兔源口蹄疫核糖体展示scFv库。结论:构建的大容量兔源性口蹄疫核糖体展示抗体库可以成为进一步筛选特异性口蹄疫单链抗体的实验平台,为开发诊断性口蹄疫单链抗体奠定了很好的实验基础。
- 杨双马军武周广青林密冯霞刘涛代鹏
- 关键词：核糖体展示技术重叠延伸PCR单链抗体库口蹄疫病毒
- 山羊传染性胸膜肺炎支原体和绵羊肺炎支原体对抗菌药物敏感性的研究被引量：11
- 2004年
- 测定了环丙沙星、氧氟沙星、单诺沙星、红霉素、罗红霉素、泰乐菌素、泰妙菌素、四环素等8种药物对羊肺炎支原体两个标准株Y 98和Y goat的体外抑菌浓度以及红霉素与氧氟沙星、泰乐菌素对Y goat和四环素与氧氟沙星、泰乐菌素对Y 98的联合药敏作用。结果表明,这8种抗菌药物对Y goat和Y 98的MIC(μg/mL)分别为:环丙沙星0.223、0.00223,氧氟沙星0.281、0.0140,单诺沙星0.136、0.0140,红霉素0.0218、无效,罗红霉素0.0327、无效,泰乐菌素0.0422、0.0390,泰妙菌素0.0217、0.0520,四环素0.195、0.0520。红霉素与氧氟沙星的联合药敏指数为1,是相加作用;红霉素与泰乐菌素对Y goat的联合药敏指数为1.5,是无关作用;四环素与氧氟沙星、泰乐菌素对Y 98的联合药敏试验指数均为0.375,是协同作用。
- 林密柴静孙继国王爱华
- 关键词：山羊传染性胸膜肺炎支原体绵羊敏感性
- 美国动物疫病监测诊断工作概述被引量：4
- 2016年
- 2013年10月,中国动物疫病预防控制中心组织省级动物疫控机构等单位动物疫病防控专家和管理人员赴美国开展了动物疫病诊断新技术培训。通过专家讲课、互动研讨和实地考察等方式,学习了解了美国动物疫病监测诊断新技术研发与应用现状、动物疫病诊断实验室的先进管理模式以及美国动物疫病防控管理、兽医执业教育、动物健康与福利等方面的内容。
- 翟新验刘兴国李志军赵宏涛曲萍张维谊林密卢旺银陈昌海蔡雪辉梁源祥杨令劼万发春李俊杨松琴孙家猛
- 关键词：动物疫病监测疫病诊断实验室管理兽医实验室动物疫病预防
- 抗口蹄疫病毒单链抗体cDNA T7噬菌体展示文库的构建被引量：2
- 2013年
- 为构建抗口蹄疫病毒单链抗体cDNA T7噬菌体展示文库,利用Trizol试剂提取BALB/c鼠脾B淋巴细胞RNA,采用RT-PCR两步法扩增BALB/c鼠重链可变区和轻链可变区基因,用重叠延伸PCR技术构建抗口蹄疫病毒scFv基因库;在scFv cDNA双链末端加上EcoRⅠ/HindⅢ接头,用内切酶EcoRⅠ和HindⅢ消化接头,形成的双链cDNA两端分别带有EcoRⅠ和HindⅢ黏性末端;将其与含EcoRⅠ和HindⅢ末端的T7Select 10-3b载体连接,经体外包装,BLT5403菌株增殖,文库扩增,进行体外亲和筛选。所构建的文库库容量的原始浓度为1×107 PFU/mL,扩增后文库浓度为9.6×1013 PFU/mL。随机挑取50个噬菌斑进行PCR鉴定,均为阳性,大小约800bp。经测序,序列完全正确。结果表明,成功构建了抗口蹄疫病毒单链抗体cDNA T7噬菌体展示文库。
- 张晓霞马军武周广青代鹏林密冯霞
- 关键词：口蹄疫单链抗体
