秦海斌
- 作品数：7 被引量：19H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家科技基础性工作专项国家科技基础条件平台建设计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 兔出血症病毒抗原捕获ELISA检测方法
- 用RHDV单克隆抗体包被酶标板,以兔多克隆抗体作为夹心抗体,建立兔瘟病毒 (RHDV) 抗原捕获ELISA检测方法,优化反应条件并对该方法的敏感性、特异性、重复性、稳定性等指标进行了测试和评价.
结果表明,单抗...
- 秦海斌刘怀然刘家森姜骞韩凌霞司昌德曲连东
- 关键词：兔出血症病毒ELISA检测单克隆抗体兔瘟病毒
- 文献传递
- 兔出血症病毒抗原捕获ELISA检测方法被引量：7
- 2007年
- 为了有效地预防和根除山羊痘，研制能够区分自然感染和疫苗免疫的标记疫苗。本研究在山羊痘病毒（goat pox virus，GPV）疫苗株AV41胸苷激酶（thymidine kinase，TK）基因克隆、鉴定的基础上，构建转移载体。将痘苗病毒（Vaccinia Virus，VV）晚期启动子P11和大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因（LacZ）报告基因片段插入含有TK片段同源臂的载体pTK的KpnI酶切位点，经酶切、PCR鉴定出，命名为pTK-LacZ。用脂质体法转染感染了GPVAV41株的犊牛睾丸（bovine testes，BT）细胞，待出现80%以上的细胞病变时收获病毒，经过连续9代蓝色蚀斑筛选、纯化和PCR鉴定，获得纯化的表达LacZ基因、TK功能缺失的重组病毒，命名为rGPV-LacZ。生物学特性研究显示，LacZ基因的插入不影响重组病毒的增殖特性，其毒力、生长特性与亲本株相似，保持原有疫苗株的生长特性，而且在BT细胞和羔羊睾丸（lamb testes，LT）细胞连续传20代遗传性状很稳定。本研究筛选、纯化的重组病毒rGPV-LacZ可以区分自然感染和疫苗免疫动物，为进一步研制山羊痘病毒基因工程标记疫苗奠定了基础。
- 秦海斌刘怀然刘家森姜骞韩凌霞司昌德曲连东
- 关键词：重组山羊痘病毒标记疫苗
- 兔出血症病毒单克隆抗体的制备及鉴定
- 目的利用杂交瘤技术制备抗兔出血症病毒(RHDV)单克隆抗体,为RHDV检测方法建立及相关研究奠定基础。方法自病料中经蔗糖密度梯度离心法纯化病毒,免疫BALB／c小鼠,以杂交瘤技术制备抗RHDV单克隆抗体,用昆虫细胞表达重...
- 刘怀然秦海斌刘家森司昌德韩凌霞姜骞曲连东
- 关键词：兔出血症病毒单克隆抗体
- 文献传递
- 兔出血症病毒抗原捕获ELISA检测方法的建立被引量：6
- 2008年
- 用兔出血症病毒(RHDV)单克隆抗体包被酶标板,以兔多克隆抗体作为夹心抗体,建立RHDV抗原捕获ELISA检测方法,优化反应条件并对该方法的敏感性、特异性、重复性、稳定性等指标进行了测试和评价。结果表明,单抗最佳包被质量浓度为1mg/L,兔多抗血清最佳质量浓度为4mg/L。本方法可特异性地检测出兔肝脏病料中的RHDV,纯化病毒的最低检出量为26μg/L。对已知阳性样品的检测显示,捕获ELISA检测的病毒滴度是HA试验的3～13倍。对67份可疑病料,捕获ELISA阳性检出率为62.7%,HA试验阳性检出率为55.2%。用不同批次包被的酶标板重复检测已知样品显示出良好的重复性。本方法敏感性、特异性、稳定性良好,可应用于RHDV的快速、批量、特异检测。
- 秦海斌刘怀然曲连东刘家森韩凌霞姜骞李亚明杨增岐
- 关键词：单克隆抗体兔出血症
- 兔出血症病毒单克隆抗体的制备及鉴定被引量：4
- 2009年
- 为建立兔出血症病毒（RHDV）的检测方法及为变异株监测做储备，用蔗糖密度梯度离心法纯化的RHDV免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与SP2／0细胞进行融合，以昆虫细胞一杆状病毒表达的重组VP60蛋白建立的间接ELISA法筛选抗RHDV单克隆抗体杂交瘤细胞，并对其主要生物学特性进行了鉴定。结果表明，筛选出6株单抗，它们分属于IgG1（AD4，AG10，DE2）、IgG2b（BC9，BE8）和IgM（BH3）亚类；这6株单抗杂交瘤细胞的平均染色体数为87～89条，将其冻存6个月后复苏，在体外传20代的过程中分泌的抗体效价变化不大，具有很好的稳定性；Western-blot及免疫荧光分析表明，单抗DE2、AG10识别线性表位，其余4株单抗识别构象型表位；竞争ELISA试验表明，这6株单抗可识别5种抗原表位。
- 刘怀然秦海斌刘家森单安山曲连东
- 关键词：兔出血症病毒单克隆抗体
- EIAV基因转移载体转录后调控元件的优化
- 2008年
- 【目的】为了提高马传染性贫血病毒(EIAV)基因转移载体质粒pcPPTPRE(+)的外源蛋白表达能力,对其转录后调控元件进行优化。【方法】将PCR扩增土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck Hepatitis Virus,WHV)转录后调控元件(WPRE),克隆于pGM-T载体获得重组质粒pGM-WPRE,利用NotⅠ酶将WPRE亚克隆入pcPPTPRE(+),筛选WPRE正向连接的重组质粒pcPPTWPRE,采用磷酸钙法分别将pcPPTWPRE和pcPPTPRE(+)转染HEK293细胞和DF-1细胞,利用荧光显微镜观察EGFP蛋白的表达,利用流式细胞仪检测转染细胞中EGFP阳性细胞的表达率。【结果】在HEK293细胞中,pcPPTWPRE表达外源基因的能力极显著优于pcPPTPRE(+);在DF-1细胞中,pcPPTWPRE与pcPPTPRE(+)表达外源基因的能力均不强,但前者略优于后者。【结论】土拨鼠肝炎病毒转录后,调控元件(WPRE)可以明显增强EIAV载体质粒的外源蛋白表达能力,为高表达能力伪型EIAV重组病毒的获得奠定了基础,同时也为其他病毒载体的构建提供了借鉴。
- 李亚明韩凌霞曲连东司昌德秦海斌杨增岐于海波徐佳
- 关键词：马传染性贫血病毒土拨鼠肝炎病毒基因转移载体
- 兔出血症病毒单克隆抗体的制备及抗原捕获ELISA检测方法的建立
- 兔出血症(Rabbit haemorrhagic disease,RHD)是由兔出血症病毒(Rabbit haemorrhagic disease virus，RHDV)引起的兔的一种急性、败血性、高度致死性传染病。该病...
- 秦海斌
- 关键词：兔出血症病毒单克隆抗体血清学检测方法阳性检出率抗原位点
- 文献传递
