高洁
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：天津科技大学生物工程学院工业微生物教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 基于植物p53保守序列构建RNAi的DNA片段方法
- 2010年
- 构建p53基因RNA干涉DNA片段的目的,是将其应用于植物悬浮培养中的细胞周期调节.依据拟南芥p53基因与其他高等植物具有高度保守区域的特点,合成其两个区域的核苷酸片段(Ⅰ和Ⅱ)及其相应的反向片段(Ⅰ′和Ⅱ′),并在Ⅱ和Ⅱ′端部分别引入内含子两个端部核苷酸序列.在相互连接后进行PCR选择扩增,其产物再与克隆载体连接并经过蓝白斑筛选获得重组DNA;在电泳和核苷酸测序鉴定后表明,最终得到了Ⅰ–5′–内含子–Ⅱ′–Ⅱ–内含子–3′–Ⅰ′序列的重组DNA片段.该片段两端含多克隆位点,通过插入植物的表达载体进入细胞基因组,在细胞中其转录产物将形成发夹结构,经胞内酶切后可以形成短的双链RNA片段,将具有干涉p53基因表达的功能.
- 高洁李兴林张黎明肖天剑
- 关键词：拟南芥P53基因保守序列
- 乌拉尔甘草悬浮单细胞的筛选及培养被引量：2
- 2009年
- 乌拉尔甘草种子在消毒后培养无菌苗,截取无菌苗子叶、上胚轴和下胚轴等作为外植体,诱导和继代培养成松散型愈伤组织,然后在振荡培养后过筛获得悬浮单细胞;再对悬浮液进行多级稀释、培养制备小细胞团.结果表明,在含1.0.mg/L.2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、1.0.mg/L.α-萘乙酸(NAA)、1.0.mg/L6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、0.3.mg/L激动素(KT)的MS培养基中,上胚轴能在3～5次继代培养后获得松散型愈伤组织,过80目筛可以获得悬浮单细胞和小细胞团;同样的培养基,悬浮单细胞在琼脂表面、珍珠岩表面和看护培养中培养,看护培养的细胞生长最快、小细胞团形态最佳.
- 肖天剑李兴林蔡津高洁
- 关键词：乌拉尔甘草愈伤组织
