王晓囡
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：协和青年科研基金云南省应用基础研究计划面上项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 表达轮状病毒nsp4基因重组腺病毒的构建与免疫评价被引量：2
- 2014年
- 目的:应用非复制腺病毒表达系统构建表达人轮状病毒非结构蛋白4(NSP4)的重组腺病毒,初步评价其免疫保护效果。方法:构建含野生轮状病毒NSP4基因的穿梭质粒pshuttle-NSP4,与腺病毒骨架质粒pAdeasy经同源重组后在Ad-293细胞中包装获得pAd-NSP4重组腺病毒颗粒。电镜、RT-PCR、免疫荧光等方法鉴定病毒特征及在体外细胞中的表达。肌肉注射及滴鼻方式免疫小鼠,检测小鼠血清抗体效价及其中和保护效果。结果:获得了滴度为108.25CCID50/ml的重组腺病毒pAd-NSP4,免疫荧光检测到特异性目的蛋白的表达。二次免疫后肌肉注射和滴鼻小鼠的ELISA血清平均效价分别为1∶320和1∶1436.8;中和抗体效价1∶45.3和1∶71.8。结论:表达轮状病毒NSP4蛋白的非复制型重组腺病毒颗粒具有良好的免疫原性。滴鼻途径比肌肉注射可更加有效地诱导小鼠的免疫应答。
- 谢力王晓囡李杨严敏曹颖李鸿钧孙茂盛
- 关键词：轮状病毒NSP4重组腺病毒NSP4
- PDX-1腺病毒载体构建及其在脂肪间充质干细胞中的表达被引量：2
- 2014年
- 研究通过重组腺病毒表达系统包装重组腺病毒Ad-PDX-1,通过重组腺病毒将Pancreatic duodenal homeobox1(PDX-1)导入大鼠脂肪间充质干细胞(rat adipose mesenchymal stem cells,rASCs)中,评价PDX-1在rASCs中的表达情况,为进一步探讨ASCs-PDX-1在体内修复糖尿病的潜能提供了实验基础。研究通过构建pAdEasy-CMV-PDX-1腺病毒质粒,在重组腺病毒表达系统PadEasy-1中成功包装出重组腺病毒Ad-PDX-1。培养及鉴定大鼠脂肪间充质干细胞,将携带PDX-1的重组腺病毒感染rASCs,通过RT-PCR、免疫荧光及免疫印迹(Western blotting)检测PDX-1在rASCs中的表达及产物定位。结果显示,构建的重组腺病毒包装成功,具有较高滴度,并能成功感染大鼠脂肪间充质干细胞。PDX-1蛋白定位于细胞核,并可稳定表达,为后续将大鼠脂肪间充质干细胞向胰岛β细胞诱导分化奠定了基础,为糖尿病的干细胞治疗提供依据。
- 王晓囡周艳严敏严敏李松鲁帅尧李鸿钧
- 关键词：脂肪间充质干细胞腺病毒载体
- Pdx1和Ngn3定向诱导脂肪间充质干细胞为胰岛细胞并移植治疗Ⅰ型糖尿病大鼠模型的初步研究
- 王晓囡
- 携带eGFP基因慢病毒颗粒的制备及鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的:通过eGFP基因慢病毒颗粒的包装和感染,明确重组慢病毒对外源基因在细胞中的转导能力。方法:把慢病毒质粒Lv105-eGFP转染到293 Ta细胞中并包装为慢病毒颗粒,经电镜检测病毒颗粒和实时定量PCR(qPCR)测定病毒滴度,之后感染H1299细胞,通过荧光显微镜观察比较eGFP在靶细胞中的表达效率。结果:eGFP在包装细胞中转染和表达效率在48h时达90%以上,到72h时细胞病变效应(CPE)逐渐显著;电镜检测可看到典型的慢病毒颗粒形态特征;病毒原液的滴度是4.4×107VG/mL、浓缩液的是2.68×1010VG/mL;1μL病毒原液感染H1299细胞时,eGFP表达水平可达10%、增加到100μL感染时表达水平达到99%以上,证明eGFP基因得到有效转导并可在细胞中高水平表达绿色荧光蛋白。结论:成功包装了eGFP慢病毒颗粒并可在靶细胞中获得高效表达。
- 陈瑜杨耀云鲁帅尧王晓囡和占龙乞素冬李鸿钧
- 关键词：细胞
- 携带hFGF21基因慢病毒的制备及鉴定
- 2013年
- 目的包装人成纤维细胞生长因子21(hFGF21)慢病毒颗粒、确定包装细胞人胚肾293T(HEK293T)细胞的形态特征以及对目的基因的转导能力。方法对慢病毒重组质粒Lv105-hFGF21进行测序鉴定,在HEK293T细胞中包装为慢病毒颗粒并浓缩,经反转录PCR(RT-PCR)和电镜检测鉴定后,利用实时定量PCR测定病毒滴度。然后感染Vero细胞,经RT-PCR检测hFGF21 mRNA的表达、免疫荧光检测hFGF21蛋白的表达。结果 RT-PCR结果表明重组慢病毒能转录hFGF21 mRNA,电镜检测结果可以看到典型的慢病毒颗粒形态特征,其直径在40～70 nm;重组病毒原液的滴度是3.68×108VG/mL、浓缩液的滴度是1.25×109VG/mL;重组慢病毒感染Vero细胞后经RT-PCR检测到细胞中有hFGF21mRNA表达,免疫荧光测到Vero细胞中有hFGF21蛋白表达。结论成功包装了hFGF21慢病毒颗粒并在靶细胞中获得表达。
- 鲁帅尧严敏王晓囡和占龙周艳赵远禹文海李鸿钧
- 关键词：细胞
