李燕
- 作品数:3 被引量:1H指数:1
- 供职机构:贵阳医学院附属医院更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金贵州省优秀科技教育人才省长资金项目贵州省科技基础条件平台项目更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- HOXC4基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的表达被引量:1
- 2013年
- 目的探讨HOXC4基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的作用机制,从而为进一步研究其在造血发育中的功能奠定基础。方法提取斑马鱼总RNA,利用RT-PCR克隆得到HOXC4基因片段,将克隆得到的基因片段和载体pCS2+用限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,把基因片段插入pCS2+中,重组质粒经双酶切及测序鉴定后,采用T3RNA聚合酶体外转录体系制备地高辛标记的HOXC4基因反义mRNA探针,然后行全胚胎原位杂交。结果构建HOXC4-pCS2+重组质粒,获得地高辛标记的反义mRNA探针并且完成其在野生型斑马鱼中的全胚胎原位杂交,显示HOXC4基因在Tuebingen野生型斑马鱼神经系统高表达。结论得到HOXC4基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的基本表达情况,为进一步研究该基因在造血发育过程中的功能奠定了基础。
- 马健娟何志旭舒莉萍姚冬静李莉李燕
- 关键词:斑马鱼原位杂交
- Irx5a基因与Hoxb4基因在造血发育早期相关性研究
- 目的 构建Irx5a基因部分序列的体外转录载体Irx5a-pCS2+,通过体外转录系统制备其反义mRNA探针;研究Irx5a基因在斑马鱼胚胎发育早期的表达情况,并比较与在原始造血组织中过表达Hoxb4基因的转基因系斑马鱼...
- 许威舒莉萍李燕丁可军姬牧远杨小燕何志旭
- 基于CRISPR/Cas9系统对斑马鱼hoxb4基因的编辑及其突变体基因型的初筛
- 2015年
- 采用高效基因编辑系统CRISPR/Cas9构建hoxb4基因敲除斑马鱼模型,进行hoxb4基因功能的研究。根据hoxb4基因的一号外显子的正义链及反义链设计3个长20 bp的sg RNA,分别靶向ExonⅠ的192#位点,244#位点及313#位点。化学合成sg RNA的寡核苷酸序列,经过酶切克隆进p T7-g RNA质粒中,构建g RNA的体外转录载体并通过体外转录得到靶位点的g RNA。将质粒p SP6-2s NLS-sp Cas9线性化然后在体外转录得到Cas9的m RNA并进行加A尾,将以上靶位点的g RNA与Cas9的m RNA共注射入单细胞期的斑马鱼胚胎内,提取基因组DNA,PCR扩增出目的基因片段并使用T7EI酶切测效,最后将PCR产物连入p MD19-T simple载体中,挑取阳性克隆进行菌落PC R鉴定,然后经Sanger测序检测突变类型。结果显示,靶位点的sg RN A寡核苷酸双链成功连入p T7-g RNA质粒中且序列正确;其中靶向ExonⅠ的313#位点的sg RNA可成功编辑斑马鱼hoxb4基因,T7 EⅠ检测其敲除效率高达26.5%,并测序得到4种阳性突变型。通过CRISPR/Cas9系统成功编辑斑马鱼hoxb4基因并测序鉴定其突变类型,为HOXb4基因功能的研究提供了可靠的基因敲除方法。
- 袁梦何志旭舒莉萍袁家侃刘丰李燕