张海涛
- 作品数：5 被引量：35H指数：4
- 供职机构：新疆医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“春晖计划”国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 细粒棘球绦虫抗原EgAgB8／1和EgAgB8／3亚单位基因在虫体发育过程中的阶段性表达被引量：12
- 2009年
- 目的研究细粒棘球绦虫抗原B(EgAgB)8 ku 1和3亚单位基因家族成员(EgAgB8/1、EgAgB8/3)在虫体发育各阶段(虫卵、棘球蚴生发层、原头蚴及成虫)基因表达的差异,为包虫感染中间宿主和终末宿主的免疫学诊断筛选期特异性优势表达抗原。方法分别从细粒棘球绦虫成虫、虫卵、原头蚴和棘球蚴生发层提取总RNA,用Avian Myelo-blastosis Virus Reverse Transcriptase XL反转录成cDNA,根据EgAgB8/1和EgAgB8/3序列设计跨越内含子的基因特异性引物。基因表达差异应用SYBR GreenⅠreal-time PCR进行定量分析,并用内参对照基因actinⅡ来标准化定量结果。结果Real-time PCR检测显示,EgAgB8/1在棘球蚴生发层大量表达,SQ/Actin=68.874;EgAgB8/3在成虫阶段大量表达,SQ/Actin=1 905.512。结论EgAgB 2个亚单位基因的表达在虫体发育各个阶段显现出明显差异。提示EgAgB8/1可作为包虫感染中间宿主免疫学诊断最佳候选目的抗原,而EgAgB8/3可作为包虫感染终末宿主免疫学诊断的靶抗原。EgAgB 2个亚单位基因的阶段差异表达可能与其虫体发育不同阶段特有的生物学功能有关。
- 张海涛马秀敏吾拉木·马木提马海梅贾海英曹春宝丁剑冰温浩
- 关键词：细粒棘球绦虫荧光定量PCR
- 细粒棘球蚴egG1Y162抗原基因的克隆及蛋白质序列分析被引量：15
- 2008年
- 目的克隆细粒棘球蚴egG1Y162基因序列并进行蛋白序列对比分析。方法从细粒棘球蚴原头蚴提取mRNA,mRNA反转录为cDNA。设计特异引物,以cDNA为模板扩增egG1Y162基因,构建PUCm-T/egG1Y162重组质粒,经PCR、酶切及测序鉴定后进行序列分析。结果egG1Y162 cDNA为459bp,编码153个氨基酸;同源性比较表明,egG1Y162 cDNA与emY162同源性为95%,与eg95的同源性为30.61%。结论成功克隆egG1Y162抗原基因,egG1Y162蛋白质氨基酸序列与emY162有很高的相似性,但同其他抗原蛋白质序列存在明显差异,所以egG1Y162是一种新的抗原基因。
- 曹春宝马秀敏丁剑冰贾海英吾拉木·马木提张海涛朱明马海梅吕国栋温浩
- 关键词：细粒棘球蚴CDNA
- 细粒棘球绦虫重组pET30a-EgA31疫苗的构建和诱导表达被引量：5
- 2009年
- 克隆细粒棘球绦虫EgA31抗原基因,构建pET30a-EgA31原核表达载体,并在大肠埃希菌宿主系统中表达EgA31重组蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE分析。从细粒棘球绦虫成虫组织中提取总RNA,反转录生成cDNA,以此cDNA为模板RT-PCR克隆获得EgA31抗原基因,将其克隆至pUCm-T载体,测序确定其正确性。利用定向克隆技术将EgA31抗原基因片段克隆至原核表达质粒pET30a上,转化E.coliDH5α,根据选择标记的卡那霉素抗性基因筛选到阳性克隆,通过PCR分析和酶切鉴定筛选出阳性克隆。IPTG初步诱导和表达pET30a-EgA31重组蛋白,SDS-PAGE电泳检测,并经凝胶图像分析确定目的蛋白的表达水平。测序表明选取的pET30a-EgA31阳性克隆均为正确连接EgA31抗原基因的重组质粒。经IPTG诱导后重组蛋白得到成功表达,在相对分子量约为31kDa处有表达条带,表达量约占菌体总蛋白质的26%。成功克隆并构建了pET30a-EgA31原核表达质粒,初步诱导表达出EgA31重组蛋白,为进一步研究其免疫特性奠定了基础。
- 贾海英马海梅丁剑冰曹春宝吾拉木·马木提马秀敏张海涛朱明吕国栋温浩
- 关键词：细粒棘球绦虫原核表达质粒
- 细粒棘球绦虫抗原B8kDa亚单位在虫体发育过程中的阶段性表达研究被引量：4
- 2011年
- 目的研究细粒棘球绦虫抗原B(EgAgB)8 kDa亚单位基因家族成员(EgAgB8/1、EgAgB8/2、EgAgB8/3、EgAgB8/4、EgAgB8/5)在虫体发育各阶段(虫卵、棘球蚴生发层、原头蚴及成虫)基因表达的差异,为包虫感染中间宿主和终末宿主的免疫学诊断筛选期特异性优势表达抗原。方法分别从细粒棘球绦虫成虫、虫卵、原头蚴和棘球蚴生发层提取总RNA,用Avian Myeloblastosis Virus Reverse Transcriptase XL(TaKaRa,Japan)反转录成cDNA,根据EgAgB 5个亚单位(EgAgB8/1、EgAgB8/2、EgAgB8/3、EgAgB8/4、EgAgB8/5)序列设计跨越内含子的基因特异性引物。基因表达差异应用SYBR Green I荧光实时定量PCR(Real-ti me PCR)技术进行定量分析,并用内参对照基因actin II来标准化定量结果。结果荧光实时定量PCR结果分析,EgAgB8/1和EgAgB8/2在棘球蚴生发层大量表达(表达量为68.874和16.258),EgAgB8/3和EgAgB8/5在成虫阶段有大量表达(表达量分别为1 905.512和180.315),EgAgB8/4在成虫、虫卵和原头蚴中的表达量分别为0.001、0.088和0.102,均较棘球蚴生发层表达量(3.576)低。结论 EgAgB 5个亚单位的基因表达在虫体发育各个阶段显现出明显差异。EgAgB8/1和EgAgB8/2可作为包虫感染中间宿主免疫学诊断最佳候选目的抗原,而EgAgB8/3可作为包虫感染终末宿主免疫学诊断的靶抗原。EgAgB 5个亚单位的阶段差异表达可能与其虫体发育不同阶段特有的生物学功能有关,有待进一步研究。
- 张海涛陈璐马海梅马秀敏吾拉木.马木提
- 关键词：细粒棘球绦虫抗原B荧光定量PCR
- 细粒棘球绦虫抗原B8-KDa亚单位在虫体发育过程中的选择性表达
- 目的:研究细粒棘球绦虫抗原B /(EgAgB/) 8-kDa亚单位基因家族成员/(EgAgB8//1、EgAgB8//2、EgAgB8//3、EgAgB8//4、EgAgB8//5/)在虫体发育各阶段/(虫卵、棘球蚴生发...
- 张海涛
- 关键词：细粒棘球绦虫荧光定量PCR
- 文献传递
