张俊
- 作品数：11 被引量：8H指数：2
- 供职机构：安徽医科大学附属省立医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省人才开发基金安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 绿色荧光蛋白标记的大鼠C6胶质瘤模型的构建
- 2014年
- 目的探讨绿色荧光蛋白(GFP)标记的大鼠C6胶质瘤模型的构建方法并观察其作用。方法用带有增强型GFP(EGFP)基因的p EGFP-C1质粒转染C6细胞,通过G418筛选获得稳定表达EGFP的C6细胞克隆EGFPC1-C6细胞。采用立体定向法,将浓度为1×106/L的EGFP-C1-C6细胞悬液10μL注入16只SD大鼠的颅内,建立EGFP标记的大鼠C6胶质瘤模型。观察大鼠接种肿瘤细胞后的反应及存活时间。分别于造模后第7、14、21天对大鼠行头颅MRI检查,计算肿瘤体积。常规HE染色观察病理学形态,激光共聚焦显微镜下观察胶质瘤的浸润及侵袭情况。结果成功培养了具有EGFP标记的EGFP-C1-C6细胞,MRI及病理学检查发现所有大鼠颅内均有肿瘤生长,肿瘤体积为(244.60±36.06)mm3,采用激光共聚焦显微镜观察易于发现经EGFP标记的肿瘤组织,肿瘤区域清晰可见,并较易发现单个肿瘤细胞的远处浸润生长。结论采用EGFP-C1-C6细胞成功构建了大鼠C6胶质瘤模型,该模型有助于显示胶质瘤细胞的侵袭、转移及微小侵袭灶。
- 高歌牛朝诗张俊董永飞李冬雪费小瑞丁宛海
- 关键词：绿色荧光蛋白胶质瘤动物模型
- PEX基因修饰人骨髓间质干细胞体外培养鉴定的研究被引量：2
- 2009年
- 目的构建PEX基因真核表达载体并转染人骨髓间质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hMSC),探讨PEX修饰hMSC的可行性。方法采用全贴壁细胞分离法培养hMSC,流式细胞技术鉴定其表面标记物;分子克隆技术构建PEX基因真核表达载体,重组质粒转染hMSC,验证真核表达载体在hMSC中的表达。结果成功培养hMSC并成功构建PEX基因真核表达载体,PEX在转染的hMSC中高表达。结论构建的PEX基因真核表达载体可用于转染hMSC,为进一步探讨其在胶质瘤治疗中的作用奠定了基础。
- 高歌牛朝诗董永飞张俊李冬雪刘于海李明武汤深凤
- 关键词：神经胶质瘤间质干细胞基质金属蛋白酶
- 应用Bac-to-Bac杆状病毒表达体系在sf9细胞中重组表达保守性多巴胺能神经营养因子
- 目的:应用bac-to-bac杆状病毒表达体系在sf9昆虫细胞中表达重组CDNF蛋白。
方法:应用Trizol法提取小鼠组织总RNA,RT-PCR扩增得到小鼠CDNF基因全长/(564bp/)片段,将CDNF基因...
- 张俊
- 关键词：杆状病毒表达系统帕金森病
- 文献传递
- 应用bac—to—bac杆状病毒表达系统在sf9昆虫细胞中重组表达保守性多巴胺能神经营养因子蛋白
- 2011年
- 保守性多巴胺能神经营养因子（CDNF）是一类新型神经营养因子，可能对帕金森病（PD）具有一定的治疗作用。我们通过bac—to—bac杆状病毒表达系统，在sf9昆虫细胞中成功诱导表达出重组CDNF蛋白。
- 张俊牛朝诗梅加明汤深凤李静
- 关键词：杆状病毒表达系统神经营养因子多巴胺能BAC保守性F蛋白
- 保守性多巴胺能神经营养因子重组杆状病毒转移载体的构建及鉴定
- 2010年
- 目的 构建并鉴定小鼠保守性多巴胺能神经营养因子（mCDNF）重组杆状病毒转移载体pFastBacHTb-mCDNF. 方法 应用Trizol法提取小鼠组织总RNA,反转成cDNA,经PCR扩增得到带有预定酶切位点（BamH Ⅰ、Xho Ⅰ）的mCDNF基因全长（564 bp）,回收片段并克隆至pGEM-T载体,测序验证PCR结果的准确性.将mCDNF定向克隆到pFastBacHTb载体,构建含有mCDNF基因的重组质粒pFastBacHTb-mCDNF,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,摇菌抽取质粒进行测序和双酶切鉴定. 结果 RT-PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳显示得到预定大小的目的 条带（564 bp）,mCDNF的T-A克隆经蓝白斑抗性筛选获得阳性克隆,PCR及测序均提示pGEM-T-CDNF载体成功构建.重组质粒pGEM-T-mCDNF和pFastBacHTb载体进行BamH Ⅰ、Xho Ⅰ限制性内切酶酶切后再连接,得到pFastBacHTb-mCDNF重组质粒,并经PCR、酶切及测序验证无误. 结论 本实验成功构建了mCDNF重组杆状病毒转移载体pFastBacHTb-mCDNF,为该营养因子的进一步研究奠定了一定基础.
- 张俊牛朝诗高歌梅加明汤深凤
- 关键词：帕金森病
- 应用bac—to—bac杆状病毒表达系统在sf9昆虫细胞中重组表达CDNF蛋白
- 2011年
- 我们通过bac—to—bac杆状病毒表达系统，在st9昆虫细胞中诱导表达出重组CDNF蛋白，现报道如下。
- 张俊牛朝诗梅加明汤深凤李静
- 关键词：杆状病毒表达系统BACF蛋白CDN
- pDsRed-C1-CDNF真核表达载体在大鼠骨髓间质干细胞中的表达被引量：2
- 2010年
- 背景:骨髓间质干细胞是一类具有多向分化能力的成体干细胞,目前,已有将其作为细胞载体对帕金森病进行治疗的相关报道。目的:构建pDsRed-C1-CDNF真核表达载体,并诱导其在大鼠骨髓间质干细胞中表达。方法:通过RT-PCR的方法从小鼠组织中扩增出CDNF基因片段,并在其两端引入XhoI、BamHI限制性内切酶酶切位点,然后将其克隆至pDsRed-C1真核载体,构建pDsRed-C1-CDNF真核表达载体,并通过Lipofectin2000将其转染至大鼠骨髓间质干细胞中。结果与结论:pDsRed-C1-CDNF真核表达载体经双酶切、单酶切、PCR及测序验证正确,提示已成功构建pDsRed-C1-CDNF真核表达载体并已转染至大鼠骨髓间质干细胞中。
- 张俊牛朝诗高歌汤深凤李静
- 关键词：帕金森病真核表达载体荧光蛋白骨髓间质干细胞
- 大鼠脑干胶质瘤模型的建立及MRI特点
- 2009年
- 目的建立大鼠脑干胶质瘤模型,并研究成瘤鼠运动功能及胶质瘤MRI成像特点。方法采用大鼠脑立体定向仪,将C6胶质瘤细胞接种至SD大鼠脑干内。MRI动态观察肿瘤生长情况,并观察接种C6胶质瘤细胞后大鼠的运动能力﹑生存周期等。结果C6胶质瘤细胞接种成功率为100%。生存分析表明:大鼠于接种后第16～22天死亡。接种后第7天,MRI即可检出肿瘤生长,荷瘤鼠的运动能力随着成瘤时间的推移逐渐减弱。结论大鼠脑干胶质瘤模型成瘤率高,有良好的可重复性和可预测性。MRI观察该模型具有脑干胶质瘤成像的特点,细胞接种后10～18d是最佳观测期。
- 高歌牛朝诗王昌新张俊费小瑞董永飞丁宛海
- 关键词：神经胶质瘤脑干磁共振成像
- 预热激对6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞神经毒性损伤的保护作用
- 2011年
- 目的探讨预热激对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)神经毒性损伤的保护作用及其机制。方法对实验组SH-SY5Y细胞进行预热激(42±0.5)℃处理,再通过6-OHDA对其进行神经毒性诱导,未行预热激处理细胞作为对照组。逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测不同热激时间(15 min、30 min、60 min)SH-SY5Y细胞内葡萄糖调节蛋白(GRP78、GRP94)的表达水平;显微镜下观察细胞形态学变化,并用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测SH-SY5Y细胞活性情况。结果 6-OHDA对SH-SY5Y细胞的神经毒性损伤呈剂量依赖性及时间依赖性关系,实验组SH-SY5Y细胞较对照组所受的神经毒性损伤轻(P<0.05),且实验组间差异也具有统计学意义(P<0.05);SH-SY5Y细胞中GRP78和GRP94 mRNA表达水平与热应激时间正相关(P<0.05)。结论预热激可降低6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞的神经毒性损伤作用,且热激过程中SH-SY5Y细胞中GRP78和GRP94表达上调。
- 张俊牛朝诗梅加明汤深凤
- 关键词：葡萄糖调节蛋白78葡萄糖调节蛋白94SH-SY5Y6-羟多巴胺
- PEX基因修饰骨髓间质干细胞对C6胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响被引量：5
- 2010年
- 目的探讨PEX基因修饰的骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)对C6胶质瘤细胞的作用及机制。方法分子克隆技术构建PEX基因真核表达载体并转染MSC,G418筛选获取稳定表达PEX基因的MSC(MSC-PEX),将不同数量的MSC-PEX细胞与C6胶质瘤细胞进行共培养试验,用水溶性四氮唑法(WST-1)观察MSC-PEX对C6胶质瘤细胞增殖的影响,用Annexin-Ⅴ-FITC/PI双染荧光观察C6胶质瘤细胞凋亡的形态学变化,并用Annexin-Ⅴ-FITC/PI双标记法通过流式细胞仪检测胶质瘤细胞凋亡率。结果成功获得稳定表达PEX基因的MSC-PEX,MSC-PEX抑制C6胶质瘤细胞的生长作用较明显,Annexin-Ⅴ-FITC/PI双染荧光发现C6胶质瘤细胞发生凋亡形态改变;流式细胞仪检测显示:MSC-PEX转染组和DMEM对照组的凋亡率分别为16.7%和1.3%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PEX基因修饰的骨髓间质干细胞抑制胶质瘤细胞增殖并诱导其凋亡,为胶质瘤的治疗奠定理论基础。
- 高歌牛朝诗张俊董永飞李明武丁宛海
- 关键词：间质干细胞骨髓
