刘功振
- 作品数：41 被引量：145H指数：6
- 供职机构：济南大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 弓形虫免疫作图蛋白1在大肠埃希菌中的重组表达及纯化
- 目的:克隆刚地弓形虫强毒RH株的免疫作图蛋白1(IMP1),并在大肠埃希菌内进行重组表达、纯化和鉴定.
方法:以刚地弓形虫RH株的cDNA为模板,PCR(聚合酶链反应)扩增IMP1基因的完整开放阅读框(ORF序...
- 尹昆刘功振李瑾徐超朱嵩李琛琛赵桂华
- 关键词：弓形虫大肠埃希菌可溶性表达蛋白纯化
- 文献传递
- 蛋鸡中出现ALV-J和ALV-B混合感染
- 2009年3月,山东某养殖户饲养160日龄海兰白商品蛋鸡发病,鸡群整体消瘦,精神沉郁,鸡冠苍白无血色,粪便稀薄。经病理学、免疫组织化学和分子生物学检测诊断为禽白血病J型和B型的混合感染。剖检观察3只鸡肝脏均弥散性肿大、呈...
- 刘功振成子强张洪海刘青邱波王峰王晓伟陈洪博
- 关键词：免疫组织化学蛋鸡分子生物学禽白血病病毒
- 文献传递
- 新生儿及婴儿TORCH感染血清学检测分析被引量：6
- 2019年
- 目的了解青岛地区新生儿及婴儿TORCH感染状况和感染特点。方法应用间接化学发光免疫分析法(CLIA)检测1 196例新生儿和婴儿血清中的TORCH特异性抗体,并进行统计分析。结果受检患儿中TORCH-IgM阳性率为1.67%,其中以CMV和HSV感染为主;患儿中TORCH-IgG抗体阳性率为99.16%,其中以CMV感染最常见,阳性率为94.31%;患儿混合感染率达到93.31%,以HSV和CMV混合感染为最多,阳性率达85.45%;新生儿及婴儿IgG抗体检测均以CMV-IgG抗体阳性率最高,分别为96.28%、82.76%;男性和女性患儿CMV-IgG阳性率均为最高,分别为94.36%、94.27%。结论青岛地区TORCH感染以CMV、HSV感染及二者混合感染为主,既往感染阳性率较高,新近感染阳性率较低,新近感染患儿并发症主要是呼吸系统和消化系统疾病,因此,加强新生儿和婴儿TORCH抗体检测筛查,对辅助临床鉴别和治疗具有重要的意义。
- 杨琰琰刘功振
- 关键词：新生儿婴儿TORCH
- pEGFP-N1-HBsAg-ROP2多基因重组表达质粒的构建及表达鉴定
- 2018年
- 目的构建p EGFP-N1-HBs Ag-ROP2重组质粒,并转染HEK293T细胞进行表达鉴定,为弓形虫病核酸疫苗的研制奠定基础。方法根据HBs Ag基因序列和pc DNA3-p30-ROP2重组质粒酶切位点设计引物,PCR扩增HBs Ag基因,经酶切、连接、转化,利用HBs Ag基因替换p30基因,构建pc DNA3-HBs Ag-ROP2重组质粒;经HindⅢ和KpnⅠ双酶切,将HBs Ag-ROP2片段与p EGFP-N1真核表达载体相连,构建p EGFP-N1-HBs Ag-ROP2重组表达质粒,转染HEK293T细胞,观察其蛋白表达水平。结果 HBs Ag片段PCR产物约700 bp,与理论值相符;构建pc DNA3-HBs Ag-ROP2重组质粒,双酶切电泳后得到约5.4 kb和1.9 kb的两条带,与预期结果相符。p EGFP-N1-HBs Ag-ROP2双酶切后产生约4.7 kb和1.9 kb的条带,经测序鉴定,与Gen Bank发表的序列同源性为99.84%。目的基因已成功转染入HEK293T细胞中,且正确表达,蛋白浓度为3.08 mg/ml。结论成功构建p EGFP-N1-HBs Ag-ROP2重组表达质粒,转染HEK293T细胞能正确表达。
- 马荣肖婷李瑾孙慧徐超徐超尹昆尹昆赵桂华崔勇朱嵩刘功振魏庆宽
- 关键词：乙型肝炎PEGFP-N1质粒构建
- 弓形虫棒状体蛋白ROP16的研究进展
- 棒状体蛋白16(ROP16)是弓形虫棒状体蛋白家族成员,这类蛋白结构存在丝氨酸、苏氨酸激酶区,是弓形虫入侵过程中重要毒力因子.ROP16可分泌到宿主细胞核,能磷酸化宿主细胞的转录活化因子STAT,干扰宿主细胞信号通路传导...
- 刘功振崔勇李瑾魏庆宽黄炳成尹昆赵桂华徐超王洪法
- 关键词：弓形虫磷酸化
- 弓形虫棒状体蛋白ROP38的原核表达与鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的原核表达弓形虫棒状体蛋白ROP38,并对重组蛋白rROP38的反应原性进行鉴定。方法根据已发表的ROP38基因序列设计引物,通过RT-PCR方法扩增弓形虫RH株的ROP38基因。将ROP38部分基因克隆到原核表达载体p ET-28a(+)后,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达并优化表达条件,SDS-PAGE分析表达情况,并通过Western blot鉴定其反应原性。结果 SDS-PAGE显示在上清和包涵体均有rROP38表达,分子量约为43k D。Western blot结果显示,rROP38蛋白能被His标签抗体和感染弓形虫的人阳性血清识别,说明ROP38具有良好的反应原性,可以作为潜在的血清学诊断抗原。结论本研究成功获得了具有良好反应原性的弓形虫重组蛋白rROP38。
- 崔勇李瑾王洪法仲维霞孙慧赵桂华尹昆徐超肖婷张晓玉于泓刘学峰刘功振
- 关键词：弓形虫原核表达
- 弓形虫ROP21基因的原核表达与免疫学鉴定被引量：9
- 2016年
- 目的原核表达弓形虫棒状体ROP21基因,并对rROP21蛋白进行免疫学鉴定。方法根据已发表的ROP21基因序列设计引物,通过RT-PCR方法扩增弓形虫RH株的ROP21基因。将ROP21基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)后转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达目的蛋白,纯化后进行SDS-PAGE分析、Western blot及IFA分析。结果经PCR和酶切鉴定,成功构建重组表达载体。重组质粒转化BL21(DE3)后经IPTG诱导,重组蛋白(rROP21)以包涵体形式高效表达,分子质量单位约为45ku。Western blot显示重组rROP21蛋白能被his标签抗体及弓形虫病患者血清识别。用rROP21免疫小鼠,获得滴度为1∶104的抗体血清。IFA显示弓形虫速殖子体内存在ROP21蛋白。结论构建的重组质粒pET28a-ROP21表达的弓形虫rROP21具有抗性,可作为血清学诊断候选抗原,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 李瑾孙慧崔勇王洪法刘学峰于泓赵桂华尹昆仲维霞徐超肖婷魏庆宽黄炳成刘功振
- 关键词：弓形虫原核表达BLOT
- 山东省肉种鸡群三种家禽肿瘤性疾病流行病学调查被引量：4
- 2011年
- 为调查山东省家禽肿瘤性疾病的流行情况,本研究以血清学、病理组织学、免疫组织化学、病原学等检测手段,在山东省境内17家AA种鸡场进行检测。血清学试验结果显示:马立克氏病病毒(MDV)平均抗原阳性率为1.87%;禽白血病病毒J亚群(ALV-J)和网状内皮组织增生症病毒(REV)平均抗体阳性率分别为9.52%和39.78%;双重及三重感染,MDV+ALV-J、MDV+REV、ALV-J+REV及MDV+ALV-J+REV感染率分别为1.12%、1.21%、3.92%和0.65%。对57羽疑似肿瘤病的病鸡检测显示:MDV、ALV-J和REV的抗体阳性率分别为19.3%、47.37%和57.89%;MDV+ALV-J、MDV+REV和ALV-J+REV的双阳性率分别为1.75%、3.5%和19.3%;无三重感染。病理组织学观察显示:病鸡体内既有各病毒引起的单纯肿瘤,也有双重肿瘤共存的现象。免疫组织化学检测显示,MDV、ALV-J和REV抗原阳性信号在病鸡中的比例分别为38.6%、54.39%和28.07%。PCR检测结果表明:MDV、ALV-J和REV的阳性率分别为43.86%、64.91%和33.33%;MDV+ALV-J、MDV+REV、ALV-J+REV和MDV+ALV-J+REV阳性率分别为15.79%、10.53%、12.28%和7.02%。本研究结果表明,山东省境内AA肉鸡群中仍存在较高的肿瘤性病毒感染率。
- 张利张洪海刘青刘功振邱波刘建柱郭慧君成子强
- 关键词：肿瘤性疾病流行病学肉鸡
- 弓形虫GRA6基因的重组、表达及鉴定被引量：3
- 2015年
- 目的构建弓形虫致密颗粒蛋白6(GRA6)基因重组质粒并在大肠埃希菌中进行表达。方法根据弓形虫GRA6基因序列设计并合成引物,用PCR方法从弓形虫基因组DNA中扩增GRA6基因片段,扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定后,再克隆到pGEX-4T载体中,重组质粒经限制性内切酶BamHI、EcoRI酶切鉴定并测序后,将重组质粒转化大肠埃希菌BL21后并用IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE分析并纯化,以Western blot分析其反应原性。结果以弓形虫DNA为模板扩增GRA6基因片段,经1%琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物大小为693bp,与理论值相符;重组质粒经酶切鉴定构建成功,测序结果与GenBank上弓形虫RH株GRA6序列AF239283.1同源性100%;重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达的GRA6融合蛋白分子质量单位约为52ku,与GST-GRA6的理论分子质量相符,该融合蛋白可被GST标签抗体识别。结论成功重组了弓形虫GRA6基因,表达蛋白具有反应原性,为弓形虫诊断抗原试剂盒的制备奠定了基础。
- 李瑾魏庆宽贾凤菊徐超肖婷王卫艳尹昆刘功振黄炳成
- 关键词：弓形虫基因克隆融合蛋白蛋白纯化
- 刚地弓形虫微线蛋白16基因片段原核表达、纯化及免疫反应性分析被引量：2
- 2016年
- 目的原核表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)微线蛋白16(micronemal protein 16,Tg MIC16)的3个基因片段,并分析3个重组蛋白的免疫反应性。方法参照Gen Bank中Tg MIC16基因序列,根据功能活性区将其分为3个片段(M16D1、M16D2、M16D3),分别设计引物,以刚地弓形虫RH株速殖子RNA为模板,通过RT-PCR扩增,获得预期的3个DNA片段,双酶切后连接至原核表达载体p ET-32a(+),将重组质粒转化入大肠埃希菌(Escherichia coli)TOP10,经PCR、双酶切筛选阳性质粒,测序确认后转化至E.coli Rosetta,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测表达产物。重组蛋白经镍柱纯化后,分别以抗组氨酸(His)单抗和弓形虫感染兔血清为一抗,Western blotting分析其免疫反应性。结果 Tg MIC16 3个基因片段的RT-PCR扩增产物分别为1 806、1 290、855 bp。双酶切和测序结果显示,3个Tg MIC16片段的重组表达质粒构建成功。SDS-PAGE分析结果显示,3个重组蛋白成功表达,且均为以包涵体的形式表达,相对分子质量(M_r)分别为88 000、68 000、52 000。Western blotting分析结果显示,3个纯化的表达蛋白均能被抗His单抗和弓形虫感染兔血清识别。结论成功构建并表达Tg MIC16的3个功能活性区,且3个重组蛋白均表现出良好的免疫反应性。
- 李瑾崔勇尹昆刘功振肖婷徐超魏庆宽黄炳成孙慧
- 关键词：刚地弓形虫原核表达免疫反应性
