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陈伟: 作品数：24 被引量：65H指数：6; 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>; 发文基金：国家科技重大专项中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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抗白介素-1β单克隆抗体生物学活性检测方法的建立被引量：1: 2015年; 目的:建立抗白介素-1β单克隆抗体(抗IL-1β单抗)的生物学活性检测方法。方法:利用HEK293-NF-κb-luc细胞系,通过荧光素酶检测系统(Steady-GloLuciferase Assay System)进行抗IL-1β单抗的生物学活性检测,以抗IL-1β单抗参比品通过平行线分析的方法计算供试品相对效价,并对该方法进行精密性和准确性验证。结果:抗IL-1β单抗供试品及参比品该方法中均存在量效关系,在半对数坐标纸上呈平行的直线分布。5批抗IL-1β单抗成品经3次测定,相对效价平均值在(84.57±3.46)%^(101.93±7.56)%之间,变异系数均小于10%。2批回收率样品经3次测定,回收率分别为(113.00±15.32)%和(108.53±23.51)%。结论:已成功建立抗IL-1β单抗生物学活性检测方法,该方法重复性好,准确性高,可作为抗IL-1β单抗生物学活性的常规检测方法。; 刘春雨徐刚领于传飞张峰王文波李萌陈伟王兰高凯; 关键词：生物学活性

光阻法检测治疗性抗体不溶性微粒的取样方式探讨被引量：2: 2017年; 目的:考察不同取样方式对光阻法检测小装量治疗性抗体不溶性微粒的影响。方法:采用光阻法对体积小于25 m L的19个靶点65个批次治疗性抗体中≥2μm、≥10μm和≥25μm的不溶性微粒进行检测,将抗体分为3组,取样方式分别为单支样品不同取样体积(0.5、1、3 m L)检测与合并样品(取样体积5 m L)检测,合并样品不同取样体积(0.5、1、3、5 m L)检测,以及合并样品后稀释(稀释20、10、5倍)检测与合并样品原倍检测。结果:对于≥2μm、≥10μm、≥25μm的不溶性微粒,不管是采用单支样品不同取样体积还是采用合并样品后不同取样体积,与合并样品后每次取样5 m L的不溶性微粒检测结果相比,均没有统计学意义上的差异;且≥2μm不溶性微粒的取样体积变异小于≥10μm、≥25μm的不溶性微粒。合并样品后稀释检测的结果则与合并样品检测的结果具有统计学差异,且稀释后的结果要高于未稀释的结果,稀释倍数越大,与未稀释结果的差异也越大。结论:采用光阻法对体积小于25 m L的小装量治疗性抗体进行不溶性微粒检测时,为节省样品并减少外源微粒污染,不管单支取样还是合并取样,均可首先考虑选择小于5 m L的单次取样体积进行检测,而对合并后稀释检测的方式应慎重选择。; 郭莎曹俊霞倪永波于传飞刘春雨李萌张峰王文波陈伟高凯王兰; 关键词：药品检验取样方法光阻法治疗性抗体不溶性微粒

治疗性单克隆抗体电荷异质性分析方法比较被引量：4: 2017年; 目的:对4种常用的单抗电荷异质性分析方法进行比对研究。方法:以重组抗TNFα全人源单克隆抗体为例,分别利用离子交换色谱(IEC)、毛细管区带电泳(CZE)、毛细管等电聚焦电泳(CIEF)和成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)4种方法对该抗体的电荷异质性进行分析;利用CIEF和iCIEF 2种方法对抗体主峰等电点(pI)进行分析。结果:4种方法能够对重组抗TNFα全人源单克隆抗体的电荷异构体进行有效的分离和定量,其中IEC和CZE 2种方法检测的电荷异构体峰面积百分比(酸性峰、主峰和碱性峰)较为一致,4种方法检测的碱性峰比例较一致,CIEF和iCIEF检测的主峰与酸性峰比例较其他方法偏高。CIEF和iCIEF检测抗体主峰等电点具有一定差异,其中,聚焦时间长短和pI Marker的选择是影响单抗pI值检测的主要因素。结论:通过抗体电荷异质性分析方法的比较研究可见,在单抗电荷异构体比例和主峰pI测定上4种方法具有一定的差异。对单抗的质控应结合产品特性和表征研究,合理选择电荷异质性分析方法。; 王文波武刚于传飞张峰刘春雨李萌陈伟郭莎高凯王兰; 关键词：单克隆抗体等电点毛细管电泳离子交换色谱

重组单抗药物质控中物理检查的有关问题探讨被引量：5: 2015年; 重组单抗药物的物理检查是其质量控制的必要环节,对于评价制品的功能非常重要,对单抗药物安全、有效、质量可控具有重要意义。本文通过阐述物理检查项目中澄清度、浊度、不溶性微粒、澄明度、可见异物和颜色等关键概念及其部分概念表述变化的历史沿革、相似概念的理解和辨析,探讨了中国药典、欧洲药典在上述试验方法的差异,进一步解决了注册检验中物理检查遇到的常见问题,为国内外单抗制品注册检验的相关工作提供参考。; 李萌于传飞王兰刘春雨张峰王文波陈伟郭玮高凯王军志; 关键词：单抗澄清度浊度不溶性微粒

抗CD20人鼠嵌合单抗N糖的毛细管电泳分析被引量：11: 2015年; 目的:利用毛细管电泳对原研抗CD20人鼠嵌合单抗和4个生物类似药的N糖谱进行分析。方法:对单抗Fc上的N糖链利用糖苷酶F进行酶切释放,然后用8-氨基芘-1,3,6-三磺酸(APTS)染料进行标记,通过毛细管电泳对N糖链进行分析。结果:7批原研CD20单抗N糖糖型和比例基本一致。4个生物类似药虽然在糖型上与原研单抗一致,但在比例上存在不同程度的差异。SBP-C4中G0F比例显著高于原研和其他生物类似药,而G1F和G2F比例显著较低。SBP-C1,C2和C3中分别含半乳糖修饰和岩藻糖修饰的糖型比例在(原研单抗±3SD)范围内,SBP-C4半乳糖修饰糖型比例明显较低,岩藻糖修饰的糖型比例较原研单抗略高。SBP-C1和C2的CDC活性与原研单抗(RBP-1)基本一致,SBP-C3的CDC活性略高于原研单抗,SBP-C4的CDC活性显著较低。4个生物类似药候选药物的ADCC活性与原研单抗(RBP-1)基本一致。结论:在对单抗的质量控制中,尤其是对于具有Fc功能的单抗,应重视N糖链检测的重要性。; 王文波王兰王馨于传飞张峰刘春雨陈伟李萌高凯; 关键词：毛细管电泳

人脐静脉内皮细胞增殖抑制法检测贝伐珠单抗活性的优化和应用被引量：7: 2015年; 目的：优化人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）增殖抑制法,并用优化后方法比较6种贝伐珠单抗（bevacizumab）生物类似药（similar bio-therapeutic products,SBPs）候选药物与原研药的生物学活性。方法：对细胞接种量、VEGF165浓度和样品稀释浓度进行优化,提高方法精密性和准确性。使用优化后的方法,以贝伐珠单抗为参比品,测定6种贝伐珠SBPs的生物学活性,并与原研药进行比较。结果：优化后的HUVEC增殖抑制法,信噪比为1.5~1.8,板间变异度〈20%,在70%~130%活性范围内有良好的准确性。使用优化后方法检测,质控样品的相对活性均值为102.00%,6种贝伐珠SBPs的相对活性分别为95.12%,88.81%,96.96%,103.00%,105.70%和102.40%。结论：通过优化,HUVEC增殖抑制法的精密性和准确性较经典方法有显著提高,适用于贝伐珠单抗及其SBPs的可比性评价。; 张峰徐刚领于传飞王文波陈伟刘春雨王兰高凯; 关键词：血管内皮细胞生长因子单抗生物学活性

抗表皮生长因子受体2单克隆抗体质量控制中的趋势分析被引量：1: 2015年; 目的对抗表皮生长因子2单克隆抗体的质量控制项目进行趋势分析。方法利用BT-474细胞株作为靶细胞，通过细胞增殖抑制作用，使用CellTiter 96 AQueous检测试剂盒进行抗表皮生长因子受体2单抗的生物学活性检测，以抗表皮生长因子受体2单抗参比品通过平行线分析的方法计算供试品效价；采用阳离子交换色谱方法，按面积归一化法计算主峰面积百分比进行抗体纯度检测。采用紫外分光光度法进行蛋白质含量检测；采用电位法进行pH值检测；通过对中国食品药品检定研究院（NIFDC）和企业质控实验室多批次抗表皮生长因子2单抗的检测结果，分别建立警戒限（x^-±2s）和行动限（x^-±3s），绘制趋势分析图，并对检测结果进行连续性及周期性趋势分析。结果对2012—2014年某企业74批抗表皮生长因子2单抗的生物学活性检测结果显示，抗表皮生长因子受体2单抗供试品和参比品在生物学活性中均存在量效关系，在半对数坐标纸上呈平行的直线分布。生物学活性效价均值中国食品药品检定研究院与企业分别为（1．04±0．11）×10^4和（0．94±0．08）×10^4U·mg^-1；蛋白质含量均值分别为（442．15±13．59）和（442．07±6．60）mg·瓶^-1；离子交换色谱主峰面积均值分别为（76．29±1．36）％和（73．76±1．17）％；pH值均值分别为（6．16±0．11）和（6．22±0．08）。对上述结果进行连续性和周期性趋势分析，总体趋势较平稳。结论首次通过对抗表皮生长因子受体2单克隆抗体的部分关键质量属性（CQA）趋势分析，反映了制品的变化情况，对评价单抗的批间一致性和生产工艺稳定性提供了参考，为其他单抗质量控制中关键质量属性的趋势分析提供重要指导和借鉴。; 刘春雨王兰郭玮于传飞张峰王文波李萌陈伟高凯

重组白介素22-Fc融合蛋白质控方法与质量标准研究被引量：1: 2015年; 目的:研究建立重组人白介素22-Fc融合蛋白的质控方法。方法:通过刺激COLO 205细胞产生白介素10并测定其含量的方法测定该融合蛋白生物学活性;采用SDS-PAGE及高效液相色谱法测定其纯度;采用实时荧光定量PCR方法测定外源DNA残留量;其余项目按中国药典三部(2010年版)要求进行。结果:该制品3批原液及成品的平均生物学活性分别为参考品的100.6%与103.1%;定量PCR测得3批原液的外源DNA残留量均小于100 pg·剂量-1;其他各项指标均符合中国药典三部(2010年版)要求。结论:研究建立的质控方法和质量标准可用于重组人白介素22-Fc融合蛋白的常规质量控制。; 陶磊韩春梅陈伟杨靖清丁有学毕华饶春明王军志; 关键词：融合蛋白生物学活性

重组抗埃博拉病毒单克隆抗体质控方法的建立被引量：7: 2016年; 目的重组抗埃博拉病毒抗体是由3种抗埃博拉病毒包膜糖蛋白(GP)的单抗组成的复方抗体,本实验分别对3种重组单抗的质控方法进行研究。方法利用ELISA方法测定重组抗埃博拉病毒单抗的结合活性;利用LC-MS肽图法对其进行鉴别;CE-SDS和SE-HPLC测定纯度;i CIEF法测定等电点及电荷异质性;切糖后对N-糖进行2AB标记,用正向色谱结合质谱对其糖型和含岩藻糖修饰糖型比例分析;利用高效液相色谱法测定其聚山梨酯20含量。结果 3种重组抗埃博拉病毒单抗结合活性的EC50为(12.53±1.62)、(11.10±0.62)、(6.09±0.35)ng·m L^(-1);LC-MS肽图法测定一级序列覆盖率均大于95%;非还原CE-SDS主峰纯度分别为(94.41±0.05)%、(95.58±0.17)%、(96.11±0.05)%;还原CE-SDS重链和轻链纯度之和分别为(98.19±0.06)%、(97.97±0.03)%、(98.57±0.03)%;SE-HPLC主峰分别为(99.59±0.01)%、(99.56±0.01)%、(99.74±0.01)%;i CIEF分析主峰等电点为(8.70±0.01)、(8.26±0.01)、(8.85±0.01);3种单抗聚山梨酯20含量分别为(0.34±0.00)、(0.35±0.00)、(0.35±0.01)mg·m L^(-1);LC-MS对N糖谱分析相对灵敏,3种单抗含岩藻糖糖型比例均小于0.5%。结论本实验的质控方法研究运用了现代化质控理念,建立的质控方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,为突发状况下埃博拉疫情防控提供了用药储备的技术支持,也为其他组合抗体的质量控制积累了经验。; 王文波王兰于传飞张峰刘春雨李萌陈伟高凯

抗体偶联药物抗CD30-vc-MMAE的异质性分析被引量：2: 2016年; 目的建立一种基于半胱氨酸偶联方式的抗体偶联药物(antibody-drug conjugates,ADCs)抗CD30-vc-MMAE异质性分析的质控方法。方法本实验应用了分子排阻色谱(SEC-HPLC)、毛细管电泳(CE-SDS)以及实时成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)等分析方法,对抗体偶联药物抗CD30-vc-MMAE的大小异质性和电荷异质性进行了分析。结果SEC-HPLC分析的纯度为(95.69±0.01)%;还原CE-SDS分析的纯度为(98.38±0.25)%,非还原CE-SDS可分离开6个主要峰,纯度之和为(97.82±0.44)%;和裸抗药物类似,iCIEF可有效的将酸区,碱区和主峰抗体进行较好地分离,主峰区的峰面积百分比为(43.52±2.03)%。结论初步建立了一种基于半胱氨酸偶联方式的ADC药物抗CD30-vcMMAE异质性分析的质控方法 ,为此类生物制品的质量控制提供参考。; 李萌朱磊武刚崔永霏于传飞刘春雨张峰王文波陈伟高凯王兰

陈伟

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