薛斌
- 作品数：14 被引量：37H指数：5
- 供职机构：南京大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- NRAGE抑制细胞生长、粘附和迁移分子机理的研究
- NRAGE抑制细胞生长、粘附和迁移分子机理的研究
NRAGE(neurotrophin receptor-interacting MAGE homolog)是MAGE(黑色素瘤抗原)家族的一员。大部分MAGE家...
- 薛斌
- 关键词：黑色素瘤抗原细胞粘附细胞分化基因治疗
- 蛋白质异戊二烯化关键酶GGPPS结合小分子筛选模型的构建
- 2017年
- 蛋白质的基本翻译后修饰包括磷酸化、糖基化、乙酰化、棕榈酸化等^([1]),而异戊二烯化修饰是蛋白质的基本翻译后修饰之一,属于蛋白质的脂质修饰^([2]).甲羟戊酸途径中的关键分支酶——香叶基香叶基焦磷酸合成酶(Geranylgeranyl diphosphate synthase,GGPPS)能够催化法尼基焦磷酸盐(Farnesyl diphosphate,FPP)生成香叶基香叶基焦磷酸盐(Geranylgeranyl diphosphate,GGPP),介导蛋白质异戊二烯化的平衡^([3]).导致包括胰岛素抵抗^([4])、胰岛功能失调^([5])、生殖代谢异常^([6])等各种疾病的发生.GGPPS作为调节蛋白质异戊二烯化的重要靶点,因其在调节机体能量代谢稳态中的重要作用,促使构建筛选模型得到靶向GGPPS的小分子治疗药物,具有重要实践意义.实现EGFP荧光标记GGPPS原核蛋白的纯化以及表达,结合微量热泳动技术进行GGPPS结合天然化合物小分子的筛选模型构建.根据筛选模型对于检测蛋白稳定荧光的要求,分别构建含有GGPPS和EGFP基因的重组pET28a质粒以及对照质粒pET28a-EGFP.筛选高水平分泌表达GGPPS-EGFP-His蛋白的菌株,并对该菌株的目的基因整合位置及拷贝数进行测序.将含有目的基因的重组质粒的BL-21菌株大规模培养,表达的目的蛋白上带有His标签,利用镍(Ni)柱的亲和层析原理纯化获得重组蛋白GGPPS-EGFP-His,测定蛋白浓度留存.随后基于微量热泳动技术进行小分子结合筛选.重组GGPPS蛋白与梯度浓度化合物小分子在红外激光作用下发生热泳动,通过中心区域荧光检测可得出GGPPS与小分子化合物的结合状况.重组表达质粒GGPPS-EGFP-His经电泳及测序鉴定构建正确.纯化获得的重组蛋白纯度约为80%,在微量热泳动实验中,经GGPPS底物小分子法尼基焦磷酸(Farnesyl pyrophosphate,FPP)浓度梯度测试呈现良好结合.重组蛋白GGPPS-EGFP-His能够在微量热泳动技术下显示与小分子底物FPP的结合,该系统的构建对于筛�
- 齐雅玲卢悟广种丹阳刘佳孙倩徐晓军曹鹏方雷李朝军薛斌
- Ror2通过Src介导的信号途径调控肿瘤细胞转移
- Ror 为受体酪氨酸激酶家族中的孤儿受体,有 Ror1和 Ror2两类。当 Ror2发生突变或缺失 C 端区域会导致人类的 B 型短指综合征和 Robinow 综合征。我们发现 Ror2在高转移的 B16BL6细胞中高度...
- 薛斌涂晨冯振华温传俊
- 关键词：肿瘤转移SRC
- 文献传递
- GGPPS基因干扰腺病毒载体的构建及鉴定
- 2013年
- 构建GGPPS基因干扰腺病毒质粒载体并加以鉴定.根据GGPPS基因序列设计GGPPS干扰序列引物,定向克隆至穿梭载体pshuttle-H1的BglⅡ和HindⅢ位点,PmeⅠ酶切线性化的pShuttle-H1-SiGGPPS干扰质粒,并与腺病毒载体(pAdEasy-1质粒)共同转化E.coli BJ5183感受态细菌,产生重组腺病毒载体.用PacⅠ酶切线性化的回收质粒,转染293A细胞包装腺病毒颗粒,在倒置显微镜下观察细胞CPE,用TCID50法测定病毒颗粒的浓度,并初步观察病毒感染PC12细胞对目的基因的干扰效率.经酶切鉴定、测序证实成功构建GGPPS基因干扰腺病毒载体.包装的腺病毒浓缩悬液滴度为1.995×107PFU/mL.GGPPS在人中具有保守性,该病毒能在人源的WRL-68细胞中成功表达,并且对GGPPS基因干扰效率达70%以上.
- 赵银娟来珊珊李朝军薛斌
- 关键词：腺病毒
- 人NRAGE基因重组腺病毒载体的构建及其对293细胞细胞周期的影响被引量：5
- 2006年
- 目的构建hNRAGE基因的重组腺病毒载体,并研究其对293细胞细胞周期的影响。方法采用PCR方法扩增hNRAGE基因片段,并亚克隆至腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack-CMV中,构建穿梭质粒pAdTrack-CMV/hNRAGE。经测序检测后,用PmeI酶切使pAdTrack-CMV/hNRAGE被线性化,然后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1用电穿孔法共转化大肠杆菌BJ5183,进行同源重组。经PacI酶切鉴定后,用磷酸钙法转染QBI-293A细胞,包装成重组体腺病毒Ad-hNRAGE颗粒。利用穿梭质粒pAdTrack-CMV中GFP报告基因的表达,观察重组腺病毒的产生,测定病毒颗粒的浓度。用Western blot检测目的基因的表达。采用MTT法检测293细胞的活力,用流式细胞术分析hNRAGE基因对293细胞周期的影响。结果成功地构建hNRAGE重组腺病毒载体。Western blot检测结果证实,hNRAGE基因可在293细胞中表达。收获病毒后,经测定病毒颗粒的浓度大约为6.5×109个/μL。转染了重组腺病毒Ad-hNRAGE的293细胞与正常细胞相比较,增殖率显著降低,G0-G1和G2-M期的细胞增多,S期的细胞明显减少。结论hNRAGE基因可能有抑制293细胞生长的作用。
- 周立华薛斌郭仕英史一欢温传俊李朝军
- 关键词：腺病毒载体同源重组细胞周期
- hNRAGE破坏E-cadherin／β-catenin介导的细胞之间的黏附
- 人类黑色素瘤同源相关蛋白hNRAGE(human neurotrophin receptor p75 interaction MAGE homologue)可以通过激活JNK和c-jun信号传导途径促进神经生长因子依赖的...
- 薛斌温传俊
- 文献传递
- cnksr2基因干扰腺病毒的构建及鉴定
- 2013年
- 构建小鼠cnksr2基因干扰腺病毒质粒载体并加以鉴定.根据小鼠cnksr2基因序列设计cnksr2干扰序列引物,定向克隆至穿梭载体pshuttle-H1的BglⅡ和HindⅢ位点,PmeⅠ酶切线性化的pShuttle-H1-Sicnksr2干扰质粒,并与腺病毒载体(pAdEasy-1质粒)共同转化E.coli BJ5183感受态细菌,产生重组腺病毒载体.用PacⅠ酶切线性化的回收质粒,转染293A细胞,包装腺病毒颗粒,在倒置显微镜下观察细胞病理性变化(Cell pathological effect,CPE),用TCID50法测定病毒颗粒的浓度,并初步观察病毒感染PC12细胞对目的基因的干扰效率.经酶切鉴定、测序证实成功构建小鼠cnksr2基因干扰腺病毒载体.包装的腺病毒浓缩悬液滴度为3.98×107PFU/mL.cnksr2在大鼠及小鼠中具有保守性,该病毒能在大鼠来源的PC12细胞中成功表达,并且对cnksr2基因干扰效率达50%以上.结论:成功构建了小鼠cnksr2基因的干扰腺病毒载体.
- 梁金沈宁徐康李朝军薛斌
- 关键词：腺病毒
- 一株耐高温抑菌黏质沙雷氏菌的鉴定及其红色素的初步分离被引量：5
- 2013年
- [目的]为了了解黏质沙雷氏菌的抑菌机理及温度对其产生色素的影响。[方法]从土壤中分离纯化得到1株产红色素细菌,对该菌进行生理生化和16S rDNA鉴定,同时对该菌产生的红色素进行了初步的探讨。[结果]该菌为黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens),在28℃条件下培养红色素产量最高,37℃下仍能产生色素,说明该菌株是耐高温红色素产生菌。紫外全波长扫描分析和薄板层析结果表明,其红色色素有可能是灵菌红素。[结论]该菌对霉状杆菌和镰刀菌等病原菌具有一定的抑制作用。
- 赵银娟薛斌李桂娥吴小扁
- 关键词：红色素黏质沙雷氏菌
- HepG2肝癌细胞STAT3与β-catenin形成复合物及其功能研究被引量：1
- 2003年
- 目的 研究STAT3与 β catenin信号转导途径的相互关系。方法 利用细胞的免疫组化双色染色和蛋白免疫沉淀的方法探讨STAT3与 β catenin是否形成复合物。利用荧光素酶活性分析的方法研究STAT3与 β catenin功能上的相互影响。 结果 HepG2细胞中STAT3和β catenin在位置上存在共同分布。STAT3与野生型、突变型的 β catenin均可在HepG2细胞中形成复合物。在研究复合物功能时发现 ,随着细胞密度的增加 ,STAT3与野生型 β catenin形成的复合物含量减少。但STAT3对 β catenin转录激活活性未发现明显的影响。结论 STAT3与β catenin形成复合物的结果表明STAT3信号途径与β catenin信号途径之间很有可能存在着一定的内在联系 ,为今后进一步研究肝癌的发生机理提供了新的思路。
- 赵东红温传俊薛斌杨润林张敏跃周开亚李朝军
- 关键词：STAT3Β-CATENIN免疫沉淀肝癌细胞HEPG2
- 肝再生终止阶段的研究进展被引量：8
- 2012年
- 肝脏作为体内最重要的解毒器官,具有极强的再生能力.肝再生研究一直是再生医学研究领域的热点,其再生过程可分为起始阶段、增殖阶段以及终止阶段.目前研究大都集中在肝再生的起始以及增殖阶段,对于使肝再生恰当终止的机制研究仍知之甚少.肝再生终止阶段涉及多种细胞因子与生长因子,其功能主要体现在2方面:(1)抑制有丝分裂原对于肝细胞增长的促进作用;(2)通过某种途径促进过多增殖的肝细胞凋亡.本文针对目前肝再生的终止阶段研究所涉及的主要的因子综述如下.
- 陆克薛斌
- 关键词：肝再生整合素连接激酶磷脂酰肌醇激活素白介素1
