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副溶血弧菌的磁珠捕获及检测被引量：6: 2013年; 建立结合免疫磁珠和PCR快速检测副溶血性弧菌的新方法。本研究选用副溶血弧菌作为抗原免疫日本大耳兔制备了多克隆抗体,用ELISA法检测抗体效价。利用辛酸硫酸铵沉淀结合逆向吸附对多抗血清进行纯化,经SDS-PAGE和斑点杂交检测验证纯化后抗体的特异性。将纯化后的抗体偶联于羧基化修饰的纳米磁珠表面,用来进行菌体的捕获。结果表明,抗体的效价达到106,纯化获得只与副溶血弧菌发生反应的高纯度抗体。制备的免疫磁珠捕获率在55%～70%之间,且稳定性较好,盐离子浓度(3.5%NaCl、4.5%NaCl)对捕获率的影响不大,在pH5～9之间,磁珠捕获差异也较小。在对纯培养物的检测实验中,本方法最低检测限为102cfu/mL;而在鱼肉糜样本中的检测限为103cfu/mL,且样品中高浓度杂菌的存在不影响检测灵敏度。免疫磁珠结合PCR用于副溶血性弧菌的检测具有很高的灵敏度和特异性,具有广阔的前景。; 王报贵武晓丽董素琴陈飞陈星星甘敏明星徐锋; 关键词：副溶血弧菌多克隆抗体免疫磁珠 PCR

抗肠炎沙门氏菌单链抗体制备及其特异性分析被引量：2: 2013年; 目的:利用基因工程技术制备抗肠炎沙门氏菌的单链抗体。方法:从抗肠炎沙门氏菌单克隆抗体的杂交瘤细胞中纯化RNA,反转录后扩增出抗体的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因片段,采用重叠延伸的方法,用柔性多肽Linker接头(Gly4Ser)3按VL-Linker-VH方式将VH基因和VL基因拼接成单链抗体基因片段后,连接到pGEX-4T-1载体上,进行重组转化。挑取阳性克隆,经IPTG诱导后,通过GST柱进行亲和层析,最后利用ELISA检测抗体的活性。结果:成功构建了表达抗肠炎沙门氏菌单链抗体的基因工程菌株,经SDS-PAGE和ELISA检测结果表明,诱导表达的单链抗体scFv分子量约为60 kDa,其能特异与肠炎沙门氏菌结合,但与副甲伤寒沙门氏菌、鸭沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌有轻度交叉反应。结论:成功构建了抗肠炎沙门氏菌单链抗体的表达菌株,表达的单链抗体scFv可作为沙门氏菌的检测的候选抗体分子。; 王报贵武晓丽董素琴甘敏陈星星陈飞明星徐锋; 关键词：沙门氏菌单链抗体重链可变区轻链可变区

免疫试纸条技术改进及高分辨熔解曲线应用菌群分类的初步摸索: 微生物的快速检测和分类方法研究是应用微生物领域的热点和难点。在微生物快速检测领域,50％以上食品中毒事件归因于食源性致病菌的感染,其快速检测技术备受关注;在微生物菌群分类领域,变性梯度凝胶电泳及温度梯度凝胶电泳技术日臻成...; 陈飞; 关键词：微生物; 文献传递

利用双重PCR同时检测婴幼儿配方奶粉中克罗诺杆菌和沙门氏菌方法的建立被引量：1: 2014年; 建立能够同时检测婴幼儿配方奶粉中克罗诺杆菌和沙门氏菌的双重聚合酶链式反应(Polymerse chain reaction,PCR)的方法。分别根据沙门氏菌和克罗诺杆菌16S rDNA序列设计特异性引物Cro和InvA。对待检奶粉样本进行预增菌后,提取菌液基因组DNA作为模板,进行双重PCR扩增,对其特异性、灵敏度和抗杂菌干扰能力进行评估。结果表明:两对引物分别可特异性扩增出140、630bp的目的条带。双重PCR同时检测婴幼儿配方奶粉样本中两种食源性致病菌的方法具有较高灵敏度,在经过4h预增菌后可检测到初始浓度为100CFU/g的克罗诺杆菌和初始浓度为100CFU/g的沙门氏菌,且在高浓度杂菌干扰下,灵敏度无下降。在人工污染奶粉样本检测中,两种致病菌的检出准确率均达95%以上。初步建立了能同步、快速、准确、灵敏地检测婴幼儿配方奶粉中克罗诺杆菌和沙门氏菌的双重PCR方法。; 明星徐锋陈星星甘敏陈飞武晓丽; 关键词：沙门氏菌双重PCR

一种检测细菌的检测组合: 本发明涉及一种基于菌体荧光染色技术检测细菌的检测组合，并利用单一抗体对使用荧光染色的菌体进行检测，在一个试纸条上喷有大肠杆菌O157：H7抗体、单核增生李斯特菌抗体、鼠伤寒沙门氏菌抗体分别作为三条检测线（T<Sub>1<...; 徐锋魏华武晓丽杨栋陈星星甘敏王登远陈飞刘琚珥许恒毅

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陈飞