李鸿辉
- 作品数：20 被引量：23H指数：2
- 供职机构：云南农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省应用基础研究基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪肌肉生长抑制素(Myostatin)基因敲除的研究
- 李鸿辉
- 关键词：基因打靶MYOSTATIN
- 一种适合心脏异种移植供体猪的构建方法
- 本发明涉及一种适合心脏异种移植供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在猪胎儿成纤维细胞的基础上，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除GGTA1、CMAH、B4GalNT2三个基因后并定点插入hCD55、hCD59、...
- 魏红江角德灵赵红业赵恒徐凯祥李鸿辉
- 文献传递
- 体细胞克隆制备肌肉生长抑制素(Myostatin)基因敲除猪
- 【目的】肌肉生长抑制素(Myostat in,MSTN)是一类对骨骼肌生长具有负调控作用的因子,MSTN基因的缺失或突变会引起其骨骼肌重量的显著增加。因此,生产MSTN基因敲除猪有望提升猪胴体瘦肉率,达到提高饲料利用率的...
- 李鸿辉冯冲王宁闫军龙川郑道山李西睿罗学明朱彦宾潘登科
- 关键词：基因打靶MYOSTATIN基因胎儿成纤维细胞
- 文献传递
- 基于P53基因获得小型猪肿瘤疾病模型的方法
- 本发明涉及基于P53基因获得小型猪肿瘤疾病模型的方法，属于医学动物疾病模型领域。本方法主要包括P53基因BE3 sgRNA的设计与组装，BE3和sgRNA质粒的转染，筛选并获得P53基因关键碱基突变的阳性细胞系，利用体细...
- 李鸿辉魏红江成文敏赵红业
- 新生昆明犬成纤维细胞系的建立及生物学特性分析被引量：1
- 2015年
- 本研究旨在探索和建立新生昆明犬成纤维细胞体外培养的技术方法并观察其生物学特性。试验以新生昆明犬耳部皮肤组织为材料,采用胶原酶消化法和细胞冷冻保存技术建立了昆明犬成纤维细胞系,并对所构建的细胞系进行生物学特性研究。结果表明:新生昆明犬成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态;冻存前和复苏后细胞的存活率分别为93.3%和90.8%;生长曲线呈"S"形,倍增时间约为32 h;对所制备的染色体核型分析显示2n=78(XX),细胞染色体中二倍体占主体,约为90%。该细胞系的建立,不仅使昆明犬这一国家种质资源在细胞水平得以保存,而且也为今后开展功勋犬的体细胞克隆等研究奠定了基础。
- 韦云芳毛爱国万九生李静李鸿辉陈方良袁再美杜晓鹏唐树生魏红江
- 关键词：昆明犬成纤维细胞体外培养冷冻保存
- 一种猪内源性逆转录病毒失活克隆猪的构建方法
- 本发明涉及一种猪内源性逆转录病毒失活克隆猪的构建方法，属动物生物技术领域。通过ddPCR和全基因组测序比对，确定猪内源性逆转录病毒在猪胎儿成纤维细胞基因组中的拷贝数和其占据染色体的位置，利用CRISPR/Cas9技术构建...
- 魏红江徐凯祥赵红业角德灵郭建雄赵恒李鸿辉卿玉波
- 文献传递
- 通过微量细胞鉴定快速生产基因编辑猪
- 2021年
- 【目的】建立快速筛选猪的基因编辑阳性成纤维细胞系的方法以提高利用体细胞核移植产生基因编辑克隆猪的效率。【方法】通过PCR、T7EN1酶切和Sanger测序分析不同数量的已知猪基因编辑阳性细胞(20、50、100、150和200个细胞)的基因型,确定最小细胞数用于鉴定未知的基因编辑阳性细胞系以证明该方法的可行性。【结果】除20细胞组外,其他所有细胞组中均扩增出2条明显的T7EN1酶切条带(175和555 bp)。定量数据显示:20细胞组和50细胞组之间的条带灰度值存在极显著差异(P<0.01),因此50细胞可用于基因编辑阳性细胞系鉴定。利用CRISPR/Cas9系统构建IPO13打靶载体,转染猪胎儿成纤维细胞形成细胞克隆点后计数50个细胞来筛选阳性细胞系,再通过体细胞核移植快速生产了IPO13敲除猪,从而证实通过微量细胞鉴定快速生产基因编辑猪的可行性。筛选基因编辑阳性细胞系的一般方法大约需要33.7 d,新建立的方法细胞筛选周期仅为18.9 d(减少15 d),获得阳性细胞系的成功率也提高了约4倍。【结论】本研究建立了一种通过微量细胞鉴定快速生产基因编辑克隆猪的方法,该方法可行可靠。
- 王娇祥范柠粼施德佳陈姝含王璐璐李莲军李鸿辉李鸿辉
- 关键词：细胞筛选体细胞核移植
- 一种筛选异种移植供体猪最佳基因组合的方法
- 本发明涉及一种筛选异种移植供体猪最佳基因组合的方法，属动物生物技术领域。以人成纤维细胞为研究对象，建立人成纤维细胞体外相容性评价方法，用此方法验证已报道的心脏或其他移植存活时间长的基因修饰猪成纤维细胞的结果，筛出更适合的...
- 魏红江赵红业角德灵李鸿辉赵恒
- 文献传递
- 成年版纳微型猪近交系克隆猪的制备被引量：11
- 2012年
- 本研究以版纳微型猪近交系成年母猪为材料,采用冷胰酶消化法获得成年猪成纤维细胞后,进行细胞的生物学特征检测,研究其作为供体细胞对体细胞核移植效果的影响。结果表明,版纳微型猪近交系成年猪的成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态,细胞冻存前和复苏后存活率分别为97.2%和92.6%(P>0.05),生长曲线呈"S"形,细胞群体倍增时间为36h,体外培养14代后仍能保持正常核型。以其作为核移植供体细胞,核移植重构胚卵裂率、囊胚率及囊胚细胞数分别为61.9%、13.0%和37枚,移植了重构胚的3头代孕母猪均妊娠,并且有1头母猪产下1头正常的克隆猪。综上所述,利用版纳微型猪近交系成年猪能建立稳定的成纤维细胞系,该细胞系作为核移植供体细胞可获得版纳微型猪近交系克隆猪。
- 叶雷李红魏红江许成盛卿玉波潘伟荣李鸿辉成文敏富国文信吉阁李思魏太云李小兵张崇义汪霞曾养志
- 关键词：细胞培养生物学特征体细胞核移植
- 利用基因编辑和体细胞核移植技术构建MSTN双等位基因敲除绵羊
- 引言/目的肌生成抑制素(Myostatin,MSTN)敲除绵羊的构建为羊生长性能遗传改良提供了新方法,也为骨骼肌形成、发育及疾病研究提供大动物模型。本研究采用TALEN技术构建适用于小尾寒羊的MSTN基因敲除质粒,结合体...
- 张国忠王贵郝志强李鸿辉卿玉波潘伟荣贾宝瑜曾璐瑶郭建雄赵恒吕朝相赵红业王文魏红江
