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DNA-PKcs协同自身免疫调节因子调控小鼠腹腔巨噬细胞Toll样受体的表达及其意义被引量：2: 2012年; 目的:探讨小鼠腹腔巨噬细胞内DNA-PKcs协同自身免疫调节因子调控Toll样受体(TLRs)的表达水平,阐明外周免疫系统中自身免疫调节因子的调控作用及其意义。方法:小鼠腹腔巨噬细胞分为pEGFPC1/mAire转染组、pEGFPC1/mAire与negative control siRNA共转染组、pEGFPC1/mAire与DNA-PKcssiRNA共转染组、pEGFPC1转染组、pEGFPC1与negative control siRNA共转染组和pEGFPC1与DNA-PKcssiRNA共转染组,采用RT-PCR方法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞内TLR1～9的表达水平;采用脂质体转染重组质粒pEGFPC1/mAire和空载质粒pEGFPC1至小鼠腹腔巨噬细胞,采用RT-qPCR方法检测2组细胞TLR1～9的表达水平;采用RT-qPCR方法检测2组转染细胞沉默DNA-PKcs前后TLRs的表达水平。结果:小鼠腹腔巨噬细胞能表达TLR1～9;与转染pEGFPC1/mAire组细胞比较,转染自身免疫调节因子后巨噬细胞TLR1、3和8的表达水平增加(P<0.05),其他组TLRs表达水平无明显变化(P>0.05);DNA-PKcs沉默后,转染pEGFPC1/mAire组细胞TLR1、3和8的表达水平较未沉默组明显下降(P<0.05),而在转染pEGFPC1的细胞内DNA-PKcs沉默前后TLR1-9表达水平均无明显变化(P>0.05)。结论:在小鼠腹腔巨噬细胞内,自身免疫调节因子能够调控TLR1、3和8的表达,其机制可能与DNA-PKcs协同作用有关。; 吴静付海英张英林孙际童杨巍; 关键词：自身免疫调节因子巨噬细胞 TOLL样受体

单个B细胞抗体制备技术及其在肝脏疾病中的应用被引量：4: 2015年; 单克隆抗体是具有高度特异性的抗体,目前已广泛应用于多种疾病,尤其是在各种病毒引发的肝损伤的治疗和研究中,显示出了不可替代的作用。近年来基于单个B淋巴细胞直接制备的人源性单克隆抗体具有抗原特异性高、免疫原性低及安全高效等优点,越来越受到瞩目。随着单克隆抗体技术和PCR技术的不断改进,单个B淋巴细胞抗体制备技术也有了很大发展。尽管由单个B淋巴细胞产生作用于肝脏的单克隆抗体的相关报道并不多见,但其在肝脏疾病的治疗和研究中展现出了广阔的应用前景。简述了单个B淋巴细胞抗体制备技术的研究进展及单个B淋巴细胞制备的抗体在肝脏疾病中的应用。; 吕信萍吴静陈京涛; 关键词：肝疾病

利用单个细胞RT-PCR法克隆全人源性HBV单克隆抗体的探讨: 2016年; 目的建立外周血单个抗体分泌细胞分离和单个细胞RT-PCR系统,高效快速克隆高度特异性、全人源性的HBV单克隆抗体。方法选择3例HBV感染恢复期患者,从外周血中富集B淋巴细胞,加入HBcAg Peptide pool活化B淋巴细胞,流式分选出记忆性抗体分泌细胞(CD19^+CD10^-IgG^+CD27^+),通过有限稀释法获得单个细胞,单细胞RT-PCR反转出cDNA,巢式PCR扩增抗体重链恒定区序列片段,将PCR产物纯化并克隆至pEASY~-T1 simple克隆载体,进行测序鉴定。结果 ELISA结果显示,3例HBV感染恢复期患者血浆中均检测到较高水平IgG,与健康志愿者相比,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。流式结果显示,B淋巴细胞比例均高于94%,且均可分离出记忆性抗体分泌细胞。从分离的抗体分泌细胞中挑选出24个含有1个形态完好的细胞,经鉴定,其中有14个扩增成功,且条带在200 bp左右,与预期片段大小相符。对抗体重链序列分析显示成功扩增出抗体恒定区片段。结论成功构建了单个抗体分泌细胞分离和单个细胞RT-PCR系统,获得了抗体重链序列,为后期全人源性乙型肝炎单克隆抗体的高通量生产打下了坚实的基础。; 李特特吴静吕信萍周豪陈京涛; 关键词：逆转录聚合酶链反应

AIRE通过调控Notch1表达影响CD4^+CD25^+Treg的作用及其机制: 2009年; 目的:研究AIRE基因是否可通过调控Notch1的表达而影响CD4+CD25+Treg细胞的诱导及功能,探讨AIRE在外周免疫耐受中的作用机制。方法:将RAW264.7细胞分为转染组和未转染组,采用脂质体法将pEGFPC3-AIRE质粒转入RAW264.7细胞,采用RT-PCR法检测各组AIRE mRNA的表达及Notch1 mRNA表达的变化。将RAW264.7细胞分为转染组、转染并经Notch1抗体阻断组、阴性对照组及未转染并经Notch1抗体阻断组,分别采用FACS法及RT-PCR法检测各组RAW264.7细胞对CD4+CD25+Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达的影响。结果:质粒成功转入RAW264.7细胞内。AIRE转染组较未转染组Notch1 mRNA表达增加。AIRE转染组较未转染组CD4+CD25+Treg细胞的数量及功能相关基因Foxp3 mRNA的表达水平均增加,经Notch1抗体阻断后,AIRE转染组与未转染组CD4+CD25+Treg细胞的数量及功能均较对照组降低。结论:AIRE可能通过上调RAW264.7细胞上Notch1的表达进而影响CD4+CD25+Treg细胞的诱导产生及功能,从而在维持外周免疫耐受方面发挥一定的作用。; 吴静杨巍孙际童苏静波魏晓曦李一; 关键词：自身免疫调节因子 NOTCH1 CD4+CD25+TREG细胞

套细胞淋巴瘤细胞Toll样受体9的表达及意义: 2017年; 目的观察套细胞淋巴瘤细胞Toll样受体(TLR)9的表达及意义。方法采用PCR检测TLR9基因的表达,采用流式细胞术检测TLR9蛋白的表达,采用免疫组化检测淋巴瘤患者淋巴结TLR的表达。采用Annexin V/PI双染检测CpG诱导套细胞淋巴瘤细胞的凋亡情况。结果在套细胞淋巴瘤细胞系,TLR9基因水平和蛋白水平均高表达。套细胞淋巴瘤患者的淋巴结TLR9也有明显的表达。CpG-B刺激套细胞淋巴瘤细胞系后凋亡比例明显上升,并且具有时间和浓度依赖性。结论 TLR9在套细胞淋巴瘤细胞系高表达,CpG-B能够诱导套细胞淋巴瘤细胞凋亡。; 李爽杨阳安倍莹刘晓会吴静白元松崔久嵬陈京涛; 关键词：TOLL样受体套细胞淋巴瘤

自身免疫调节因子(AIRE)对TLRs表达的影响被引量：1: 2008年; 目的:探讨AIRE对外周抗原提呈细胞(APC)TLRs表达的影响。方法:①脂质体法将pEGFPC3-AIRE质粒转染RAW264.7细胞。②共聚焦荧光显微镜观察转染效果。③RT-PCR法检测转染后不同时间点(36、48、72、96小时)RAW264.7细胞上AIRE及TLR1-9的表达水平。结果:①成功将质粒转入RAW264.7细胞,转染效率约为60%～70%。②建立了AIRE转染的RAW264.7细胞,确定转染后72小时为转染最佳时间点。③AIRE转染后72小时,RAW264.7细胞上TLR1、4、5、9表达升高,TLR3、7、8表达降低,转染后96小时,TLR2、6表达升高。结论:AIRE可能通过调控APC上TLRs的表达,调节机体的免疫应答。通过对不同的TLRs的影响,来维持对病原微生物有效应答的同时,维持对自身组织的耐受状态。; 杨巍吴静李一; 关键词：AIRE TLR 免疫耐受

牛心肌肌钙蛋白T的提取、纯化及其单克隆抗体的制备: 2011年; 目的提取、纯化牛心肌肌钙蛋白T(Cardiac troponin T,cTnT),并制备其单克隆抗体。方法采用组织匀浆、蛋白层析技术提取、纯化牛cTnT,紫外分光光度法检测其浓度;SDS-PAGE检测其纯度;间接ELISA法检测其反应特性。将纯化的牛cTnT免疫小鼠,进行细胞融合,间接ELSIA法筛选阳性杂交瘤细胞株,采用小鼠体内法制备腹水。结果纯化的两批牛cTnT浓度分别为0.246和0.336 mg/ml;相对分子质量约为37 000,纯度分别为86.02%和93.77%;纯化的cTnT蛋白可与鼠抗牛cT-nT单克隆抗体结合。共获得5株分泌抗牛cTnT单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中,阳性杂交瘤细胞株3B10腹水抗体效价达1∶10 240。结论已成功提取、纯化了牛cTnT,并建立了稳定分泌抗牛cTnT单抗的杂交瘤细胞株,为cTnT检测试剂盒的国产化奠定了基础。; 付海英崔衢吴静李勇施雨露王艳玲李一; 关键词：心肌肌钙蛋白抗体单克隆

自身免疫调节因子在小鼠肠系膜和外周淋巴结中的表达及其意义: 2012年; 目的:研究自身免疫调节因子(Aire)在小鼠肠系膜和外周淋巴结表达的分布,探讨Aire在外周免疫耐受中的作用,阐明淋巴结表达Aire在维持耐受及防止自身免疫病中的作用机制。方法:分别采用RT-PCR和Western blotting法检测BALB/c小鼠肠系膜淋巴结和外周淋巴结中Aire mRNA和蛋白的表达情况;采用RT-PCR法检测BALB/c小鼠淋巴结基质和非基质组分中Aire mRNA表达情况;采用RT-PCR法和免疫细胞化学染色法检测小鼠淋巴结基质细胞中Aire的表达情况。结果:肠系膜淋巴结和外周淋巴结均有Aire mRNA和蛋白的表达,表达水平组间比较差异无统计学意义(P>0.05);淋巴结基质与非基质组分均检测到Aire mRNA的表达,其中Aire mRNA在非基质组分的表达水平高于基质组分(P<0.05)。成功分离培养淋巴结基质细胞,即上皮细胞(EPIs)与纤维原网状细胞(FRCs),阳性率约为70%;Aire mRNA及蛋白在EPIs与FRCs中均有表达,且在EPIs中的表达强于FRCs。结论:Aire可表达于小鼠肠系膜和外周淋巴结以及淋巴结基质细胞中,提示Aire可能通过多种机制共同参与外周免疫耐受的维持。; 孙际童吴静贾婷刘雪岩杨巍; 关键词：自身免疫调节因子肠系膜淋巴结外周免疫耐受

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吴静

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