- 基因在脑胶质瘤细胞的抑制与凋亡中的应用
- 本发明涉及一种人源<I>dcf1</I>基因在抑制U251胶质瘤细胞系增值和诱导U251胶质瘤细胞系凋亡中的应用。本发明通过免疫电镜、原子力显微镜、CCK8增殖检测、JC-1染色、裸鼠肿瘤异位移植等方法对<I>dcf1<...
- 文铁桥谢雨琼杨眉杨清波
- 利用四环素调控的dcf1基因诱导表达系统及其构建方法
- 本发明利用四环素调控的dcf1基因诱导表达载体及其构建方法。本发明利用四环素来调控DCF1在哺乳动物细胞中表达，构建了Tet-on四环素调控载体pTRE-EGFP-DCF1，与ptTS-Neo一起完成调控作用。共转染后，...
- 文铁桥严煌黄晨杨眉吴喨
- 文献传递
- SHN3多克隆抗体纯化与鉴定
- 2014年
- 目的:利用SHN3免疫特异肽段亲和层析纯化抗SHN3多克隆抗体。方法:将制备多克隆抗体SHN3免疫原片段(99bp)划分为4段互相重叠等长的基因片段(48bp),构建原核表达重组质粒并转化E.coil的BL21(DE3)菌株。IPGT诱导重组蛋白表达,Western blotting筛选并人工合成与抗体免疫结合特异性片段,亲和层析纯化抗体,Western blotting检测纯化结果。结果:成功地筛选到SHN3免疫原特异肽段part-3,以亲和层析的方式纯化多克隆抗体,纯化后免疫特异性提高。结论:亲和层析的方式纯化得到的SHN3多克隆抗体抗体,有效地提高免疫特异性,为后续SHN3蛋白功能研究和应用奠定了基础。
- 杨眉程华王娇冯瑞丽文铁桥
- 关键词：原核表达
- 人源DCF1基因原核表达载体构建及蛋白分离纯化被引量：1
- 2014年
- 为了深入研究DCF1(Dendritic Cell Factor 1)基因的作用,以质粒pc DNA3.1-DCF1-TAT为模板体外扩增得到片段DCF1-TAT,将测序正确的目的片段克隆入原核表达载体p ET32a,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并优化表达条件。以尿素溶解包涵体蛋白,并优化溶解条件,通过Ni离子亲和层析柱进行纯化,再透析复性目的蛋白。用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达和纯化结果,并用Western blot进行验证。结果表明,重组表达载体p ET32a-DCF1-TAT构建成功,并在大肠杆菌Rosetta中成功表达。融合蛋白主要以包涵体形式存在,经过尿素溶解,Ni离子亲和层析柱纯化获得高纯度的目的蛋白。SDS-PAGE和Western blot检测结果显示蛋白分子量大小与预期结果相符。
- 王倩杨眉冯瑞丽王娇文铁桥
- 关键词：TAT
- 基因在脑胶质瘤细胞的抑制与凋亡中的应用
- 本发明涉及一种人源<I>dcf1</I>基因在抑制U251胶质瘤细胞系增值和诱导U251胶质瘤细胞系凋亡中的应用。本发明通过免疫电镜、原子力显微镜、CCK8增殖检测、JC-1染色、裸鼠肿瘤异位移植等方法对<I>dcf1<...
- 文铁桥谢雨琼杨眉杨清波
- 文献传递
