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携带凋亡素、内皮抑素双基因腺病毒载体的构建: 黄庆娟; 关键词：凋亡素内皮抑素腺病毒

携带凋亡素、内皮抑素双基因腺病毒载体的构建: 2012年; 目的构建携带有凋亡素(Apoptin、VP3)、内皮抑素(Endostatin)双基因的重组腺病毒载体,为其在肿瘤治疗的应用研究打下基础。方法将VP3基因和Endostatin基因克隆入腺病毒穿梭质粒pDC316中,将该穿梭质粒与腺病毒骨架质粒pBHGloxE1,3Cre共转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒颗粒Ad-vp3-IRES-sEndo-his。其后挑选病毒空斑获取克隆进行小剂量扩增并提取病毒DNA进行PCR、RT-PCR检查以筛选和鉴定毒种,之后大剂量扩增所选得的病毒克隆并进行纯化、测定病毒的滴度。结果所得腺病毒经PCR、RT-PCR检测表明重组腺病毒Ad-vp3-IRES-sEndo-his包装成功。测定病毒50%组织培养感染剂量(TCID50)为5.7×109/ml,病毒颗粒滴度(VP)为1.9×1011/ml。结论成功构建携带凋亡素、内皮抑素双基因腺病毒载体并对其进行了大剂量扩增及提纯,达到了细胞及动物实验使用的标准。; 黄庆娟朱惠明王娜张茹; 关键词：凋亡素内皮抑素腺病毒

超声靶向微泡破碎介导EGFP基因转染肝癌细胞的影响因素研究被引量：1: 2012年; 观察超声靶向微泡破碎(ultrasound targeted microbubble destruction,UTMD)在不同转染条件和细胞状态下对肝癌细胞HepG2转染率及细胞活性的影响。体外培养HepG2细胞,随机分为4组:质粒组、微泡+质粒组、超声+质粒组和超声+微泡+质粒组,各组再分为贴壁和悬浮状态2组。悬浮状态的超声+微泡+质粒组根据质粒和微泡浓度不同分为微泡浓度组和质粒浓度组,转染24 h后在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在HepG2细胞中的表达,流式细胞仪测定细胞转染率,MTT法检测细胞活性。结果在超声声强2w/cm2、占空比20%、照射时间60 s的超声参数作用下,质粒5μg/ml、微泡:细胞20:1时,悬浮状态细胞转染率为7.33%±0.98%,存活率为90.37%±1.80%贴壁状态细胞转染率为1.56%±0.81%,存活率为81.10±1.26%,两者比较有显著差异(P<0.01)。悬浮状态下,提高质粒和微泡浓度至质粒10μg/ml、微泡:细胞40:1时转染效率增至15.63%±1.81%,且细胞生存率>80%。结论相同转染条件下悬浮状态细胞转染率及存活率明显优于贴壁状态。优化质粒、微泡浓度可进一步提高超声微泡介导的基因转染效率和存活率。; 李银鹏朱惠明张园王娜王菲黄庆娟; 关键词：HEPG2细胞 EGFP基因转染率存活率

超声靶向微泡破碎联合半乳糖聚乙烯亚胺促凋亡素基因治疗肝癌移植瘤的实验被引量：1: 2012年; 目的探讨超声靶向微泡破碎(UTMD)联合半乳糖聚乙烯亚胺(PEI-Gal)介导凋亡素基因对小鼠肝癌移植瘤的抑制作用。方法建立c57BL/6小鼠皮下肝癌移植瘤模型,随机分为4组:对照组;PEI-Gal+质粒组;PEI-Gal+超声+质粒组;PEI-Gal+UTMD+质粒组。对组织行冰冻切片采用免疫荧光法检测转染率、Tunel检测凋亡率。观察肿瘤的体积和组织学变化,同时计算抑瘤率。采用免疫组织化学法检测移植瘤Bcl-2及Caspase-3蛋白在各组肿瘤标本中的表达。结果 PEI-Gal+UTMD+pEG-FP-N3组基因转染效率明显高于对照组、PEI-Gal+质粒组与PEI-Gal+超声+质粒组(P均<0.01)且对组织无明显损伤。治疗12天后PEI-Gal+UTMD+pCDNA-VP3组肿瘤凋亡率(34.57%±3.56%)、抑瘤率(56.6%)均显著高于对照组和PEI-Gal+质粒组(P均<0.01)。肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达明显下降,Caspase-3蛋白表达增加与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论超声靶向微泡破碎联合半乳糖聚乙烯亚胺能显著增强基因转染效率,且对组织无明显影响。联合凋亡素基因能通过诱导凋亡抑制肿瘤生长发挥抗瘤作用。; 张园朱惠明李银鹏王娜王菲黄庆娟姜岭梅; 关键词：凋亡素基因肝癌移植瘤

超声靶向微泡破碎联合半乳糖聚乙烯亚胺介导凋亡素基因诱导肝癌细胞凋亡的研究: 2012年; 目的:探讨超声靶向微泡破碎(ultrasound targeted microbubble destruction,UTMD)联合半乳糖聚乙烯亚胺(PEI-Gal)介导凋亡素基因(VP3)诱导肝癌细胞HepG2凋亡的影响。方法:体外培养HepG2细胞,随机分为4组:(1)对照组;(2)PEI-Gal组;(3)PEI-Gal+超声组;(4)PEI-Gal+超声+微泡组。转染24h后荧光显微镜观察pEGFP-VP3在HepG2细胞中的表达,流式细胞仪检测转染效率,RT-PCR和Western blot分别检测VP3 mRNA和蛋白表达水平,AnnexinV-FITC/PI检测细胞凋亡率。结果:流式细胞仪、RT-PCR和Western blot分析表明,PEI-Gal+超声+微泡组的转染效率为(28.83±2.07)%、VP3 mRNA水平为0.92±0.02,蛋白水平为1.65±0.06,HepG2凋亡率为(37.40±2.12)%,均显著高于其他各组(均P<0.01)。结论:UTMD联合PEI-Gal可明显提高VP3基因转染HepG2细胞的效率及在HepG2细胞内的表达,增加HepG2细胞的凋亡率。; 张园朱惠明李银鹏王娜姜岭梅黄庆娟; 关键词：肝肿瘤超声学凋亡素基因凋亡

胃底腺息肉患者的临床特征及其与幽门螺旋杆菌感染的相关性被引量：9: 2014年; 目的:探讨胃底腺息肉(fundic gland polyps F G P s)的临床特征,及其与幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的关系.方法:收集深圳市人民医院消化内科2011-10/2013-10 276例FGPs患者的临床资料进行汇总分析,并按照FGPs患者的年龄、性别比例选取胃镜检查正常的患者276例为对照组,分析FGPs与H.pylori感染的关系.结果:在行胃镜检查31680例患者中,检出276例胃底腺息肉,检出率为0.87%,以女性多见.临床上多为常规体检发现,部分表现为功能性消化不良和胃食管反流病.胃镜下多表现为胃体136例(49.3%),其次为胃底息肉108例(39.1%),单发197例(71.4%)或多发79例(28.6%).病理表现为息肉内有被覆胃底腺的上皮的囊肿,均无异形增生或肠上皮化生.FGPs病例组与对照组相比,病例组中H.pylori的感染率明显减低(OR=0.135,95%CI:0.073-0.250).结论:胃底腺息肉是一种具有良性倾向的息肉,其与H.pylori感染呈负相关.; 张茹徐正磊张定国李银鹏黄庆娟王立生; 关键词：幽门螺旋杆菌内镜

腺病毒介导的凋亡素、内皮抑素双基因对食管癌的实验研究被引量：3: 2012年; 目的探讨携带有凋亡素(vp3、Apoptin)、内皮抑素(Endostatin)双基因的重组腺病毒载体在食管癌等多种肿瘤细胞内的表达情况及致凋亡作用,为进一步的食管癌治疗应用研究打下基础。方法将已纯化的携带凋亡素和内皮抑素基因的腺病毒Ad-vp3-IRES-sEndo-His感染食管癌细胞Eca-109、小鼠肝癌细胞Hepa1-6、结肠癌细胞LoVo提取各种细胞RNA,针对凋亡素、内皮抑素基因的表达进行RT-PCR检测,同时对感染腺病毒Ad-vp3-IRES-sEndo-His、Ad-vp3的食管癌细胞通过流式细胞仪、Hoechst33258染色等方式进行细胞凋亡率的检测。结果 RT-PCR检测显示被感染的多种肿瘤细胞均可表达凋亡素、内皮抑素基因的mRNA,Ho-echst33258染色显示被Ad-vp3-IRES-sEndo-His感染的食管癌细胞出现凋亡形态学改变,用流式细胞仪测定时段最高凋亡率达47.7%,与对照组相比具有统计学意义(P<0.05)。结论携带凋亡素及内皮抑素双基因的腺病毒载体能在多种肿瘤细胞中表达,感染食管癌细胞后,能有效诱导其凋亡且其致凋亡率高于仅携带凋亡素的单基因腺病毒载体。; 黄庆娟朱惠明王娜张茹; 关键词：凋亡素内皮抑素腺病毒食管癌

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