王斌
- 作品数：32 被引量：69H指数：5
- 供职机构：昆明学院更多>>
- 发文基金：云南省应用基础研究基金国家自然科学基金云南省教育厅科学研究基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生文化科学更多>>
- 青阳参叶片DNA的提取与AFLP反应体系的建立被引量：2
- 2008年
- 以青阳参叶片12个样品为材料,利用改良的CTAB法,提取得到高质量的青阳参DNA,通过对AFLP分析过程中DNA的提取、酶切、连接、预扩增、选择性扩增、电泳和银染等诸多因素进行优化、分析,建立了一套适合青阳参的AFLP技术优化体系,得到了清晰的青阳参AFLP指纹图谱,为青阳参基因库的建立、遗传多样性研究等奠定了理论基础。
- 王定康王斌李树辉孙桂芳
- 关键词：青阳参DNA提取AFLP分析指纹图谱
- 蛭类转录组中EST-SSR分析及抗凝血相关分子标记的挖掘被引量：8
- 2017年
- 目的对蛭类转录组进行SSR分析,是开发功能分子标记、开展对药用蛭类资源的开发利用及进行遗传背景监测的必要手段。方法利用与医学密切相关的医蛭科棒纹牛蛭Poecilobdella javanica和日本医蛭Hirudo nipponia、黄蛭科宽体金线蛭Whitmania pigra和山蛭科洞穴山蛭Heamadipsa cavatuses sp.nov.共14个样本,通过RNA测序及转录组分析,筛选吸血差异unigene,并比较4个种的SSR标记特征和分布,用于挖掘抗凝血相关功能EST-SSR。结果通过SSR密度分析发现,SSR在棒纹牛蛭、日本医蛭、宽体金线蛭和洞穴山蛭转录组中的间隔长度为4 723、6 026、8 059、8 144 bp;SSR组成分析发现三碱基重复的基序占蛭类SSR类型组成中绝大多数;另外,洞穴山蛭的SSR组成与其他3种存在明显区别。比较4种吸血蛭吸血前后转录组中表达丰度显著差异的unigene群,发现4种蛭中包含SSR且抗凝血相关的重叠unigene类群在转录组中呈较高的片段多态性。结论 unigene片段长度、SSR的密度、组成和分布特点能反映物种之间的分类关系;4种蛭重叠的抗凝血相关分子功能对应的EST-SSR,可作为抗凝血相关的功能分子标记侯选EST-SSR。
- 王斌孙静刘凌云乔永锋程霞仝向荣王德斌
- 关键词：EST-SSR
- MAR序列调控弱启动子构建高效表达载体的方法
- 本发明公开了一种MAR序列调控弱启动子构建高效表达载体的方法，所述方法选择不含增强子且在转录起始位点上含有CpG岛的启动子为靶启动子，用所述靶启动子替换pEGFP‑C1载体上的CMV启动子，构建中间载体，在中间载体的As...
- 王斌刘凌云范志伟殷旭东王德斌王定康
- 文献传递
- 一种利用激活RNA构建高效表达载体的方法
- 本发明公开了一种利用激活RNA构建高效表达载体的方法，所述方法利用带近端增强子的OCT4基因启动子为靶启动子，通过体外重组技术，在所述靶启动子之前插入MAR序列，在所述靶启动子下游插入一个表达靶向所述靶启动子的特异小激活...
- 王斌刘凌云程霞王定康殷旭东王德斌
- 文献传递
- 启动子上的增强子和CpG岛在转基因沉默和位置效应中的作用
- 2023年
- 目的探讨哺乳动物细胞表达载体启动子上增强子和CpG岛调控元件在转基因沉默和位置效应中的作用。方法应用带增强子的八聚体结合转录因子4(OCT4)基因启动子、带CpG岛的性别决定区Y框蛋白2(SOX2)基因启动子、带增强子和CpG岛的巨细胞病毒(CMV)基因启动子以及不含近端增强子和CpG岛的NANOG基因启动子构建哺乳动物细胞表达载体,并分别转染中国仓鼠卵巢细胞株CHO-K1细胞和人胚胎肾细胞(HEK293)。应用Image J软件中Mean算法计算OCT4、SOX2、CMV和NANOG基因启动子在CHO-K1细胞和HEK293细胞介导的增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达的荧光强度,应用Image J软件中Mininum、Maxentropy、Mean 3种算法分别计算OCT4、SOX2、CMV和NANOG基因启动子4种载体稳定转染CHO-K1细胞后形成的多个单细胞克隆混合生长样品在同一个样本中最大荧光强度的细胞、大于平均荧光强度的所有细胞和最小荧光强度的所有细胞的EGFP平均荧光强度;应用有限稀释法从G418筛选后获得的稳定转染的多个单克隆混合的CHO-K1细胞中,分别筛选含EGFP的pE-C1、pE-Oct4、pE-Sox2、pE-Nanog质粒稳定转染CHO-K1细胞的单克隆细胞,每个质粒载体随机筛选3个单克隆细胞,应用Image J软件分析EGFP平均荧光强度;应用酶联免疫吸附法检测转染第20、30天CHO-K1细胞中EGFP蛋白表达水平,应用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测转染第20、30天CHO-K1细胞中EGFP mRNA表达水平。结果SOX2基因启动子在CHO-K1细胞和HEK293细胞中介导表达的EGFP平均荧光强度比较差异无统计学意义(t=0.770,P>0.05)。OCT4、CMV、NANOG基因启动子在CHO-K1细胞中介导表达的EGFP平均荧光强度显著高于HEK293细胞(t=7.000、11.100、4.900,P<0.05)。SOX2基因启动子于转染第20、30天在CHO-K1细胞中介导表达的EGFP蛋白水平比较差异无统计学意义(t=0.330,P>0.05)。CMV基因启动子于转染第20天在CHO-K1细胞中介导表达的EGFP蛋�
- 肖捷纪华王宵王静刘凌云李美荃王斌
- 关键词：增强子CPG岛转基因沉默
- MAR序列调控弱启动子构建高效表达载体的方法
- 本发明公开了一种MAR序列调控弱启动子构建高效表达载体的方法，所述方法选择不含增强子且在转录起始位点上含有CpG岛的启动子为靶启动子，用所述靶启动子替换pEGFP‑C1载体上的CMV启动子，构建中间载体，在中间载体的As...
- 王斌刘凌云范志伟殷旭东王德斌王定康
- 文献传递
- 高CG片段与低CG启动子联用构建高效表达载体的方法
- 本发明公开了一种高CG片段与低CG含量的启动子联用构建高效表达载体的方法，所述方法选择含增强子且在转录起始位点上游CG含量＜50%的启动子为靶启动子；用所述靶启动子替换商业载体pEGFP‑C1上的外源基因表达框中CMV启...
- 王斌刘凌云殷旭东范志伟王德斌
- 文献传递
- 生态因子对滇重楼花药开裂的影响被引量：3
- 2016年
- 滇重楼为延龄草科重楼属植物,具有极高的药用价值,由于重楼传统药用部位生长缓慢、繁殖力低下,以及人们对野生重楼资源的过度采挖使其资源日趋枯竭。滇重楼的花药在整个花期中存在开裂-关闭的现象,花药的有效闭合应是保护花粉、延长花粉寿命、增强雄性适合度的一种适应机制。该研究以滇重楼为对象,通过设计正交实验和对比实验,观测其花药开裂过程中的光照强度、温度、湿度的变化,探究光照强度、温度、湿度等生态因子对滇重楼花药开裂的影响以及滇重楼花药开裂与生态因子变化的关系。结果表明:(1)在滇重楼花药开裂的过程中,光照强度增强、温度升高、相对湿度下降;(2)温度是影响滇重楼花药开裂时间的主导因子,升温促进花药开裂,降温促进花药关闭;(3)高湿度及黑暗推迟花药开裂,但并不能阻止花药开裂;(4)低温可使滇重楼花药持续关闭,而光照强度越高,花药持续关闭所需的温度越低。该研究有利于解释滇重楼花药白天开裂夜晚关闭的现象与环境因子的关系,对滇重楼的栽培育种提供理论指导。
- 赵峥尹芳园耿开友侯秀丽王斌王定康
- 关键词：滇重楼生态因子花药开裂
- 云南省蛭类动物及其区系的重要性被引量：1
- 2009年
- 近年来的野外调查结果表明,云南省现有蛭类动物30种,较过去报道的24种又增加了6种.其中云南牛蛭Poecilobdella. yunanensis sp. nov.和洞穴山蛭Haemadipsa cavatuses sp. nov.为在云南发现的新种,扁舌蛭Glossiphonia Complanata,蟹蛙蛭B. cancricola,日本医蛭H. nipponia,勃氏齿蛭O. blanchardi等4种为云南省的新记录.依据淡水和陆生蛭类的生态地理分布对云南省的蛭类区系进行讨论,结果表明云南省的蛭类区系特征显著.
- 王德斌仝向荣王斌郭庆杨黎江沈放
- 关键词：蛭类区系
- 基于系统生物学的融合蛋白辅助筛选系统初探
- 2010年
- 通过分析基因进化过程,以"融合"蛋白产生新功能或新蛋白质为实例,总结出蛋白融合的相关规则,规则包括协同作用、联合作用、多功能组合、多聚体组合和结构域重组等,根据这些规则设计了一个融合蛋白辅助筛选系统,用于融合蛋白规律的探讨以及为蛋白改造和设计提供辅助方案.
- 王斌王德斌邱莎郭庆申时凯
- 关键词：蛋白融合蛋白质设计
