王彦
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- 重组人睫状神经因子的表达、纯化以及聚乙二醇修饰被引量：2
- 2009年
- 目的研究重组人睫状神经因子(rh-CNTF)的表达、纯化及聚乙二醇化修饰、纯化方法。方法重组人睫状神经因子(rh-CNTF)工程菌经37℃培养至对数生长期,加入IPTG诱导4h,经QSepharose F.F凝胶柱纯化和复性后得到纯化的rh-CNTF。以体外培养鸡胚背根神经节(DRG)方法测定重组蛋白rh-CNTF的神经营养活性。用单甲氧基聚乙二醇丁醛(mPEG-ButyrALD-20k)对rh-CNTF进行修饰,所得修饰产物经DEAESepharose F.F和Superdex 75凝胶分离纯化后获得mPEG-rh-CNTF偶联物。结果目的蛋白占总蛋白30%左右,为包涵体,经QSepharose F.F凝胶柱纯化和复性,获得纯度达90%的rh-CNTF。表达的rh-CNTF能促进培养的鸡胚背根神经节神经突起的生长。修饰后的单聚PEG-rhCNTF经DEAESepharose F.F和Superdex 75凝胶纯化后纯度达到95%。结论确立了rh-CNTF蛋白表达纯化及PEG修饰的方法。
- 王彦范开夏永鹏张继兰梅翔陈海容李秀梅邱宗荫
- 关键词：纯化聚乙二醇修饰
- 重组人睫状神经因子聚乙二醇化条件的优化被引量：1
- 2009年
- 目的对单甲氧基聚乙二醇丁醛(mPEG-ButyrALD,相对分子质量20×103)修饰重组人睫状神经因子(rh-CNTF)的条件进行优化。方法优化了pH值、温度、时间、rh-CNTF与PEG的修饰比例、rh-CNTF浓度等修饰条件,并对修饰产物行分离纯化。鸡胚背根节培养法检测和比较rh-CNTF和PEG-rhCNTF的体外生物学活性。结果rh-CNTF与PEG的修饰比例、rh-CNTF的浓度和pH值是主要影响因素,最佳pH为6.5,最佳rh-CNTF浓度为1～2 mg/ml,rh-CNTF与PEG的最佳质量比为1∶1,时间和温度影响甚微。rh-CNTF的体外神经营养活性约为PEG-rhCNTF的2倍。结论本法优化了修饰重组人睫状神经因子的条件。
- 王彦范开夏永鹏张继兰李秀梅邱宗荫
- 关键词：聚乙二醇修饰
- 人睫状神经因子类似物rh-CNTF（A~（17）R~（63）15）的重组制备、PEG修饰和生物学特性研究
- 蛋白质药物具有专一性强、时效高等优点,在临床治疗学中正得到越来越广泛的应用,但这类药物目前还存在着一些必须解决的问题,如给药系统不完善、定位给药困难,稳定性差、容易被酶类降解,因从循环系统中被快速清除导致体内半衰期短,生...
- 王彦
- 关键词：聚乙二醇修饰药效学
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