宋柳江
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 供职机构：中南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 2型重组腺相关病毒介导的β-地中海贫血基因治疗实验被引量：6
- 2011年
- 目的探讨2型重组腺相关病毒(rAAV2)能否有效转染重型β-地中海贫血患者造血细胞,通过体外途径基因治疗地中海贫血。方法 6只BALB/c裸小鼠分为转染组(n=4)和未转染组(n=2),经X射线照射后,分别移植入经rAAV2β-珠蛋白病毒转染(MOI=50)或未转染的β41-42/β654杂合子型重型β-地中海贫血流产胎儿造血细胞,转染后第28天和第70天分别处死rAAV2转染小鼠(n=2)和未转染受体小鼠(n=1)。采用RT-PCR、等位基因特异性PCR(ASPCR)法检测rAAV2介导的人β-珠蛋白基因在小鼠骨髓中的表达,并以高压液相色谱法量化分析受体小鼠外周血中人β-珠蛋白肽链的水平。结果①RT-PCR于所有受体小鼠样本中均可检测到人β-actin和人β-珠蛋白基因的表达。②ASPCR检测中,β41-42突变基因稳定表达于所有受体小鼠,β654突变基因仅在移植后第70天受体小鼠样本中被检测到;移植后第28天,rAAV2转染及未转染小鼠体内均可检测到主要来自于β654突变基因的正常β-珠蛋白基因表达;但至移植后第70天,仅rAAV2转染小鼠骨髓样本中仍可检测到rAAV2-β-globin载体介导的正常β-珠蛋白基因表达。③移植后第70天处死的转染小鼠外周血中人β链/α链分别为0.328和0.325,相对未转染组0.135的比值,两者的增加百分比高达144.78%和142.54%。结论经rAAV2介导基因修饰后的重型β-地中海贫血患者造血细胞在体内可长期稳定表达正常人β-珠蛋白基因,而其分化产生的外周血人红系细胞内β-珠蛋白肽链的合成增加。
- 田晶王峰薛金凤赵霏钟梅宋柳江谭孟群
- 关键词：重组腺相关病毒Β-地中海贫血基因治疗
- 优化rAAV载体以高效转导HSCs并介导红系特异性蛋白表达
- 前言：
β-地中海贫血、镰刀细胞性贫血等血红蛋白疾病是由β-珠蛋白基因单点突变所导致的、全世界发病率最高的遗传病。目前唯一可以根治此类疾病的治疗方法是异体骨髓移植,缺少与患者人类白细胞抗原/(HLA/)相匹配的骨...
- 宋柳江
- 关键词：腺相关病毒载体基因转导
- 文献传递
- 2型腺相关病毒载体介导正常人β珠蛋白基因在重型地贫流产胎儿造血细胞中的表达被引量：4
- 2010年
- 目的:探讨2型重组腺相关病毒(recombin antadeno-associated virus 2,rAAV2)载体介导人β-珠蛋白基因转染地贫患者造血细胞治疗β-地中海贫血的可行性。方法:分离β41-42/β654杂合子型重型β-地贫流产胎儿造血细胞,经rAAV2-β-globin病毒转染(MOI=50)后移植入经X射线照射的BALB/c裸小鼠体内,分别于移植后14d、21d处死受体小鼠,RT-PCR及等位基因特异性PCR法检测人珠蛋白基因在受体小鼠体内的表达。结果:RT-PCR方法于3只受体小鼠骨髓样本中成功检测到人β-actin和人β-珠蛋白基因的表达,而21d处死的转染与对照小鼠外周血样本中未检测到人β-珠蛋白基因表达;等位基因特异性PCR方法在所有受体鼠体内同时检测到β41-42和β654突变基因,以及正常β-珠蛋白基因的表达,但rAAV2-β-globin转染组小鼠体内正常人β-珠蛋白基因表达水平明显高于对照组。结论:rAAV2可有效转染β41-42/β654杂合子型重型地中海贫血患者造血细胞,并通过exvivo途径介导β-珠蛋白转基因的体内表达,提高红系细胞内正常β-珠蛋白基因的表达水平。
- 田晶王峰薛金凤赵霏宋柳江谭孟群
- 关键词：重组腺相关病毒Β-地中海贫血
- 胎儿骨髓间充质干细胞分离培养及生物学特性研究
- 前言探讨胎儿骨髓来源的间充质干细胞（MSCs）的体外培养及其生物学特性,为临床使用MSCs进行疾病的细胞治疗提供实验基础。方法取正常流产胎儿四肢骨髓,采用密度梯度离心法、贴壁培养和消化时间控制相结合,用含10%胎牛血清（...
- 张娟刘珍清栗炳南宋柳江谭孟群
- 文献传递
- 人对氧磷酶1基因重组腺相关病毒载体的构建及表达
- 2010年
- 目的：构建带有人对氧磷酶1（hPONI）基因的重组腺相关病毒（rAAV）载体，并检测其转染大鼠骨髓内皮祖细胞（EPCs）后hPON1的表达。方法：提取流产胎儿肝脏的总RNA，RT-PCR获得cDNA，设计引物通过PCR获得PON!基因片段，将其与pGEM—TEasy载体连接，将PON1基因片段切下，插入到质粒pAAV—IRES—GFP的多克隆位点，获得质粒pAAV—PON1-IRES—GFP，经酶切和测序鉴定。包装的病毒rAAV—PON1用斑点杂交检测滴度，并用其转染EPCs检测hPON1在mRNA水平的表达。结果：pAAV—PON1-IRES-GFP酶切和测序结果完全正确。斑点杂交检测病毒的滴度为1．7×10^10g／mL，RT—PCR结果显示病毒转染EPCs后存在hPON1的表达。结论：成功构建了pAAV—PON1-IRES—GFP质粒，包装出较高滴度的rAAV—PON1，并且转染EPCs后可以检测到hPON1表达。
- 王峰田晶薛金凤赵霏宋柳江谭孟群
- 关键词：腺相关病毒动脉粥样硬化对氧磷酶1内皮祖细胞
