刘辉
- 作品数：13 被引量：111H指数：5
- 供职机构：山东农业大学植物保护学院更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技攻关计划现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金国家留学基金更多>>
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- 甜菜夜蛾田间种群抗药性及其解毒代谢酶活性变化被引量：9
- 2010年
- 用点滴法和浸叶法分别测定了同一地区不同年份甜菜夜蛾田间种群及室内饲养1年后的抗性种群3龄幼虫的抗药性水平。结果表明甜菜夜蛾田间种群对杀虫剂抗性水平的变化与解毒代谢酶活性密切相关。
- 王信远王炳太刘永杰刘辉贺金肖鹏
- 关键词：甜菜夜蛾田间种群
- 烟草赤星病菌(Alternaria longipes)产角质酶液体发酵条件的优化被引量：1
- 2009年
- 以基础培养基(查彼培养基+碳酸钙+苹果角质)为营养优化了长柄链格孢(Alternaria longipes)产角质酶的环境和营养条件。结果表明,最佳产酶的环境条件是:培养时间8d,培养温度25℃,pH5.5;通过正交试验确定最佳产酶的营养条件是:蔗糖3%,干酪素1%,吐温-800.3%;酶活高达175.2U/mL,是基础培养基酶活力的11.0倍。
- 刘辉刘爱新梁元存刘菲魏芳芳
- 关键词：烟草赤星病菌发酵条件
- 核黄素对烟草悬浮细胞活性氧和防卫反应的激活作用被引量：5
- 2009年
- 【目的】研究核黄素处理烟草悬浮细胞后,激活的氧迸发和防卫反应,以及钙信号和蛋白激酶对这些事件的影响。【方法】1mmol·L-1核黄素处理烟草悬浮细胞,用半定量RT-PCR(reverse transcriptase-polymerase chain reaction)和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)等方法测定一系列防卫反应,并用钙离子通道抑制剂LaCl3、钙离子螯合剂EGTA和一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抑制剂staurosporine处理细胞,测定防卫反应的变化。【结果】1mmol·L-1核黄素处理悬浮细胞后,产生了氧迸发、导致培养基质碱性化、增强4种防卫基因PR(pathogenesis-related)-1a、PR-1b、PAL(phenylalanine ammonia lyase)和LPO(lignin peroxidase)表达以及scopoletin的积累;LaCl3、EGTA和staurosporine可以不同程度地抑制这些防卫反应。【结论】核黄素能够激活烟草悬浮细胞的氧迸发和防卫反应,在信号转导中钙信号和蛋白质磷酸化参与了这些过程。
- 刘菲魏芳芳王蕾刘辉梁元存刘爱新
- 关键词：核黄素烟草活性氧防卫反应
- 虫酰肼对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制作用被引量：2
- 2010年
- 【目的】研究证实虫酰肼是否对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)酚氧化酶活性具有抑制作用。【方法】采用生物化学方法,分别测定虫酰肼对甜菜夜蛾5龄幼虫离体酚氧化酶的作用特点和用虫酰肼浸泡饲料饲喂5龄幼虫后,虫酰肼对幼虫头部、血淋巴及表皮组织酚氧化酶活性的抑制作用。【结果】随着虫酰肼浓度增大,酚氧化酶活力呈逐渐下降趋势,虫酰肼对酚氧化酶的抑制中浓度(IC50)为5.43μmol·L-1。虫酰肼对酚氧化酶的抑制作用表现为混合型抑制,游离酶抑制常数(K i)和酶-底物络合物抑制常数(K is)分别为11.223μmol·L-1和34.036μmol·L-1。通过研究金属铜离子和酶液对虫酰肼吸收峰的影响,推测虫酰肼对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制作用不是与该酶活性中心的铜离子结合,而可能是与酚氧化酶蛋白结合发生作用有关。用28.41μmol·L-1和85.23μmol·L-1亚致死剂量浓度的虫酰肼分别处理甜菜夜蛾5龄幼虫24、48和72h后,测定其头部、血淋巴和表皮酚氧化酶的活性。结果表明,随着用虫酰肼处理时间延长,两个剂量的虫酰肼对幼虫头部、血淋巴和表皮酚氧化酶的抑制作用基本呈逐渐增大趋势;处理后相同时间,高剂量的虫酰肼对酚氧化酶活性的抑制率基本上高于低剂量的抑制率;虫酰肼对头部酚氧化酶的抑制率最高,血淋巴次之,表皮最低。【结论】虫酰肼对甜菜夜蛾酚氧化酶具有明显的抑制作用,幼虫新表皮形成过程受到阻碍可能与虫酰肼抑制酚氧化酶的活性有关。
- 邱秀翠刘永杰焦艳艳刘辉
- 关键词：甜菜夜蛾虫酰肼酚氧化酶
- 虫酰肼对甜菜夜蛾多巴脱羧酶和酪氨酸羟化酶的抑制作用被引量：5
- 2012年
- 虫酰肼模拟昆虫蜕皮激素的作用干扰新表皮的形成。为了探讨虫酰肼对昆虫新表皮形成的影响是否与抑制表皮形成相关酶的活性有关,本研究应用高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-RP),测定了甜菜夜蛾Spodopteraexigua5龄幼虫用虫酰肼处理不同时间(24,48和72h)后多巴脱羧酶和酪氨酸羟化酶的活性。结果表明:用LC11(28.41μmol/L)和LC33(85.23μmol/L)两个亚致死剂量的虫酰肼处理5龄幼虫后,多巴脱羧酶和酪氨酸羟化酶的活性均受到明显抑制,高浓度的抑制作用大于低浓度的抑制作用。随着处理时间的延长,同一剂量的抑制作用逐渐增强。进一步测定虫酰肼处理24,48和72h后5龄幼虫血淋巴、脂肪体、中肠、表皮和头部的多巴脱羧酶和酪氨酸羟化酶的活性,可看出虫酰肼对幼虫不同组织的多巴脱羧酶和酪氨酸羟化酶的活性也具有相似的抑制作用。结果提示,虫酰肼对甜菜夜蛾幼虫多巴脱羧酶和酪氨酸羟化酶活性具有明显抑制作用,幼虫新表皮形成受阻可能与虫酰肼抑制多巴脱羧酶和酪氨酸羟化酶的活性有关。
- 王涛邱秀翠焦艳艳刘辉刘永杰
- 关键词：甜菜夜蛾虫酰肼酪氨酸羟化酶酶活性
- 斜纹夜蛾溴氰菊酯抗性和敏感品系酯酶的生化特性研究被引量：3
- 2009年
- 测定了斜纹夜蛾酯酶的动力学参数,酯酶同工酶电泳和杀虫剂(溴氰菊酯和丙溴磷)对酯酶的抑制效应。结果表明,抗性品系与敏感品系酯酶的Km值之间均没有显著差异,但抗性品系酯酶的Vmax值比敏感品系的高且差异显著。在酯酶的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱中,抗性品系中所含的酯酶同工酶条带数比敏感品系的多;溴氰菊酯浓度在12.5μmol/L时,对敏感品系酯酶的抑制率最大,约为30%,而对抗性品系酯酶的抑制率则随着溴氰菊酯浓度的升高而升高,溴氰菊酯浓度在50μmol/L时抑制率最大,约为75%;但是丙溴磷对抗、感品系的酯酶的抑制效应较为一致。上述结果说明在抗性品系中出现了与敏感品系不同的酯酶同工酶,但这些同工酶并没有显著改变抗性品系全酯酶的Km值,仅是增强了其酯酶活性,提高了对溴氰菊酯的代谢能力。
- 黄水金秦文婧刘辉
- 关键词：斜纹夜蛾溴氰菊酯酯酶生化特性
- 烟草赤星病菌(Alternaria longipes)角质酶的纯化和特性(英文)被引量：2
- 2009年
- 本文对烟草赤星病菌Alternaria longipes产生的角质酶进行了纯化及性质测定。在含有苹果角质(诱导物)的液体培养基中培养A.longipes,第8 d达到产酶高峰。发酵液经硫酸铵沉淀、DEAE(diethylaminoethyl)Sepharose、Sephacryl S-100 HR和Phenyl-Sepharose 6 fast flow(high sub)进行纯化。通过SDS-PAGE测得蛋白分子量为59.5 kDa。该酶的最适温度为35℃,最适pH为9.0,在温度20℃～40℃及pH 4.0～10.0范围内,酶活较稳定。一些金属离子如Na+、Cu2+和Mn2+可以部分抑制角质酶活性。
- 刘辉刘菲魏芳芳梁元存赵蕾刘爱新
- 关键词：烟草赤星病菌蛋白纯化
- 斜纹夜蛾蜕皮激素受体与超气门蛋白的原核表达及活性检测被引量：4
- 2012年
- 双酰基肼类杀虫剂模拟天然蜕皮激素作用影响幼虫蜕皮。昆虫蜕皮激素受体的高度敏感性和专一性要求必须建立新的杀虫活性检测技术,以适应快速准确和大批量筛选的要求。本研究采用RT-PCR技术,获取斜纹夜蛾Spodoptera litura蜕皮激素受体(EcR)与超气门蛋白(USP)功能域目的基因,构建EcR、USP功能区基因原核表达载体(pEHISEGFPTEV-EcRcde和pEHISEGFPTEV-USPcde)。载体经诱导表达和蛋白纯化,获得EcR和USP功能区纯化蛋白。在蛋白浓度l mg/mL,3H-PonA终浓度8 nmol/L的条件下,采用放射性配基受体结合分析测定了4种药剂(虫酰肼、呋喃虫酰肼、抑食肼和灭幼脲)不同浓度下的放射性比活的变化。结果显示:随着药剂浓度的逐渐增大,前3种药剂的放射性比活都有不同程度的降低,其中虫酰肼的放射性比活降低程度最大,其次是呋喃虫酰肼和抑食肼,灭幼脲的放射性比活基本无变化。这些结果表明相同条件下虫酰肼比呋喃虫酰肼和抑食肼有更高的杀虫活力,本研究的方法可对双酰基肼类杀虫剂或者先导化合物进行初步筛选。
- 王涛邱秀翠焦艳艳刘辉刘永杰
- 关键词：斜纹夜蛾原核表达
- 斜纹夜蛾对茚虫威抗性风险分析及抗性生化机理被引量：14
- 2011年
- [目的]茚虫威是一种新型二嗪类杀虫剂,作用机制独特,探讨了斜纹夜蛾对茚虫威的抗性风险和抗性机理。[方法]采用饲料浸毒法对斜纹夜蛾敏感种群3龄幼虫经过13代11次抗性选育,测定斜纹夜蛾对茚虫威的抗性倍数及抗性机理。[结果]斜纹夜蛾对茚虫威的抗性倍数达到69.6倍。测定选育抗性种群3龄幼虫羧酸酯酶、谷胱甘肽S-转移酶和多功能氧化酶活性结果表明:选育种群羧酸酯酶活性和多功能氧化酶O-脱甲基活性分别是选育前的3.7倍和2.5倍,差异显著;谷胱甘肽S-转移酶为选育前的1.1倍,差异不显著。[结论]斜纹夜蛾对茚虫威的抗药性与羧酸酯酶和多功能氧化酶活性有关,与谷胱甘肽S-转移酶无关。
- 刘辉肖鹏刘永杰贺金邱秀翠焦艳艳
- 关键词：斜纹夜蛾茚虫威抗性选育风险分析生化机理
- 核黄素诱导烟草悬浮细胞酚类物质和木质素的积累被引量：9
- 2009年
- 【目的】阐明核黄素对烟草悬浮细胞苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)、过氧化物酶(peroxidase,POD)活性以及抗病相关的酚类物质、木质素等次生代谢产物含量的影响。【方法】1mmol·L-1的核黄素处理烟草悬浮细胞,用生物化学、细胞化学和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)等方法测定苯丙烷代谢有关的生理和生化指标。【结果】核黄素处理后,PAL和POD活性明显升高,处理12h和24h后酶活性分别达到峰值;荧光观察细胞壁积累了更多的酚类物质,胞内和胞外scopoletin(7-羟基-6-甲氧基香豆素)含量明显升高,在处理12h后都达到峰值,分别是对照的3.6和3.9倍;细胞染色和含量测定表明,核黄素处理后烟草悬浮细胞沉积了更多的木质素,处理24h和48h后,木质素含量分别为对照的1.5和1.8倍。【结论】核黄素处理后提高了烟草悬浮细胞PAL、POD活性,积累了更多与抗病有关的次生代谢产物。
- 刘菲刘辉梁元存刘爱新魏芳芳林琎
- 关键词：烟草核黄素SCOPOLETIN木质素
