杨晓鸽
- 作品数：14 被引量：59H指数：5
- 供职机构：中国水产科学研究院长江水产研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划公益性行业(农业)科研专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 兴国红鲤AR基因的鉴定及MT暴露对幼鱼肝中AR和vtg表达的影响
- 2016年
- 实验克隆了兴国红鲤(Cyprinus carpio var singuonensis)雄激素受体(androgen receptor,AR)基因的全长c DNA序列和卵黄蛋白原(vitellogenin,vtg)基因的部分c DNA序列,并对雌性个体组织及甲基睾丸酮(Methyltestosterone,MT)暴露下幼鱼肝胰腺(以下简称:肝)中AR和vtg的表达进行检测。兴国红鲤AR基因c DNA全长3 229 bp,包括104 bp的5'非编码区(untranslation region,UTR)、编码846个氨基酸的2 541 bp开放阅读框(open reading frame,ORF)和485 bp 3'UTR。氨基酸序列同源性分析表明,兴国红鲤AR与其他鲤科鱼类AR的同源性较高。组织表达特征研究表明,AR在雌性个体的肝、卵巢、中肾、肌肉和端脑中有表达,其中肝中的表达量最高;vtg主要在肝、端脑和鳃中表达。兴国红鲤幼鱼在50μg/L的MT中暴露4周后,采用qRT-PCR检测了肝中AR和vtg的表达情况。在处理第1、2周,AR的表达受到一定的抑制,而在第3、4周其表达量升高,但其表达无显著性变化;而vtg的表达量在第3、4周均有极显著的升高。
- 李创举宋明月岳华梅阮瑞叶欢杨晓鸽
- 关键词：雄激素受体MT卵黄蛋白原
- 中华鲟piwil1基因的克隆表达特征研究被引量：5
- 2016年
- Piwi是鱼类配子发生和性腺发育的重要调控因子。本研究从中华鲟(Acipenser sinensis)性腺中克隆得到了piwi基因的全长c DNA序列,该序列长3 393 bp,开放阅读框为2 583 bp,编码860个氨基酸。氨基酸序列多重对比发现,该序列具有PAZ和PIWI保守结构域,与其他鱼类piwil具有较高同源性;系统进化分析显示,中华鲟piwil聚于piwil1分支;因此,所得序列为piwi-like 1基因,命名为Aspiwil1。荧光定量PCR研究表明,Aspiwil1为母源表达,且其表达量随着胚胎发育逐渐降低;Aspiwil1在性腺中大量表达,在脑组织中也有较低水平的表达。性腺组织切片RNA原位杂交结果表明,Aspiwil1仅在生殖细胞表达,且其杂交信号随着卵子发生逐渐增强、精子发生逐渐减弱。本研究为中华鲟配子发生过程中Aspiwil1的功能研究提供了基础。
- 李创举杨晓鸽岳华梅叶欢危起伟
- 关键词：PIWI克隆原位杂交
- 可见植入荧光标记和编码金属标对达乌尔鳇标志效果的初步研究被引量：13
- 2013年
- 2011年9月底至2012年5月,采用可见植入荧光标记(VIE)和编码金属标(CWT)标志全长为(28.06±1.79)cm的达乌尔鳇(Huso dauricus),检验了VIE和CWT的标志保持率及其对达乌尔鳇生长和存活的影响。结果显示,经过210 d实验,VIE标志达乌尔鳇吻部腹面,CWT标志达乌尔鳇背部前(第1～2块背骨板间下方肌肉)、中(第6～7块后背骨板间下方肌肉)、后(第11～12块背骨板间下方肌肉)的标志保持率分别为:95.83%、92.00%、92.59%、92.59%。实验中VIE出现破碎、脱落或迁移致使标志可识别性下降;CWT背部中这一标志部位操作最为简便。标志30 d,VIE标志组的保持率较CWT背部不同部位标志组及对照组低,且差异显著(P<0.05),此后31～210 d并无显著性差异。VIE和CWT背部不同部位标志对达乌尔鳇的生长无显著性差异。结果表明,VIE和CWT均可用于标志达乌尔鳇。进行短期大规模达乌尔鳇的标志放流可使用成本相对较低的VIE标志。
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- 达氏鲟生长激素基因cDNA克隆、表达及免疫荧光定位研究被引量：10
- 2015年
- 为研究达氏鲟(Acipenser dabryanus)生长激素(Growth Hormone,GH)基因的功能,合成了达氏鲟垂体SMART c DNA,克隆得到GH全长c DNA序列。达氏鲟GH全长c DNA序列为1008 bp,由52 bp的5′端非编码区(Untranslated region,UTR)、编码214个氨基酸的645 bp开放阅读框(Open reading frame,ORF)和311 bp的3′UTR构成。运用GH氨基酸序列构建进化树分析发现,达氏鲟与两栖类、爬行类和哺乳类的一致性要高于真骨鱼类。实时荧光定量PCR结果表明,达氏鲟GH m RNA主要在垂体和下丘脑中表达,且垂体中GH的表达量约为下丘脑的110倍;Western-blot研究结果与q RT-PCR一致,仅在垂体和下丘脑中检测到生长激素蛋白,且垂体中GH的表达量远高于下丘脑。免疫荧光定位结果显示,GH主要定位于垂体中部,下丘脑中也有少量荧光信号;苏木精-伊红组织切片染色研究表明,GH主要是由嗜酸性的生长激素分泌细胞分泌。研究为深入研究脊椎动物生长激素基因的进化和人工养殖达氏鲟的生长调控提供了基础。
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- 关键词：达氏鲟生长激素WESTERN-BLOT
- 一种鱼类鳃盖标记的方法
- 本发明提供了一种鱼类鳃盖标记的方法。所述方法1、选用pH值为6.5-7.5，水温为5-25℃，溶解氧为5-9mg/L的水为溶剂，在所述溶剂中溶入茜素红配制成浓度为50-200mg/L的茜素红水溶液；2、用充气泵向溶液中充...
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- 文献传递
- 濒危物种川陕哲罗鲑在汉江上游太白河再发现被引量：6
- 2014年
- 川陕哲罗鲑（Hucho bleekeri）隶属于鲑形目（Sahnoniformes）鲑科（Salmonidae）哲罗鲑属，是我国特有物种，主要分布在29°～33°N秦岭以南长江流域北侧一级支流岷江水系和汉江水系的上游山区激流环境中，是欧亚大陆鲑鳟鱼类中分布纬度最低的种类。
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- 关键词：汉江上游濒危物种哲罗鲑鲑鳟鱼类欧亚大陆
- 中华鲟促甲状腺激素β亚基基因(TSHβ)cDNA序列的克隆及其表达分析
- 2015年
- 【目的】克隆中华鲟(Acipenser sinesis)促甲状腺激素β亚基(TSHβ)基因,分析其序列特征和进化特征,研究其在中华鲟中的组织表达特征和不同年龄垂体中的差异表达,为中华鲟生长发育调控研究提供基础数据。【方法】采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(RACE),克隆中华鲟TSHβ,对其cDNA序列及其推导的氨基酸序列进行序列特征分析和系统发生分析;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法,对TSHβ-mRNA在中华鲟肝、心、脾、性腺、肠、垂体、下丘脑、中脑、端脑、小脑和延脑等组织中的表达状况,以及在1,3,5龄中华鲟个体垂体中的表达差异进行研究。【结果】克隆获得TSHβ基因,该cDNA序列全长649bp,5′和3′端非编码区分别为142和75bp;开放阅读框432bp,编码143个氨基酸。TSHβ亚基成熟多肽含有12个半胱氨酸(Cys)和2个N连糖基化位点。氨基酸序列多重比对表明,中华鲟TSHβ与促滤泡激素β亚基和促黄体激素β亚基的一致性分别为36%和35%,但与糖蛋白激素α亚基的一致性约为10%。与其他脊椎动物的TSHβ氨基酸序列进行比对发现,中华鲟TSHβ亚基与西伯利亚鲟一致性最高(98%);与鱼类、两栖类、鸟类和哺乳类的序列一致性分别约为44%,55%,56%和60%;脊椎动物TSHβ的Cys和N连糖基化位点位置高度保守。TSHβ亚基仅在中华鲟垂体中有表达;3龄雄性个体垂体中TSHβ的表达量约为1龄的9倍,3龄和5龄雌性个体垂体中的表达量均约为1龄的5倍左右。【结论】成功获得了中华鲟TSHβ亚基基因,该基因具有与其他动物TSHβ相似的结构和表达特征;雄性个体表达量高于雌性个体,其在中华鲟个体的生长发育过程中表达量上升。
- 李创举岳华梅叶欢杨晓鸽单喜双
- 关键词：中华鲟基因克隆
- 基于转录组测序的兴国红鲤微卫星标记筛选被引量：20
- 2016年
- 采用Illumina高通量测序技术,对兴国红鲤（Cyprinus carpio var.singuonensis）垂体和性腺等组织进行转录组测序分析,筛选微卫星标记并分析其组成及特征。结果显示：共获得13 652个微卫星标记,对所得位点进行分类,单核苷酸重复类型占47.86%,二、三、四、五、六核苷酸重复类型所占比例分别为34.43%、16.32%、1.25%、0.12%以及0.02%。随机选取30个SSR位点进行PCR验证,有20对可以扩增出清晰稳定的条带。在24个兴国红鲤个体中对上述位点进行多态性分析,结果表明,具有多态性的微卫星引物为9对。不同位点得到的等位基因范围为2~4,平均等位基因数为3.111 1±0.993 8,观测杂合度（Ho）、期望杂合度（He）以及多态信息含量（PIC）平均值分别为0.597 2±0.233 2、0.539 7±0.178 0和0.467 2±0.172 1。9个微卫星位点中,有4个显著偏离哈代-温伯格平衡（Hardy-Weinberg equilibrium,HWE）（P〈0.05）。Illumina高通量测序提供了一种直观、高效开发微卫星标记的方法,所选兴国红鲤群体遗传多样性维持较好。
- 岳华梅翟晴宋明月叶欢杨晓鸽李创举
- 关键词：微卫星标记
- 兴国红鲤ER基因克隆表达及EE2暴露对肝中ER表达的影响被引量：1
- 2017年
- 为评估环境内分泌干扰物对鱼类的影响,研究克隆了兴国红鲤雌激素受体(Estrogen receptor,ER)4种亚型ERα、ERβ、ERβ1、ERβ2的全长c DNA序列,氨基酸序列比对发现兴国红鲤ERs分别与3种鲤科鱼类相应亚型具有较高的同源性。实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测结果表明,4种ER亚型m RNA在雌雄成体组织中呈现差异表达,雌性个体中,肝、卵巢和肠中4种ERs的表达量均较高;在雄性个体中,ERα和ERβ主要在肝中表达,ERβ1、ERβ2分别在肠和精巢中的表达量最高。将150日龄的兴国红鲤幼鱼分别暴露在0.01、0.1和1 nmol/L的17α-乙炔基雌二醇(EE2)中4周,检测了雌性幼鱼肝中4种ER基因的表达变化情况。在EE2中暴露1—2周后,兴国红鲤雌性幼鱼肝中ERα基因的表达水平有极显著的提升;各浓度EE2能持续显著促进其肝中ERβ的表达;在1—2周内各浓度EE2对ERβ1表达有所抑制;第1周EE2能够抑制ERβ2基因m RNA的表达,并在0.01 nmol/L时抑制作用达到了显著的水平。上述研究结果表明,EE2暴露能诱导或抑制兴国红鲤雌性幼鱼肝中ER亚型的表达,相对于ERβ、ERβ1和ERβ2、ERα可作为EE2短期(1—2周)敏感性生物学标记。
- 宋明月单喜双陈细华岳华梅叶欢杨晓鸽李创举
- 关键词：雌激素受体兴国红鲤实时荧光定量PCR
- 一种达氏鲟精原细胞培养液及应用
- 本发明公开了一种达氏鲟精原细胞培养液及应用，本发明提供了一种无胎牛血清、以各种生长因子、非必须氨基酸、丙酮酸钠等添加剂作为替代物，同时辅以少量雄性达氏鲟血清的低血清培养基，可保证精原细胞的大量增殖且精巢细胞增殖率较低，将...
- 颉璇厉萍危起伟叶欢杨晓鸽马杰曾令兵李创举
- 文献传递
