张帅
- 作品数：7 被引量：30H指数：3
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- 贵州烟草上一株PVY坏死株系全序列测定与分析被引量：7
- 2011年
- 2007年从贵州省贵定烟区采集一株呈典型马铃薯Y病毒坏死株系(Potato virus Y vein necrosis strain,PVYN)的烟草病毒病样,经PVY鉴别寄主枸杞(Lycium barbarum L.)单斑分离纯化后,于枯斑三生烟(Samsun NN)株上保存,得到PVY分离物Guiding-3。以GenBank中已有的PVY全序列为基础,设计了3对PVY特异引物。通过总RNA提取、RT-PCR及序列测定,发现所测得的PVY分离物Guiding-3全长基因组序列(NCBI登录号为HM590405)包括9 699个碱基,整条序列仅包含一个由9 186个碱基组成的开放读码框(ORF),编码一条包含3 061个氨基酸的多聚蛋白。利用MEGA软件对所测得的PVY全序列与GenBank中已有的PVY全序列进行系统进化分析,发现Guiding-3分离物的序列与PVYN、PVYNTN、PVYN:O、PVYO、PVYNNP株系的一致性分别为98%、97%、94%、92%、85%,在已有的PVY株系中,Guiding-3分离物与PVYN株系具有较高的进化亲缘关系。另外,还对PVY的分子变异进行了初步讨论。
- 张帅杨金广王凤龙钱玉梅申莉莉王永
- 关键词：烟草马铃薯Y病毒全序列分析
- 非洲猪瘟血清抗体免疫过氧化物酶单层试验检测方法的建立和应用
- 非洲猪瘟（African swine fever,ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）引起的家猪和野猪的一种急性、烈性、高度接触性传染病，发病率和致死率高达100％。目...
- 张帅
- 关键词：非洲猪瘟疾病诊断血清学检测
- 文献传递
- 生物炭施用对潮土团聚体碳氮及微生物特性的影响
- 土壤团聚体是土壤肥力的物质基础，也是微生物活动的主要场所，在土壤养分周转中起核心作用。生物炭作为一种土壤改良剂，能够提升土壤肥力和改善土壤微生态环境。目前有关生物炭对土壤理化性质及微生物特性影响的研究多集中在土体水平上，...
- 张帅
- 关键词：生物炭微生物特性
- 文献传递
- 我国主要烟区PVY株系分化研究
- 采集表现典型马铃薯Y病毒（PVY）病症状的烟叶样品,双抗夹心酶联免疫法（Double Antibody Sandwich Enzyme-linked Immunosorbent Assay,DAS-ELISA）检出51个...
- 张帅
- 关键词：马铃薯Y病毒株系CP基因
- 文献传递
- 烟草PVYReal-TimePCR定量检测体系的建立及应用被引量：5
- 2010年
- 马铃薯Y病毒是近年来危害烟草生产的重要病毒之一,严重影响烟草的产量与品质。本研究利用DNAMAN软件对GenBank数据库中已登录的马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)全基因组序列进行序列比对,设计引物,以烟草肌动蛋白基因为内参,建立了烟草PVY的实时定量检测体系。获得的real-time PCR扩增基线平整,指数扩增明显,斜率大;稳定性和重现性好,变异系数小;循环阈值与PCR起始模板量对数之间存在良好的线性关系。与DAS-ELISA相比,该方法具有高效、灵敏、特异性强等优点,为从分子生物学水平上检测烟草中PVY提供了新的技术手段。
- 刘晓霞杨金广王凤龙钱玉梅申莉莉张帅王长栓黄瑾
- 关键词：PCRPVY
- 烟草中TMV、CMV和PVY多重RT-PCR检测体系的建立与应用被引量：15
- 2010年
- 利用DNAMAN软件对GenBank数据库中已登录的烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaicvirus,CMV)和马铃薯Y病毒(Potato virusY,PVY)全基因组序列进行序列比对,选择最保守的区域,进行相应病毒的引物设计,建立了多重RT-PCR检测烟草中TMV、CMV和PVY的技术体系。对3条扩增片段进行回收、测序和BLAST比较,结果表明多重RT-PCR所扩增的片段序列均与预期设计序列相符,同源性均在98%以上。利用多重RT-PCR对广西区132个烟草病毒病样品进行检测分析,结果表明TMV检出率为91.7%,CMV检出率为18.2%,PVY检出率为55.3%。较单一的RT-PCR,具有简便、快速和经济的特点。与酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)相比,其检测限度高出ELISA的检测限度104级数,具有更高的特异性与准确性。该方法可以同步快速、特异地检测出烟草中TMV、CMV和PVY病毒的侵染。
- 杨金广张帅申莉莉钱玉梅陈德鑫王长栓黄瑾王凤龙
- 关键词：烟草多重RT-PCR病毒检测
- 一种利用水提物快速简便检测烟草中TMV的方法
- 2011年
- 由烟草普通花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)侵染所致的植物病毒病是世界性的难题,具有寄主广泛,易于传播等特点。笔者研究了一种快速简捷检测烟草中TMV的方法,通过利用无菌水研磨TMV侵染后发病的烟草病叶,取上清液进行1%的琼脂糖凝胶电泳检测,可检测到一条特异性的,大小为6 000 bp的电泳条带,而在健康烟草叶片水提物中却检测不到该电泳条带的存在。以TMV复制酶基因片段为探针,对该特异性电泳条带进行Northern-blotting分析。结果表明,水提物中的电泳条带与TMV复制酶基因探针发生较强的杂交信号,暗示该条带可能为TMV的基因组。因此,该方法可在10 min内方便快速的检测烟株中TMV的存在,避免了常规血清学检测和分子检测(RT-PCR和western-blot)等方法的昂贵试剂和繁琐的操作步骤。但是该方法的水提取物在室温下不稳定,当静止3 h以上,就很难再检测到特异性的电泳条带。
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- 关键词：水提物
