赵鑫
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院抗体工程研究中心更多>>
- 发文基金：广州市科技攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- VEGF189基因合成、原核表达及鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的获得编码VEGF189蛋白的基因,并通过原核表达系统表达VEGF189融合蛋白。方法应用SOE PCR技术合成VEGF189基因,克隆入pET-32a(+)原核表达载体,转化E.coliBL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE和Western blot检测,表达产物经HisTrapTMHP亲和柱层析纯化,测定蛋白浓度。结果DNA测序分析表明,合成的VEGF189基因与文献报道相一致。在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的Trx-VEGF189融合蛋白,以包涵体和可溶2种形式存在。表达产物可被兔抗鼠VEGF多抗特异识别。经HisTrapTMHP亲和柱纯化,获得纯度达85%的融合蛋白。结论成功合成VEGF189基因,并在原核表达系统中获得高表达,为研制高效抗肿瘤的VEGF抗体和疫苗奠定了前期基础。
- 陈丹王宏朱中松向军俭杨琴赵鑫邓宁
- 关键词：原核表达
- 血管内皮细胞生长因子表位肽体外抗肿瘤作用研究被引量：2
- 2010年
- 目的:研究筛选血管内皮细胞生长因子(VEGF)不同表位肽抗肿瘤及抗血管新生效用。方法:构建4种不同的pCANTAB5-E/VEGF表位肽载体,将VEGF表位肽通过噬菌体展示技术展示于噬菌体表面,MTT法检测VEGF噬菌体表位肽对黑色素瘤细胞(B16)、人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖的影响,Transwell小室检测其对B16F10细胞迁移的影响,ECMgel检测其对HUVEC成管的影响。结果:筛选出VEGF的4种(VSB、VNB、VEB、VTB)表位肽中,VNB对HUVEC细胞增殖的抑制率达到64.8%,VEB、VTB对B16的增殖抑制率分别为75.7%和66.5%。4株表位肽对高转移细胞B16F10迁移抑制率均超过80%。结论:筛选得到的4株VEGF表位肽对黑色素瘤细胞、血管内皮细胞的增殖、迁移和成管有抑制作用,通过分析其表位区段后可制备成小分子多肽,为今后抗肿瘤多肽药物和疫苗的研发奠定基础。
- 赵鑫王宏向军俭朱中松宋其芳邓宁
- 关键词：VEGF表位肽抗肿瘤抗血管新生
- 重组VEGF-A_(189)发酵、纯化及鉴定
- 2009年
- 为了获得大量重组血管内皮生长因子(VEGF-A189)蛋白的可溶性表达,对重组VEGF-A189工程菌进行发酵条件的优化并开展发酵研究.通过摇瓶培养进行可溶性发酵条件优化,在5L发酵罐中发酵重组VEGF-A189工程菌,将发酵产物经镍离子柱亲和层析纯化,并对发酵产物进行SDS-PAGE,WesternBlot和ELISA等分析鉴定.结果表明,重组VEGF-A189工程菌可溶性发酵条件为:37℃培养重组VEGF-A189工程菌4h,加入0.3mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)于28℃诱导表达4h.在5L发酵罐中按比例放大发酵,在补料发酵3.5h后菌体密度(A600nm)达到8.0,调整发酵温度到28℃,IPTG诱导4h后的菌体密度为13.72,菌体产量为40g/L.镍离子柱亲合层析纯化后重组VEGF-A189纯度达到90%以上,回收率大于80%,WesternBlot、ELISA分析结果显示,重组VEGF-A189蛋白和抗VEGF抗体有良好的结合活性.结果表明经过发酵条件优化后发酵可获得有免疫结合活性的可溶性重组VEGF-A189蛋白.
- 朱中松王宏杨琴向军俭赵鑫杨红宇邓宁
- 关键词：发酵可溶表达
