王皓
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：吉林农业大学更多>>
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- 相关领域：生物学经济管理更多>>
- 类人胶原蛋白在大肠杆菌中的高效表达及其抗氧化活性研究
- 胶原蛋白是一类由三条a多肽链组成的三聚体大分子,广泛存在于动物体中,是生物体内重要的结构蛋白,在维持组织机械稳定性和细胞发育以及抗氧化等方面有着极其重要的作用。由于胶原蛋白独特的结构和性能,目前已在很多领域有广泛应用。通...
- 王皓
- 关键词：胶原蛋白纯化抗氧化性
- 文献传递
- 类人胶原蛋白基因COL6A2的克隆及其在大肠杆菌中的表达
- 2014年
- 根据GenBank上查到的人胶原蛋白序列COL6A2(NM058175.2),利用Primer 5设计特异性引物,以吉林农业大学生物物理实验室构建的重组质粒pCMV-Sport6-COL6A2为模板进行目的基因的克隆,获得目的基因COL6A2,然后用双酶切的方法连接目的基因COL6A2和表达载体pET32a,将连接产物转化到大肠杆菌中构建原核表达载体pET32a-COL6A2。再将鉴定成功的重组质粒pET32a-COL6A2分别转化到大肠杆菌BL21、BL21(DE3)、BL21(BE3)plysS及Rosetta(DE3)中,采用1 mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,经12%SDS-PAGE电泳分析并筛选出重组蛋白表达量最高的菌株。利用Ni Sepharose 6 FastFlow琼脂糖树脂亲和层析柱纯化重组蛋白。结果表明:获得了大小为570 bp的COL6A2片段,经测序鉴定序列正确;成功构建了pET32a-COL6A2原核表达载体并表达出约30 kD的目的蛋白;筛选出BL21(DE3)作为高效表达菌株,其重组蛋白表达量占菌体总蛋白的23.9%;经镍离子亲和层析纯化获得了纯度>90%的目的蛋白。
- 王皓徐立群陈欢孙旸王刚陈光
- 关键词：胶原蛋白大肠杆菌克隆纯化
- 东北地区设施园艺产业发展研究
- 本研究中，我们首先对设施园艺的基本理论进行了阐述，对我国现阶段设施园艺的主要类型进行了深入研究，对我国设施园艺的主流类型的种类以及优缺点进行了详细的分析。研究了中国设施园艺整体的现状，在此基础上对我国设施园艺面积以及结构...
- 王皓
- 关键词：设施园艺产业结构产业链
- Ⅵ型类人胶原蛋白基因COL6A2的克隆及在毕赤酵母中的分泌表达被引量：2
- 2013年
- 用PCR方法以Ⅵ型胶原蛋白基因组DNA为模板,获得Ⅵ型胶原蛋白α2链基因,并将该基因插入到表达载体pPIC9K,对重组质粒pPIC9K-COL6A2所含的目的片段进行双向测序。将测序正确的重组质粒用限制性内切酶SalⅠ线性化,经电击转化到毕赤酵母GS115感受态细胞中。通过MM/MD法进行甲醇利用表型的筛选,PCR鉴定目的基因的整合及G418梯度筛选高拷贝转化菌。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,目的蛋白分泌表达到胞外。1%甲醇诱导72h的发酵液,经SDS-PAGE电泳鉴定该重组蛋白分子质量约为32kD。
- 徐立群王皓孙旸王刚陈欢陈光
- 关键词：胶原蛋白PPIC9K毕赤酵母
