丁明
- 作品数：20 被引量：33H指数：3
- 供职机构：浙江理工大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：中国科学院重点实验室基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人源血管紧张素转化酶C-结构域在毕赤酵母中的克隆表达方法
- 本发明涉及一种人源血管紧张素转化酶C-结构域在毕赤酵母中的克隆表达方法，PCR扩增人源血管紧张素转化酶C-催化结构域基因片段，克隆至分泌表达载体pPIC9K，转化毕赤酵母GS115，阳性克隆再次电转，用G418筛选高拷贝...
- 张因皎赵钰岚许传莲丁明徐珏房晓敏周志明
- 文献传递
- 胞外脂肪酶在枯草芽孢杆菌中的表达及其性质被引量：2
- 2009年
- 枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis是一种高产的外源基因表达菌株，外源蛋白能大量分泌到细胞外培养基中。从地衣芽孢杆菌ATCC14580基因组中克隆胞外脂肪酶全基因序列，并构建枯草芽孢杆菌表达载体pACC-pUB110，得到脂肪酶基因重组载体。该表达载体有一个强启动子，经淀粉诱导能高效表达外源蛋白，以枯草芽孢杆菌胞外蛋白酶缺失型菌株WB700和野生型菌株B．subtilis168为宿主菌，得到的脂肪酶以对硝基苯棕榈酸酯为底物，测得培养基上清总活力达到76．8μ／mL。该脂肪酶在pH10-10．5表现最大水解活力，最适反应温度为37℃，在强碱条件下稳定性很好。
- 胡艳华李敏石爱琴胡海红丁明赵辅昆
- 关键词：枯草芽孢杆菌
- Hsp27高表达和低表达乳腺癌细胞的比较蛋白质组学研究被引量：2
- 2009年
- 以Hsp27高表达的乳腺癌细胞株MCF-7为亲本,分别通过导入靶向Hsp27的shRNA敲减载体和对照空载体的方法,构建了Hsp27敲减细胞株和相应对照细胞株。然后对对照细胞株与Hsp27敲减细胞株3B2进行了比较蛋白质组学研究,结果发现在双向凝胶电泳的差异蛋白质表达谱上,共有7个明显差异蛋白点,经过MALDI-TOF-TOF质谱分析和数据库搜索,共鉴定出了4个差异蛋白点,它们分别是Hsp27和另外2种差异表达的蛋白OVCA2和PYRG2。本实验构建了Hsp27敲减的稳定细胞模型并为进一步了解Hsp27的生物学功能提供了新的线索。
- 陈栋蒋宇翔王玮李贵发谷明波丁明崔玉昆赵辅昆
- 关键词：乳腺癌热休克蛋白27双向凝胶电泳
- 青霉素酰化酶(PGA)在枯草芽孢杆菌基因组上的整合表达被引量：3
- 2009年
- 将巨大芽孢杆菌的青霉素酰化酶(PGA)基因整合进枯草芽孢杆菌的基因组,筛选获得可以使PGA稳定表达的枯草芽孢杆菌菌株,克服了枯草芽孢杆菌中质粒表达不稳定的缺点。分别构建了含不同PGA基因拷贝数的3种枯草芽孢杆菌菌株,同时分析了这些菌株中PGA表达量的差异。37℃试管培养36 h菌株B.subtilis/xhoI-,aprE-,vpr--的酶活力为3 U/L,菌株B.subtilis/xhoI::pga为6 U/L,菌株B.subtilis/xhoI::pga,aprE::pga为14 U/L,菌株B.subtilis/xhoI::pga,aprE::pga,vpr::pga为23 U/L。结果表明,整合的拷贝数越多,PGA的表达量越高。
- 石爱琴胡海红胡艳华李敏丁明赵辅昆
- 关键词：枯草芽孢杆菌PGA
- 响应面法优化重组枯草芽孢杆菌发酵生产青霉素G酰化酶被引量：1
- 2012年
- 利用响应面法优化重组枯草芽孢杆菌pAUB-BmPGA/BS168发酵生产青霉素G酰化酶的条件。通过Plackett-Burman设计法对碳源﹑氮源﹑无机盐﹑温度等19个因素对发酵产青霉素G酰化酶的影响进行评价。筛选出发酵温度和酵母膏为影响产酶的显著因素。采用了中心组合设计实验对两种显著影响因素进行了优化,应用响应面分析确定了显著因素的最佳水平。结果表明,当温度为34℃,酵母膏为8.8g/L时,最终的酶活达到28.2U/mL,比初始发酵条件提高了1.19倍。在最佳条件利用15L的发酵罐对重组枯草芽孢杆菌进行扩大培养,最终酶活可达51.0U/mL,相对于摇瓶发酵又有大幅度的提高。
- 仇晶晶陈玮丁明张漫莉赵辅昆
- 关键词：青霉素G酰化酶枯草芽孢杆菌响应面发酵
- RNA结合蛋白Vigilin在翻译水平上对雌激素受体ER-beta的调控研究
- 2012年
- Vigilin是一个由14个连续的KH结构域组成的RNA结合蛋白。它可以通过与mRNA结合调控mR-NA的翻译后表达水平,并能够结合脂蛋白。本实验室此前的实验中发现Vigilin参与了对雌激素信号传导通路的调控,为详细研究其调控机制,文章通过凝胶阻滞实验证明了Vigilin能在体外结合于雌激素受体3非翻译区(ER-beta 3UTR)。借助双荧光素酶报告基因实验发现,高表达Vigilin可以提高雌激素信号通路中的重要受体ER-beta的翻译效率。利用激光共聚焦显微镜和荧光蛋白定位实验,发现Vigilin在细胞内大量定位于p-body中。通过上述实验证明了Vigilin能够通过结合ER-beta 3UTR调控ER-beta的表达量,参与了细胞内雌激素信号传导通路。由于ER-beta是雌激素信号传导中非常重要的受体,因此该研究具有重要的意义。
- 贾军祥张风群黄云仙丁明赵辅昆
- 关键词：RNA结合蛋白雌激素受体信号通路
- 福寿螺水解纤维素和半纤维素的酶系的研究
- ＜正＞由于纤维素酶的巨大的市场需求及水解自然界植物干物质转化成简单糖进而作为生产酒精的潜在价值,寻找和开发新型纤维素酶依然是生物学研究中的热点问题。近年来在一些昆虫软体动物中发现了动物内源性纤维素酶的基因,动物纤维素酶的...
- 李燕红丁明王骥郭睿许根俊赵辅昆
- 文献传递
- ILF3蛋白对雌激素受体beta的调控研究被引量：1
- 2013年
- 雌激素在体内的生理作用通过雌激素受体(Estrogen Receptor)ERβ和ERα的介导来实现调控。ERβ在乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和卵巢癌的发生、发展过程中具有调控作用。ILF3是RNA结合蛋白中的一员,参与细胞周期调控。凝胶阻滞实验(EMSA)证明了ILF3蛋白能结合ERβmRNA 3'UTR。雌激素受体可介导雌激素实现其功能,ILF3蛋白可能通过与ERβ结合参与雌激素信号通路的调控。为探讨他们的关系以及调控机制,构建ILF3过表达的慢病毒载体,通过Western blot检测ERβ蛋白的表达情况。在蛋白水平上,ERβ蛋白的表达量随着ILF3蛋白量的升高而升高,ILF3对ERβ起正向调控。MTT实验检测ILF3基因表达对MCF-7细胞活力有影响。
- 黄云仙张风群贾军祥丁明赵辅昆
- 关键词：ERΒMTT
- 醛糖还原酶cDNA的克隆和表达
- 2011年
- 醛糖还原酶能促使葡萄糖转化成山梨醇,是多元醇代谢通路的限速酶,与糖尿病并发症的发生和发展有密切关系。用RT-PCR扩增醛糖还原酶基因,将扩增产物克隆到大肠杆菌表达载体pET22b(+),构建重组表达载体pET22b(+)-AR。经PCR、双酶切和序列测定鉴定后,转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting对重组蛋白进行分析和鉴定后,利用Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化获得重组蛋白AR-(His)6。紫外分光光度法对AR-(His)6进行酶活检测,其比活力为0.45 U/mg,为下一步筛选具有抑制醛糖还原酶活性的化合物及开发有临床应用价值的醛糖还原酶抑制剂提供参考。
- 项军强蒋红亮张虹丁明赵辅昆
- 关键词：糖尿病并发症醛糖还原酶表达纯化
- 分子伴侣CsaA过表达及wprA蛋白酶的缺失对枯草芽孢杆菌分泌表达外源蛋白的影响被引量：2
- 2011年
- 在枯草芽孢杆菌B.subtilis168菌株,以及在其改造菌株B.subtilis168wprA-和B.subtilis168/wprA::csaA中表达来自碱性芽孢杆菌C-125的碱性果胶酶和来自巨大芽孢杆菌的青霉素酰化酶。碱性果胶酶在B.subtilis中分泌表达时,敲除了wprA蛋白酶基因的B.subtilis168wprA-菌株相对于其野生型菌株B.subtilis168分泌表达的总的酶活力下降了36%,再次整合csaA进wprA位点后的B.subtilis168/wprA::csaA菌株,其表达量又恢复到相当于野生型菌株的表达水平。青霉素酰化酶在B.subtilis168wprA-菌株中的表达与野生型相比没有明显差异;而整合csaA分子伴侣进wprA位点后的菌株(B.subtilis168/wprA::csaA),相对于野生型其总的酶活力高出66%,说明分子伴侣CsaA数量的增加可以明显提高酶的表达量,并显示出普遍提高蛋白总活力的作用,而蛋白酶wprA基因的敲除,对某些蛋白的表达量能够产生明显的影响,在提高表达的稳定性方面表现出普遍的促进作用。本实验表达的青霉素酰化酶酶活力(14.7 U/mL)比工业应用中的酶活力(10 U/mL)高出了47%。
- 蒋红亮张虹赵辅昆丁明
- 关键词：枯草芽孢杆菌
