陆鹏
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：安徽医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乙肝病毒HBx基因稳转细胞系的建立及其诱导的内质网应激被引量：1
- 2014年
- 目的建立乙肝病毒(HBV)HBx基因稳转细胞系,并观察该细胞系的增殖活性及内质网应激相关基因的表达情况。方法采用RT-PCR法从HepG2.2.15细胞株中克隆HBx基因编码区片段,构建pcDNA3.1-HBx真核表达质粒。利用脂质体将pcDNA3.1-HBx转染至人HepG2细胞系,通过G418筛选后,经Western blot法对HBx的表达进行验证。并用MTT法检测细胞的增殖活性,同时观察过表达HBx蛋白对内质网应激相关基因表达的影响。结果成功构建了HBx的真核表达质粒;建立了HBV HBx基因稳转细胞系;MTT法检测显示该细胞系增殖活性明显上升;同时也发现HBx基因的过表达可上调内质网应激相关基因BiP、PERK、ATF6、XBP1、MANF的表达,而CHOP的表达降低。结论 HBx基因过表达可诱导内质网应激,并促进HepG2细胞增殖。
- 陆鹏姜同翠陈露沈玉君沈玉先方圣云
- 关键词：细胞增殖内质网应激
- HBx蛋白过表达诱导肝癌细胞ER应激及MANF对肝癌细胞生物学行为的影响
- HBV/(hepatitis B virus，HBV/)感染易引起慢性肝炎，部分最后转化成肝癌。最近研究表明，内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ER stress）参与了肿瘤的发生和发...
- 陆鹏
- 关键词：内质网应激HBX肝癌
- 文献传递
- 人中脑星形胶质来源的神经营养因子基因启动子区域的克隆及活性检测
- 2012年
- 目的克隆人中脑星形胶质来源的神经营养因子MANF(mesencephalic astrocyte-derived neurotrophie factor)基因的启动子区域,并鉴定其转录活性。方法利用TESS在线软件分析MANF基因上游序列中潜在的顺时作用元件。以HepG2细胞的总基因组为模板,通过PCR反应扩增了MANF基因5'非翻译区1 415 bp片段,并将此片段插入到不含有启动子的pEGFP-1载体中构建了pEGFP-1-MANF-5F重组质粒。用脂质体介导的方法将pEGFP-1-MANF-5F质粒转染到293T细胞,在倒置显微镜下观察绿色荧光的表达。同时,将上述MANF基因5'非翻译区1 415 bp片段插入到荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic中,以构建质粒pGL3-MANF-5F,并通过共转染内参质粒pRL-TK到N2 A细胞中,24 h后检测双荧光素酶的表达。结果重组质粒pEGFP-1-MANF-5F转染293T细胞后,在细胞中可见绿色荧光蛋白;pGL3-MANF-5F重组质粒在N2 A细胞中检测到双荧光素酶的活性,且在Tunicamycin诱导时表达明显升高;结论已成功克隆了MANF基因的5'端非翻译区,并证实该区域具有启动子活性,且内质网应激可调节MANF的启动子活性,这为进一步研究MANF基因在疾病中的表达调控机制奠定了基础。
- 张利陆鹏王涛沈玉先
- 关键词：启动子克隆
