杨立娜
- 作品数：6 被引量：25H指数：2
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 醛糖还原酶抑制剂细胞筛选模型的建立被引量：1
- 2009年
- 目的:将糖尿病慢性并发症相关基因醛糖还原酶(aldose reductase,AR)基因与腺相关病毒(adeno associated virus,AAV)表达载体pSNAV2.0重组,使其在HEK293细胞中表达,以基因工程表达的AR为靶向,建立醛糖还原酶抑制剂(aldose reductase inhibitor,ARI)细胞筛选模型。方法:首先采用酶切、连接等方法构建含有人AR基因序列的AAV表达载体pSNAV-hAR,将重组质粒转染HEK293细胞,通过活性测定、Western blot和免疫荧光检测目的基因转染及表达的情况。结果:PCR、酶切、DNA测序均证实表达质粒pSNAV-hAR构建正确。转染HEK293细胞后,一系列分析结果显示,腺相关病毒表达载体介导的AR真核细胞表达产物是具有功能活性的目的蛋白。应用经典醛糖还原酶抑制剂Sobinil和Zopolrestat对此模型进行了验证。结论:AR高表达细胞模型的建立,为进一步筛选ARI、探讨多元醇通路学说在糖尿病慢性并发症发病机制中的作用奠定了基础。
- 刘静刘建伟杜明梅杨立娜叶玲
- 关键词：醛糖还原酶腺相关病毒细胞模型
- 雄激素受体基因第一外显子区CAG缺失的构建及其在HEK293细胞中的表达
- 2007年
- 目的:构建雄激素受体基因第一外显子区CAG重复序列缺失的突变重组体,观察CAG重复序列的有/无对雄激素受体转录及表达的调控作用。方法:实验于2006-05/2007-05在解放军总医院老年医学研究所完成。按照重叠延伸反应的原理扩增CAG重复序列两端的基因片段,再将两片段混合,在加入一个引物的情况下进行8个PCR循环以有效完成重叠延伸,然后再加入另一引物进行22个循环,完成目的片段指数扩增,将目的片段克隆至真核表达载体PAR-IRES2-EGFP,转染HEK293细胞,采用Western blot法检测HEK293细胞雄激素受体蛋白。结果:构建的CAG重复序列缺失的突变重组体经酶切鉴定和DNA测序证实构建正确,转染真核细胞可检测到雄激素受体基因的表达。结论:重叠延伸PCR是进行体外基因拼接、体外缺失突变的简单、快速的基因重组技术;雄激素受体基因第一外显子区CAG重复序列缺失的突变重组体的成功构建可为今后的相关研究提供实验基础。
- 杨立娜叶玲刘静刘建伟阴大伟杜明梅
- 关键词：重叠延伸PCR雄激素受体质粒构建
- 重组PCR构建不同CAG重复的雄激素受体基因载体
- 2008年
- 目的:构建不同CAG重复的人雄激素受体(hAR)基因载体用于真核细胞表达。方法:以CAG重复数目为CAG8,CAG21,CAG34的白细胞基因为模板,扩增含相应CAG重复的中间片段。以克隆有野生型hAR基因的质粒为模板扩增上、下游片段,并与中间片段进行重组PCR,拼接的目的片段经SalⅠ-NruⅠ酶切后置换质粒中相应片段,构建含不同CAG重复的载体。结果:构建后的载体经酶切和DNA测序,证实CAG重复数目为8,21,34的表达载体大小和序列正确。结论:重组PCR技术是体外基因重组的一种有效、可行的方法。
- 阴大伟叶玲李小鹰刘建伟杨立娜
- 关键词：聚合酶链反应受体雄激素CAG重复
- Kozak序列+4G提高绿色荧光蛋白在HEK293细胞中的表达被引量：22
- 2008年
- 构建含不同Kozak序列的绿色荧光蛋白(GFP)基因真核表达载体,并检测它们在HEK293细胞中的表达差异。通过设计突变的PCR引物改变目的基因GFP的Kozak序列,+4位碱基分别为A和G,且不改变氨基酸编码,将PCR扩增的GFP片段与载体pcDNA3.1进行酶切、连接、转化、鉴定。成功构建的pHGFP-A,pHGFP-G质粒采用脂质体法转染HEK293细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光表达,流式细胞术检测目的蛋白GFP的荧光表达阳性率,Western blot检测目的蛋白GFP的表达。构建的两质粒均能有效转染HEK293细胞,其中流式细胞术分析显示:pHGFP-A组GFP阳性率约为15%,pHGFP-G组GFP阳性率约为45%;Western blot显示pHGFP-G的GFP表达量约为pHGFP-A的GFP表达量3.87倍。结果表明,Kozak序列+4G(-3位为嘌呤碱基时)在蛋白表达中发挥重要作用,可以使绿色荧光蛋白GFP在HEK293细胞中的表达量提高约4倍。
- 杜明梅叶玲刘建伟刘静杨立娜
- 关键词：KOZAK序列绿色荧光蛋白WESTERNBLOT
- 雄激素受体基因及钙蛋白酶10基因多态性与老年男性代谢综合征的相关性研究
- 研究背景 代谢综合征(Metabolic Syndrome,MS)是一组复杂的代谢紊乱症候群,其组分包括血糖异常、脂代谢紊乱、高血压、肥胖等代谢异常。随着社会经济的发展,代谢综合征的发生率随年龄增长而增加。估计全球大约有...
- 杨立娜
- 关键词：代谢综合征雄激素受体钙蛋白酶10多态性
- 文献传递
- 多寡核苷酸探针同步标记在Northern blot多基因分析中的应用被引量：2
- 2007年
- 目的:建立一种多探针同时标记同步杂交检测多基因的简化的Northern blot方法。方法:通过T4多聚核苷酸激酶5′末端放射性磷酸化标记法对Northern blot中多寡核苷酸探针同时标记,实现对同一张转移印迹膜上的多基因同步杂交显影检测。结果:与常规mRNA逐一检测的效果进行比较,同步简化法的各目的基因同时得到较好的检测。结论:同步简化法简化了实验过程,缩减了实验时间,节省了实验试剂,并使各基因表达丰度之间的比较具有更高的准确性,提高了Northern blot的检测效率和成功率。
- 杜明梅叶玲翟冰刘建伟刘静杨立娜
- 关键词：NORTHERNBLOT寡核苷酸探针
