刘静雯
- 作品数：24 被引量：117H指数：6
- 供职机构：集美大学食品与生物工程学院更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金国家海洋公益性行业科研专项国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：生物学文化科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/氧化酶基因克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2010年
- 核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/氧化酶(RubisCO)(EC4.1.139)是光合细菌通过卡尔文循环固定二氧化碳的关键酶。本文采用PCR方法,从沼泽红假单胞菌株No.9中克隆到RubisCO基因(cbbM)序列(该序列已提交GenBank,登录号:GU061327)。采用同源建模法,建立了该RubisCO蛋白的三维结构模型,预测其活性位点。将cbbM基因亚克隆到表达载体pTV118N上,构建表达质粒pTV-CBBM,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达菌株BL21(DE3)/pTV-CBBM,该菌株经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE检测。采用气相色谱法测定破菌上清中的RubisCO酶活。结果表明:①cbbM基因编码461个氨基酸,与沼泽红假单胞菌株DCP3和DH1的RubisCO蛋白序列相似性分别为98%和99%;②推测沼泽红假单胞菌No.9中RubisCO蛋白的活性中心由Asn112、Lys192、Asp194、Glu195、His288、Arg289、His322、Gly424、Ser369、Gly370和Gly394等氨基酸残基组成;③重组蛋白分子量约为50kDa左右,与预测相符;④破菌上清中的RubisCO酶比活高于原始菌株中的酶活,说明目的基因在大肠杆菌中得到了有效表达。
- 杜翠红刘静雯周集体
- 关键词：沼泽红假单胞菌基因克隆大肠杆菌
- 复合酶二次酶解法制备紫菜多肽原液及其ACE抑制活性的研究被引量：5
- 2016年
- 坛紫菜用粉碎、研磨、蛋白酶酶解处理法提取多肽,考察了破碎酶解法对蛋白质含量、蛋白质提取率、ACE抑制率的影响;多肽提取物采用脱腥处理,考察了β-环糊精对腥味的影响;多肽提取物采用杀菌处理,考察了杀菌对感官指标、菌落总数和ACE抑制率的影响。结果发现,坛紫菜经粉碎、研磨、蛋白酶酶解处理后蛋白质含量和蛋白质提取率得到显著提高,ACE抑制率也得到一定程度的提高。不同蛋白酶酶解效果差异较大,其中以胰蛋白酶和碱性蛋白酶进行复合酶二次酶解的效果较好,蛋白质提取率达85.22%,ACE抑制率达93.51%。提取物添加1.5%β-环糊精具有较好的脱腥效果。提取物经灭菌后仍有较好的ACE抑制作用。
- 雷桂洁苏国成江晓颖周常义刘静雯李健
- 关键词：坛紫菜蛋白质提取率ACE抑制率
- 一种新的海洋微藻病毒丝氨酸蛋白酶基因的克隆表达及其活性分析被引量：1
- 2014年
- 从海洋球石藻 Emiliania huxleyi 病毒 EhV99B1的基因组中克隆了丝氨酸蛋白酶（Sp）基因（GenBank 登录号：KC161207），对该基因的开放阅读框（ORF）进行系统的生物信息学分析，并在大肠杆菌中融合表达，通过亲和层析法获得了纯化的重组 Sp。结果表明：EhV99B1-Sp 基因的 ORF 为1110 bp，编码368个氨基酸，蛋白相对分子质量为39．5 kDa；该基因片段与 GenBank 中 EhV86-Sp 的同源性很高，核苷酸及其对应的氨基酸序列同源性分别为95％和97％，而与其他物种 Sp 序列的同源性仅为28％～32％，说明其可能是丝氨酸蛋白酶家族中的一个新成员；预测的二级结构特征显示EhV99B1-Sp 的蛋白结构域中具有典型的 LTAGHC （组氨酸活性位点区域）和 AICNGDSGGPLF（丝氨酸活性位点区域）两个丝氨酸蛋白酶催化活性位点的氨基酸基序，是一个两次跨膜蛋白；将该基因在大肠杆菌中进行低温诱导表达，得到分子量为60 kDa 的重组蛋白，经鲤鱼肌肉丝氨酸蛋白酶（MB-SP）抗体检测证实为 Sp，且重组蛋白在大肠杆菌细胞中具有明显的生物学活性。本研究结果为进一步探讨 EhV99B1-Sp 在病毒与宿主相互作用过程中的调节作用及其功能与应用奠定基础。
- 李丽华邱健健蔡艺钦于鹏刘静雯
- 关键词：丝氨酸蛋白酶基因克隆活性分析
- 病毒介导的海洋球石藻(Coccolithophores)鞘脂类代谢调控被引量：1
- 2016年
- 海洋球石藻(Coccolithophores)是一种全球广泛分布且具有重要生态功能的真核浮游植物,有些种类是大洋和近岸常见的赤潮种。自然海域中,病毒感染是导致球石藻死亡和赤潮消亡的一个关键因素。基于一株海洋球石藻Emiliania huxleyi及其特异性裂解病毒全基因组测序注释的结果,研究者们发现病毒可能通过基因横向转移从宿主基因组中获取了一系列与鞘脂类代谢相关的关键酶基因,进而在一定程度上掌控了宿主鞘脂类代谢,大量合成、积累病毒性鞘脂类物质,并最终诱导宿主细胞以凋亡的形式死亡。因此,病毒介导的宿主鞘脂类代谢在调节病毒与宿主间相互作用中具有重要意义。本文着重综述海洋球石藻病毒与宿主间的基因横向转移、病毒介导的宿主鞘脂类代谢特点及其生态学意义,以期深入了解海洋球石藻病毒与宿主间复杂的相互作用关系。
- 马亚瑞刘旭宏蔡艺钦李健刘静雯
- 关键词：生态学意义
- 生物工程专业综合实验教学体系改革探索被引量：8
- 2008年
- 普通高校生物工程专业实验课程存在许多问题,对生物工程专业综合实验教学体系进行部分改革,构建新的实验教学体系和方案,建立一个生物工程专业综合实验与生产实习有机结合的实践教学体系,并在此基础上,提出实施进一步深化教学改革的具体措施。
- 杜翠红刘静雯邱晓燕林静瑜
- 关键词：生物工程专业教学体系改革
- 副溶血性弧菌Vibrio parahaemolyticus O3:K6大流行克隆的溯源被引量：7
- 2014年
- 副溶血性弧菌(Vibrio Parahaemolyticus)是一种革兰氏阴性嗜盐性海洋细菌。1950年从日本一次暴发性食物中毒中首次分离发现。作为一种食源性人鱼共患致病菌,副溶血性弧菌在全球的河口、海洋和沿海广泛传播,由其引起的食物中毒已跃居其它病原菌之首。副溶血性弧菌在进化过程中通过基因重组和基因水平转移逐渐改善其对环境的适应性,因而与其它所有致病微生物相比,副溶血性弧菌的基因型和血清型都具有高度的多样性。本文就副溶血性弧菌,特别是1996年后在世界范围内出现的O3:K6新血清型流行株(形成所谓的O3:K6大流行克隆Pandemic clone)的发现及流行特征、变异分子流行病学特征、在我国的分布及研究进展进行综述,以期为O3:K6大流行克隆的溯源提供更多依据。
- 徐苗苗刘静雯
- 关键词：副溶血性弧菌
- 氮饥饿细基江蓠繁枝变型和孔石莼氨氮的吸收动力学特征被引量：32
- 2004年
- 以氮饥饿海藻为材料,采用多瓶法和干扰法相结合的技术,测定两种海藻在不同起始浓度下不同时间间隔内的NH+4吸收率,对不同阶段的吸收率进行非线性回归分析,结果表明它们均符合饱和吸收动力学特征.最大吸收率和半饱和常数均随着吸收时间的延长而降低.在整个吸收过程中,吸收曲线的初始斜率变化不大,这表明在低浓度下的吸收率不受短时间快吸收的影响而保持相对的稳定.同时两种海藻相比,在相应时间内的吸收动力学参数不同,孔石莼的最大吸收率、半饱和常数和初始斜率均大于细基江蓠繁枝变型.处于氮饥饿状态的两种海藻对NH+4-N的吸收存在以下3个时相:(1)起始短期的快吸收阶段;(2)内部营养盐浓度控制的吸收阶段;(3)外界营养盐浓度控制的吸收阶段.
- 刘静雯董双林
- 关键词：吸收动力学吸收率孔石莼
- 海洋球石藻Emiliania huxleyi(Prymnesiophyceae)病毒主要外壳蛋白基因的克隆与序列分析被引量：4
- 2009年
- 在实验室纯培养条件下,用过滤的海洋球石藻特异性病毒(Emiliania huxleyi virus,EhV)EhV-99B1株感染球石藻(E. huxleyi,Eh),建立病毒与宿主之间稳定的感染体系,病毒裂解滤液经卷式切向流超滤和PEG8000浓缩、CsCl密度梯度离心,获得足量高纯度的病毒颗粒。根据已报道的其它EhV株系主要外壳蛋白(MCP)基因内保守片段设计合成一对特异引物,从EhV-99B1病毒基因组中克隆到了长度约为300bp的病毒外壳蛋白基因保守片段。该片段与pBS-T载体连接后转化Escherichia coli DH5α,对筛选到的阳性克隆进行序列测定与分析。结果表明,该克隆片段与GenBank中EhV163(AF453851)分离株的同源性最高,该区域内的核苷酸与对应推导的氨基酸序列同源性均为100%,证实获得的DNA片段是EhV-99B1的外壳蛋白基因;与EhV203(AF453855)分离株的核苷酸及氨基酸序列的同源性较低,分别为93%和100%。表明该病毒在自然海域中分布广泛并具有一定的多态性,同时在进化上也存在相当的复杂性。因此,MCP基因可以作为一种新的分子遗传标记以区分自然群落中EhV的不同基因型,对于理解海洋球石藻类病毒与宿主之间复杂的相互作用关系将是一个十分有价值的工具。
- 张稚兰刘静雯董双林苏国成张彦锋
- 关键词：基因克隆与序列分析
- 生物工程专业课程双语教学的改革与实践被引量：9
- 2011年
- 开展双语教学既是我国高等教育与国际接轨的要求,也是生物工程专业发展的迫切需要。以注重强化学生实际应用的技能、培养具有国际视野的应用型人才为目标,经过几年的努力,我们建立了"过渡型教学模式、多元化教学方法、阶段性强化实践"的生物工程专业课程双语教学体系,并取得了一些成效。
- 刘静雯曹敏杰朱艳冰蔡秋凤李利君杜翠红邱晓燕
- 关键词：双语教学生物工程教学模式
- CPA-核酸试纸条快速检测副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)方法的建立及其在海产品检测中的应用被引量：6
- 2016年
- 本研究将交叉引物恒温扩增技术(cross priming amplification,CPA)与核酸试纸条相结合建立一种副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)快速可视化检测方法。针对副溶血性弧菌特有的不耐热溶血素基因tlh的六个不同区域设计两对特异性引物和一对检测探针,通过优化反应条件确定了最佳反应体系。CPA-核酸试纸条方法对副溶血性弧菌的检测具有较强的特异性,对纯培养物的检测灵敏度达到58 cfu/m L,对污染牡蛎中副溶血性弧菌的检测灵敏度为5.2 cfu/g,比传统的PCR技术灵敏度提高了10倍,且具有较高的稳定性。交叉引物恒温扩增技术与核酸试纸条相结合的方法操作简便、特异性强、灵敏度高且能有效防止污染,可用于现场及基层单位副溶血性弧菌的快速检测。
- 徐苗苗李健李桂玲苏国成陈吉刚刘静雯
- 关键词：副溶血性弧菌
