张晗星 作品数:18 被引量:126 H指数:5 供职机构: 清华大学 更多>> 发文基金: 国家教育部博士点基金 国家自然科学基金 国家科技支撑计划 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 化学工程 轻工技术与工程 更多>>
火菇素的分离纯化及其分子量的测定 2003年 火菇素是一种从金针菇FlammulinaVelutipes中分离纯化出来的具有抗癌活性的简单蛋白。用SDS-PAGE系统,通过与已知分子量的标准参照蛋白比较,确定火菇素的分子量为24kDa,这一结果与其氨基酸组成分析相比偏大,进一步通过电喷雾离子化质谱法(ESIMS)分析,精确测定火菇素的分子量为19891.13Da。推测由于火菇素蛋白与SDS的非正常结合是造成蛋白质在SDS-PAGE中迁移变慢导致偏差的原因。 周凯松 薛久刚 张晗星 陈畅 张长铠关键词:火菇素 纯化 SDS-PAGE 分子量 米根霉HZS6生产高光学纯度L-乳酸发酵条件的研究 被引量:3 2009年 通过研究和控制初始发酵条件,比较产物L-乳酸、D-乳酸组成变化,得出提高L-乳酸光学纯度的米根霉发酵生产条件:在pH 6.0、温度34℃、初始葡萄糖浓度100 g/L、NH4NO32 g/L、添加1.5 g/L L-乳酸的适合条件下,米根霉HZS6能够发酵生产光学纯度99%以上的L-乳酸,其转化率达到80%,终浓度为81.3 g/L。 张晗星 孟武 封文涛 李十中关键词:L-乳酸 D-乳酸 光学纯度 发酵调控 米根霉 微量元素在线调控L-乳酸发酵的研究 被引量:2 2009年 选择Mg2+、K+、Zn2+作为调控重点,根据发酵过程各影响因素的变化,在线调控微量元素的浓度,分析其对米根霉发酵生产L-乳酸的影响。结果表明Mg2+与L-乳酸积累呈正相关性,发酵进行12 h对Mg2+正调控;低浓度的K+、Zn2+与L-乳酸积累呈负相关性。发酵开始12 h对Zn2+负调控,36 h对K+进行负调控。各元素综合调控后L-乳酸最高产量较未调控时提高了28.15%。 封文涛 李十中 张晗星 孟武 姜菲菲 王瑞明关键词:微量元素 L-乳酸 米根霉 发酵 一种简单高效的食用真菌总RNA提取方法 被引量:6 2003年 以金针菇为材料,建立了一种适合于富含RNase、多酚、多糖和糖蛋白的食用真菌RNA的提取方法,此方法在高浓度变性剂存在的条件下2次用苯酚 氯仿 异戊醇进行抽提去除DNA、蛋白质,并用异丙醇和乙酸钠选择性沉淀RNA、去除多糖,得到完整、均一的RNA样品。 周凯松 薛久刚 常宁 陈畅 张晗星 张长铠关键词:食用菌 RNA提取 金针菇 火菇素蛋白的红外和拉曼光谱研究 被引量:2 2004年 目的 研究抗癌活性蛋白火菇素的二级结构。方法 Fourier变换红外光谱和显微共焦拉曼光谱法。结果火菇素蛋白的二级结构中含有较多的β折叠和α螺旋而无规则卷曲含量较少 ,“埋藏”和“暴露”的酪氨酸残基为34%和 6 6 % ,C- C- S- S- C- C-侧链为反式 -扭曲 -反式构型。 薛久刚 陈畅 李彦 蒋瑛 张晗星 张长铠关键词:火菇素 红外光谱 拉曼光谱 透明颤菌血红蛋白启动子低氧诱导重组基因在大肠杆菌中的表达研究 2010年 设计了两段不同序列长度透明颤菌血红蛋白(VGB)的天然低氧启动子基因(Pvgb-L,Pvgb-S),分别与绿色荧光蛋白(GFP)或加强型绿色荧光蛋白(TRIGFP)基因克隆到pBluescript II SK-质粒中。根据重组菌在不同溶氧条件下荧光蛋白基因转录水平和表达量,经RT-PCR和荧光光谱分析证明,在低氧条件下,短链低氧启动子(Pvgb-S)能更有效地诱导下游基因GFP的表达,并有利于蛋白的正确折叠表达,其诱导效果受溶氧浓度影响而差异显著。在低氧培养条件下,低氧启动子Pvgb-S可有效诱导重组五碳糖代谢基因在大肠杆菌W3110(ΔpflB,ΔadhE)中的表达,提高重组菌木糖代谢,从而增加乳酸产量。 张晗星 李十中 祁庆生关键词:绿色荧光蛋白 大肠杆菌 低氧诱导 火菇素cDNA的初步免疫学筛选 被引量:1 2004年 火菇素是一种具有抗癌活性的简单蛋白 ,从金针菇中分离纯化火菇素的方法如下 :金针菇子实体经乙酸液浸提、硫酸铵和乙醇分级沉淀后 ,通过DEAE SephadexA 5 0除去色素和部分杂蛋白 ,最后经CM SephadexC 5 0离子交换柱层析分离 ,得到了电泳均一的纯化蛋白 .以火菇素为抗原制备的抗血清为探针对构建的金针菇cDNA表达文库进行免疫印记筛选 ,对获得的阳性克隆进行PCR、酶切以及在大肠杆菌中诱导表达等初步鉴定 ,为进一步确证、克隆火菇素基因打下了基础 . 周凯松 薛久刚 黄芳 张晗星 张长铠关键词:火菇素 金针菇 CDNA 免疫筛选 聚羟基脂肪酸酯产生菌筛选及其在E.coli工程菌中表达与代谢机理研究 聚羟基脂肪酸酯/(Polyhydroxyalkanoates或PHA/)是很多细菌合成的一种细胞内聚酯,在生物体内主要是作为细胞内碳源和能源的贮藏性物质而存在。由于具有诸如生物可降解性、生物相容性、光学性、压电性、气体相... 张晗星关键词:聚羟基脂肪酸酯 铜绿假单胞菌 FADD 文献传递 金针菇中具抑瘤活性的碱性蛋白火菇素的分离纯化和性质研究(英文) 被引量:10 2003年 目的 对一种具有抑瘤活性的碱性蛋白火菇素进行分离纯化和性质研究。方法 应用硫酸铵、乙醇分级沉淀 ,柱色谱等方法进行分离纯化。电泳分析、氨基酸组成分析、质谱分析等方法被用于火菇素的理化性质研究。结果 火菇素被提纯至电泳纯并结晶。经性质研究确定火菇素的分子量为 19891.13Da ,pI=8.9,λmax=2 76~ 2 78nm ,λmin=2 5 0nm ,并缺少甲硫氨酸。通过基质辅助激光解吸离子化质谱 (MALDI—MS)分析 ,测得了火菇素的指纹图谱 ,表明它为一种新蛋白。结论 火菇素被首次提纯至电泳纯 。 陈畅 薛久刚 周凯松 李彦 张晗星 张长铠关键词:金针菇 抑瘤活性 纯化 用λZAPExpress作载体构建金针菇子实体表达型cDNA文库 被引量:4 2003年 采用QuickPrepmicromRNAPurification试剂盒从新鲜金针菇子实体中快速提取、纯化mRNA,TimeSavercDNASynthesis试剂盒逆转录成cDNA分子后,通过在cDNA分子两端加上EcoRⅠ/NotⅠ接头,在T4多核苷酸激酶的作用下磷酸化,与表达载体λZAPExpressPredigestedVector连接,然后用包装蛋白在体外包装连接产物,感染E.coliXL1-BlueMRF捁菇ǔ杀泶颿DNA文库。经检测:文库滴度为4.0×106pfu/ml,文库扩增后,滴度达2.0×1010pfu/ml,重组率为90%,cDNA分子长度在0.3-3.5Kb范围。应用原位免疫杂交,初步筛选出火菇素相关基因的阳性克隆。 周凯松 常宁 彭俊峰 张晗星 张长铠关键词:滴度 重组率 免疫筛选 金针菇子实体 火菇素