郭涛
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中山大学公共卫生学院预防医学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省职业病防治重点实验室广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生环境科学与工程理学更多>>
- 利用CRISPR/Cas9技术构建CYP2E1基因敲除的HEK293FT细胞系被引量：1
- 2017年
- 目的:利用CRISPR/Cas9系统在HEK293FT细胞系中敲除CYP2E1基因并探讨其在检测化学物毒性中的应用。方法:设计3对分别靶向CYP2E1基因第2、第3和第7外显子的sg RNA序列并构建PX461表达载体;将携带靶向CYP2E1的sg RNA表达载体转染至HEK293FT细胞中,通过SURVEYOR检测分析sg RNA的切割效率;利用有限稀释法获得CYP2E1敲除细胞株,通过实时荧光定量PCR和蛋白印迹检测细胞株中CYP2E1的敲除效果;并检测其对N-(4-羟基苯基)乙酰胺和1,2-二氯乙烷的细胞毒性效应的影响。结果:SURVEYOR检测分析靶向CYP2E1基因第3外显子的sg RNA的切割效率为23%;成功构建了2株CYP2E1基因敲除的细胞株,实时荧光定量PCR结果显示CYP2E1 m RNA表达下降,蛋白印迹结果显示CYP2E1蛋白无表达;CYP2E1基因敲除会显著降低N-(4-羟基苯基)乙酰胺和1,2-二氯乙烷的细胞毒性。结论:通过CRISPR/Cas9构建出CYP2E1稳定敲除的肾细胞系,为研究CYP2E1的功能和作用机制提供了有效的工具。
- 范启明李若碧王飞郭涛王婷李道传邢秀梅陈丽萍陈雯王庆
- 关键词：CYP2E1基因敲除
- 短期低剂量AFB1染毒对Fisher 344大鼠肝脏miRNA表达谱的影响
- 目的：探究microRNAs在黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)致肝癌早期过程中的功能作用.方法：1.以剂量0.2mg·Kg-1(LD50的1/20)的AFB1对F344雄性大鼠进行腹腔注射,...
- 余浩辉张岩徐丹丹范启明王婷郭涛王庆
- 1,2-二氯乙烷吸入染毒对SD大鼠肝脏遗传损伤效应及代谢酶表达的影响被引量：1
- 2016年
- 目的研究1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)吸入染毒对SD大鼠肝脏的遗传损伤作用及代谢酶表达的影响。方法SPF级健康成年SD雄性大鼠30只,按体重随机分为对照组(n=8)、低剂量组(n=11)和高剂量组(n=11)。采用口鼻式动式吸入染毒法,低、高剂量组分别给予质量浓度为600和1 800 mg/m^3的1,2-DCE染毒8h/d,连续7d;对照组采取相同处理方式吸入正常空气。实验结束后,利用实时荧光定量PCR技术检测代谢酶及遗传损伤相关指标p53的m RNA表达改变。结果实时荧光定量PCR结果显示,1,2-DCE染毒后高剂量组大鼠肝脏中Ⅰ相代谢酶细胞色素P4502E1(CYP2E1)、乙醇脱氢酶1(ADH1)、乙醛脱氢酶3α1(ALDH3α1)、Ⅱ相代谢酶谷胱甘肽S-转移酶A1(GSTA1)、谷胱甘肽S-转移酶M1(GSTM1)、谷胱甘肽S-转移酶A3(GSTA3)以及遗传损伤相关基因p53 m RNA表达均被诱导升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CYP2E1、ADH1、ALDH3α1、GSTA1、GSTM1和GSTA3是1,2-DCE的主要代谢酶,其表达量可以被1,2-DCE染毒诱导而发生改变,p53信号通路所介导的遗传损伤应激可能参与了1,2-DCE诱导大鼠肝细胞坏死或凋亡的过程。
- 徐丹丹范启明贾肖辉王婷郭涛曾妮王飞殷宵黄曼琪黄振烈王庆
- 关键词：1,2-二氯乙烷代谢酶
- ALDH2 shRNA质粒构建及其对酒精致HepG2细胞毒性的影响被引量：1
- 2017年
- 目的构建抑制人乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因表达的shALDH2-PLKO.1重组慢病毒质粒,并将重组质粒转染HepG2细胞株,为构建ALDH2基因沉默细胞株及研究ALDH2在酒精致HepG2细胞毒性中的作用奠定基础。方法设计3对ALDH2 sh RNA序列并插入到PLKO.1-GFP载体中,通过测序鉴定。将ALDH2 sh RNA和包装质粒共转染293FT细胞,收集24、48和72 h病毒液进行浓缩,通过梯度稀释法测定病毒液滴度。Western blot和qRTPCR检测转染sh RNA的HepG2细胞ALDH2蛋白和mRNA表达量。MTS比色法检测转染sh RNA的HepG2细胞在酒精染毒后的增殖能力。结果测序结果显示shALDH2-PLKO.1质粒构建成功;滴度测定结果显示包装系统成功包装出病毒颗粒,病毒滴度为:4×107TU/ml;Western blot及qRT-PCR结果显示,与对照组比较,转染了shALDH2-1和shALDH2-3的HepG2细胞蛋白和mRNA表达量明显下调,其中shALDH2-1组抑制率为51%(P=0.046),shALDH2-3组抑制率为72%(P=0.008),差异有统计学意义;MTS结果显示转染sh RNA的HepG2细胞株酒精染毒后细胞增殖能力明显下降。结论成功构建了靶向ALDH2基因的重组慢病毒表达质粒,而且shALDH2-PLKO.1可以有效抑制He PG2细胞中ALDH2基因的表达,为研究ALDH2基因在酒精性肝病和肝癌中的作用机制奠定了基础。
- 郭涛王婷王飞曾妮李若碧江红梅王庆
- 关键词：ALDH2RNA干扰
- 利用CRISPR/Cas9系统构建ALDH2基因敲除的HepG2细胞株
- 目的:采用不同基因编辑方法构建ALDH2基因沉默和基因敲除的细胞株,比较不同基因编辑方法的编辑效率,并探究ALDH2基因缺失对酒精毒效应的影响,为治疗ALDH2基因相关的疾病提供体外研究模型。方法:分别设计RNA干扰序列...
- 郭涛王婷王飞曾妮李若碧江红梅王庆
- 关键词：ALDH2有限稀释法RNA干扰
