张华堂
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：中国科学院昆明动物研究所更多>>
- 发文基金：云南省教育厅科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人胎脑NT-4基因的体外构建
- 2008年
- 目的体外构建人神经生长因子-4(neurotrophin-4,NT-4)与质粒载体pEGFP-N1(卡那霉素抗性)的重组体,为后续的转基因移植治疗脊髓损伤创造条件.方法用Trizol法提取人胎脑组织总RNA,经RT-PCR扩增,EorRⅠ和BamHⅠ核酸内切酶酶切电泳纯化获得人神经营养因子-4(NT-4)DNA.用含质粒载体pEGFP-N1DNA的大肠杆菌接种经划板,挑选菌落、振荡培养,并用碱裂解法提取质粒载体pEGFP-N1DNA,经酶切、电泳纯化后,通过连接、转化感受态细胞,DNA小量提取法获得NT-4目的基因与质粒载体pEGFP-N1DNA的重组体,经DNA测序证实.结果用上述方法成功获得NT-4-pEGFP-N1重组体.结论此方法是一种体外构建人胎脑NT-4基因的成熟、稳定而有效的方法,可为后续的神经干细胞转染NT-4基因移植治疗神经系统损伤创造条件.
- 李劲涛朱兴宝徐丹王廷华张华堂刘佳
- 关键词：人胎脑神经营养因子-4基因构建体外
