王春雷
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：哈尔滨医科大学附属第一医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人重组pcDNA6.2/生长分化因子5质粒的构建及鉴定
- 2008年
- 背景:生长分化因子5是一种刺激肌腱、韧带塑型,增强愈合反应有效的生长因子,在活性组织工程肌腱构建中有重要作用。目的:构建人重组pcDNA6.2/生长分化因子5质粒,为转染基质干细胞向肌腱诱导分化实验奠定基础。设计、时间及地点:细胞基因工程体外实验,于2007-08/12在哈尔滨医科大学遗传学教研室和分子生物学教研室完成。材料:根据Genbank(NM000557)中人生长分化因子5的序列化学合成一对引物,从人胎儿软骨组织提取总RNA。方法:通过反转录-聚合酶链反应得到人生长分化因子5完整成熟肽基因。将所得基因片段插入克隆载体pcDNA6.2并转化入JM109菌株,提取重组质粒,PCR鉴定、酶切鉴定并测序。主要观察指标:反转录-聚合酶链反应检测结果,PCR及SalⅠ和BamHⅠ双酶切鉴定结果,重组质粒测序与Genbank中序列比较结果。结果:电泳显示,反转录-聚合酶链反应产物为一长约380bp的带,阳性克隆质粒经PCR电泳及双酶切均出现约380bp的片段。测序表明与Genbank中的序列完全相符。结论:成功构建出人重组pcDNA6.2/生长分化因子5质粒,为组织工程化肌腱过程中种子细胞的制备提供转染质粒。
- 曲彦隆武志超王春雷周继辉
- 关键词：生长分化因子5质粒肌腱
