吴小山
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：安徽医科大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- ASIC1基因敲除小鼠的繁殖及基因鉴定被引量：3
- 2015年
- 饲养并繁殖酸敏感离子通道1(ASIC1)基因敲除杂合子小鼠,提取小鼠尾部组织DNA,采用聚合酶链反应(PCR)方法鉴定子代小鼠基因型。ASIC1基因敲除小鼠的繁育和鉴定均获得成功,子代小鼠基因型分别为杂合子(ASIC1+/-)、纯合子(ASIC1-/-)和野生型(ASIC1+/+)。
- 周仁鹏吴小山王志森葛金芳陈飞虎
- 关键词：基因敲除小鼠PCR
- 胞外酸化对大鼠关节软骨细胞焦亡的影响及可能机制被引量：3
- 2016年
- 目的观察胞外酸化对大鼠关节软骨细胞焦亡的影响,研究该过程中可能机制。方法利用酶消化法获得原代大鼠关节软骨细胞。软骨细胞分为不同pH处理组(pH7.4、pH 7.0、pH 6.5和pH 6.0)以及pH6.0酸化不同时间组(0、6、12、24、48 h),经ROS还原剂NAC预处理的酸化组和正常组,Real-time PCR和Western blot观察各组促炎细胞因子IL-1β、IL-18和炎症小体组成成分ASC、NLRP3、caspase-1基因和蛋白的表达情况,ELISA检测各组细胞培养基中的IL-1β、IL-18含量,AO/EB染色和LDH细胞毒性检测试剂盒分析细胞的死亡情况,ROS测定试剂盒观察细胞内ROS荧光强弱。结果与pH 7.4组比较,酸化组的促炎细胞因子IL-1β、IL-18和炎症小体组成成分ASC、NLRP3、caspase-1基因和蛋白的表达明显增加,荧光显微镜观察到ROS荧光明显增强,AO/EB染色和LDH检测实验发现酸化可以诱导软骨细胞死亡,且pH 6.0酸化处理组效果最明显;ROS还原剂NAC预处理可以明显下调IL-1β、IL-18、ASC、NLRP3、caspase-1基因和蛋白的表达,并且明显减弱软骨细胞内ROS荧光,同时明显下调细胞死亡率。结论胞外酸化可能通过上调细胞内ROS的含量,促使软骨细胞发生焦亡。
- 吴小山陈飞虎葛金芳周仁鹏祖胜芹朱传君
- 关键词：关节炎关节软骨细胞ROSNAC
- 大鼠ASIC1基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及其功能鉴定
- 2016年
- 目的构建大鼠酸敏感离子通道1(ASIC1)基因启动子荧光素酶报告质粒pGL3-ASIC1-promoter,并进行功能的鉴定。方法设计、合成ASIC1启动子引物,采用聚合酶链反应(PCR)技术从大鼠全基因组DNA中扩增出ASIC1启动子片段;NheⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pGL3-Basic报告载体上;构建的pGL3-ASIC1-promoter重组质粒和pRLTK内参质粒瞬时共转染293T细胞检测ASIC1启动子活性。结果 PCR扩增得到大鼠ASIC1基因启动子片段;成功构建pGL3-ASIC1-promoter报告基因载体,菌落PCR和测序结果表明启动子DNA序列正确。与空质粒pGL3-Basic转染组相比,pGL3-ASIC1-promoter质粒转染组的荧光素酶活性明显增加(P<0.01)。结论成功构建了大鼠ASIC1基因启动子报告基因载体,为探究ASIC1转录表达的调控机制奠定基础。
- 周仁鹏吴小山王志森谢亚亚李悦代贝贝王志强葛金芳陈飞虎
- 关键词：启动子荧光素酶报告基因
