高小艳
- 作品数：5 被引量：27H指数：3
- 供职机构：宁夏大学农学院更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项国家现代农业产业技术体系建设项目山东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学经济管理更多>>
- 牛气管抗菌肽的原核表达、体外抗菌活性及其组织分布分析被引量：4
- 2010年
- 本文旨在对牛气管抗菌肽(tracheal antimicrobial peptide,TAP)基因进行原核表达,以及研究重组蛋白的抗菌活性,并分析TAP在各组织的表达分布情况,为开展转TAP基因抗乳腺炎奶牛研究提供技术资料。作者采用RT-PCR从荷斯坦奶牛气管扩增TAP基因,分析其序列后根据大肠杆菌表达系统对密码子的偏好性,人工合成牛TAP基因,构建pET32a(+)-TAP重组质粒;然后转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并纯化。对表达蛋白进行SDS-PAGE、Western Blot鉴定;在线软件分析目的蛋白表达量。采用滤纸片法测定重组牛TAP的体外抗菌活性,并用RT-PCR法分析牛各组织中TAP表达情况。测序结果表明,扩增到114bp目的基因片段,可编码含38个氨基酸残基的成熟蛋白。SDS-PAGE分析表达的融合蛋白相对分子质量为24ku,重组蛋白以可溶性方式存在,表达量占菌体总蛋白的52.1%。Western Blot检测只出现单一条带。抗菌效价分析表明0.115μg·μL-1重组蛋白对牛源金黄色葡萄球菌有一定的抗菌活性。TAP基因在奶牛咽喉、肺、气管、小肠、肝、心脏及口腔黏膜中均有表达,在鼻黏膜和舌黏膜中微量表达,在皮肤中几乎不表达。作者成功表达了牛TAP基因,重组牛TAP蛋白在大肠杆菌中实现高效表达,并具有一定的抗奶牛乳腺炎致病菌的活性,为未来培育抗乳腺炎转基因奶牛及相关基因工程产品的开发奠定了基础。
- 高小艳王长法刘顺德李秋玲杨宏军杨少华仲跻峰何洪彬
- 关键词：抗菌活性乳腺炎
- 西部大开发宁夏畜牧业发展回顾及其前景展望被引量：2
- 2011年
- 以中国国家统计局2000年至2009年宁夏畜禽饲养量、肉奶蛋产量、畜产品人均占有量和肉类产品的生产构成等指标为依据,回顾分析西部大开发10年宁夏畜牧业生产发展状况,阐述宁夏畜牧业未来的发展趋势.
- 刘顺德李娜刘文艳高小艳
- 关键词：西部大开发畜牧业
- 动物FABP家族基因与脂肪沉积关联研究进展被引量：14
- 2010年
- 综述了动物FABP(Fatty acid binding protein,FABP)的类型、分布、结构特点与H-FABP(Hear fatty acidbinding proteint,H-FABP),A-FABP(Adipocyte fatty acid binding protein,A-FABP),L-FABP(Live fatty acidbinding protein,L-FABP),I-FABP(Ileum fatty acid binding protein,I-FABP),Ex-FABP(Extracellular fatty acidbinding protein,Ex-FABP)基因多态性及其与脂肪沉积的关联研究进展.
- 刘顺德李娜高小艳刘文艳
- 关键词：脂肪沉积动物
- 动物防御素研究进展被引量：2
- 2010年
- 防御素是生物体先天性免疫防御系统的重要组成成份,是宿主抵抗外界病原微生物入侵的第一道防线。动物防御素因具有抗菌谱广、抗菌机制特殊、无残留、对自身细胞没有伤害等特点,在畜禽生产中具有广阔的应用前景。
- 高小艳刘顺德王长法何洪彬
- 高表达牛气管防御素的真核重组载体的构建及其鉴定被引量：5
- 2010年
- 根据GeneBank中牛TAP的序列设计了1对特异性引物,采用RT-PCR方法从牛气管组织扩增牛TAP基因,并克隆到pEASY-T3载体。测序结果表明,扩增的片段含有144 bp核苷酸,编码48个氨基酸,与已报道的bTAP有1个氨基酸不同。该基因与真核表达载体FG9重组,经过PCR,酶切和测序鉴定,筛选牛TAP基因重组真核表达载体。使用脂质体法将FG9-TAP重组质粒转染293T细胞,斑点ELISA检测结果表明,成功构建了高表达牛TAP基因的真核表达载体,为抗金黄色葡萄球菌转牛TAP基因奶牛培育研究奠定基础。
- 高小艳王长法刘顺德王洪梅刘晓何洪彬
- 关键词：真核表达载体基因表达
