赵格
- 作品数：4 被引量：19H指数：2
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- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 绿脓杆菌鞭毛蛋白FlgE的重组表达及初步活性鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的原核表达及纯化绿脓杆菌鞭毛蛋白ngE并进行初步活性鉴定。方法分析绿脓杆菌鞭毛蛋白FlgE的基因序列，设计带适当酶切位点的引物，用PCR方法扩增出FlgE的编码DNA序列，与大肠杆菌表达载体pET24a同时经NdeI／Hind Ⅲ双酶切、纯化及连接后构建pET24a—FlgE原核表达质粒，挑选重组阳性质粒经DNA测序确认序列正确，转化至大肠杆菌B121中进行诱导表达条件优化，使重组质粒表达目的蛋白，采用组氨酸标签亲和层析法对目的蛋白进行纯化，通过SDS-PAGE对纯化后蛋白相对分子质量进行鉴定，用试剂盒进行去内毒素化处理。在体外培养人角膜上皮细胞系细胞，加入纯化的F1gE重组蛋白，培养4h后应用实时定量PCR检测各种相关的炎性因子以反映FlgE蛋白活性。结果可用于大肠杆菌表达系统的重组pET24a—F1gE构建成功，其编码的蛋白在BL21中获得高效表达，当诱导剂异丙基一B—D一硫代吡喃半乳糖苷浓度为1mmol／L，在16、225r／min振荡培养20h，诱导目的蛋白表达量最高，经纯化、去内毒素处理和SDS—PAGE鉴定，获得纯化的重组FlgE蛋白。角膜上皮细胞用20μg／ml FlgE处理后，细胞内炎性相关分子IL-6和IL-8的表达量明显上升，而灭活的F1gE蛋白则丧失该刺激活性。结论获得纯化的重组绿脓杆菌鞭毛蛋白FlgE，且可刺激角膜上皮细胞上调炎性因子IL-6、IL-8的表达。
- 林丹丹赵格王斌王宜强
- 关键词：绿脓杆菌原核表达载体角膜上皮细胞炎性因子
- 免疫刺激剂CpGODN防治烟曲霉菌引起的变态反应性结膜炎的实验研究
- 2011年
- 背景研究证实免疫调节剂CpGODN对蛋白类过敏原引起的变态反应性结膜炎有防治作用，但其对真菌引发的变态反应性结膜炎是否有类似作用尚不清楚。目的研究局部应用CpGODN是否能够预防或减轻烟曲霉菌引发的变态反应性结膜炎。方法建立烟曲霉菌变态反应性结膜炎小鼠模型，用CpGODN或对照ODN（GpCODN）对其进行干预，PBS干预作为阴性对照。实验分为预防实验（模型动物在变态反应原再次激发前给药）和治疗实验（激发后给药），对小鼠眼部临床症状进行评分。取小鼠结膜组织进行组织病理学检查，并计数标本中的炎性细胞。应用实时定量聚合酶链反应（real-timePCR）法动态观察小鼠结膜组织中TLR4mRNA的变化；将烟曲霉菌免疫原与眼部回流淋巴结和脾脏的细胞进行共培养，流式细胞分析培养细胞中调节性T淋巴细胞的比例和活化状态。结果预防实验中，结膜下注射CpGODN组与GpCODN对照组、PBS对照组比较，小鼠眼部过敏症状评分差异均无统计学意义（P〉0．05）；CpGODN组与GpCODN对照组、PBS对照组比较结膜组织中性粒细胞数降低，差异均有统计学意义（21．25±11．59vs30．75-4-_11．44，21．25±11．59vs69．00±9．90；t=5．140，t=3．210，P〈0．01）；TLR4mRNA表达上调。在治疗实验中，CpGODN组与GpCODN对照组、模型对照组比较，跟部过敏症状评分降低（t=4．000，t=2．750，P〈O．05）；中性粒细胞数显著减少（t=4．870，t=3．829，P〈0．01）。CpGODN治疗组小鼠眼部回流淋巴结CD4^＋CD25^＋细胞以及CD4^＋CD25^＋CD69’细胞所占的比例均显著高于GpCODN组和PBS对照组（P〈0．05）。结论CpGODN通过上调结膜TLR4的表达、活化Treg细胞来预防和治疗烟曲霉菌引起的变态反应性结膜炎，预先结膜下注射和点眼均可减轻小鼠眼部过敏症状和晚期结膜炎性细胞的聚集。
- 李思媛赵格李长优杨玲玲陈豪王宜强
- 关键词：烟曲霉菌变态反应性结膜炎ODN调节性T淋巴细胞
- 真菌性眼内炎常见病因及致病菌种分析被引量：13
- 2014年
- 目的 探讨真菌性眼内炎的致病因素、常见类型及实验室检查结果的特点.方法 回顾性系列病例研究.收集2000年1月至2012年12月年间就诊于山东省眼科研究所青岛眼科医院的81例真菌培养阳性的眼内炎患者资料,研究真菌性眼内炎的主要致病因素、常见类型和实验室检查结果.结果 外源性真菌性眼内炎占90.1％（73/81）,其中43例是继发于真菌性角膜溃疡,27例是角膜穿通伤所致,3例继发于眼部其他手术.内源性真菌性眼内炎占9.9％（8/81）,其中4例与药物使用有关.共有67例患者进行了涂片显微镜查菌丝,阳性率为77.6％（52/67）,其中前房积脓阳性率为80.0％（16/20）,玻璃体阳性率为76.6％（36/47）.81份眼内炎患者标本共培养出10个菌属18个菌种,主要的致病菌依次为镰刀菌属60.5％（49/81）、曲霉属21.0％（17/81）和念珠菌属6.2％（5/81）.继发于角膜溃疡的患者中镰刀菌占88.4％（38/43）,角膜穿通伤患者中曲霉菌占40.7％（11/27）,内源性眼内炎患者中曲霉菌占50.0％ （4/8）.镰刀菌和曲霉菌对伏立康唑、两性霉素B、酮康唑、伊曲康唑和氟康唑的总敏感率分别为84.7％（33/39）、71.8％（28/39）、43.6％（17/39）、17.9％（7/39）和7.7％（3/39）.结论 真菌性眼内炎的主要类型是外源性眼内炎,真菌性角膜溃疡和角膜穿通伤是真菌性眼内炎的主要病因.镰刀菌、曲霉菌和念珠菌是真菌性眼内炎的主要致病菌,其中镰刀菌是继发于真菌性角膜溃疡的眼内炎的首位致病菌,曲霉菌是穿通伤后真菌性眼内炎的首位致病菌.内源性真菌性眼内炎的主要病因是药物使用,首位致病菌是曲霉菌.前房液和玻璃体液涂片查找菌丝是诊断真菌性眼内炎的有效方法.镰刀菌属和曲霉属对伏立康唑和两性霉素B的敏感性高.
- 孙士营赵格孙晓艳王倩于滨
- 关键词：眼内炎抗真菌药
- 直接PCR法对感染性棘阿米巴角膜炎的诊断价值被引量：5
- 2013年
- 背景棘阿米巴角膜炎的致盲率极高，发病初期易误诊为真菌性角膜炎或病毒性角膜炎，常规的临床诊断方法费时较长，特异性差，极易错过治疗的“时间窗”。常规PCR法检测简单、特异、有效，但由于病变标本取材量少，不易提取组织DNA，限制了其临床应用。目的探讨非提取组织DNA的直接PCR法扩增棘阿米巴虫株18SrRNA保守序列在棘阿米巴角膜炎快速诊断中的可行性。方法从山东省眼科研究所暨青岛眼科医院诊治的10例棘阿米巴角膜炎患者的病变角膜中分离10株棘阿米巴虫株，经鉴定均为T4基因型虫株。用直接PCR法分别扩增棘阿米巴原虫、白念珠菌、绿脓杆菌、I型单纯疱疹病毒以及正常人角膜上皮细胞以确定该方法的特异性。将棘阿米巴原虫稀释至不同的浓度以确定直接PCR法的敏感性。采用SPF级6周龄健康雌性BALB／c小鼠构建棘阿米巴角膜炎动物模型，于感染后第1、3、5、7、10、15天获取角膜组织，分别进行直接PCR、实时定量PCR（real—timePCR）、K0H封片镜检和原虫培养鉴定，比较各种方法的有效性和可行性。结果直接PCR法仅能扩增棘阿米巴DNA，其他病原体DNA均未扩增出；在每个获取的棘阿米巴角膜炎样本中最少可检测到10个棘阿米巴原虫。在棘阿米巴角膜炎小鼠模型中，直接PCR法在感染后第1、3、5、7、10、15天的阳性检出率分别为80．0％、90．0％、80．0％、70．0％、70．0％和50．0％，总阳性率为73．3％，高于原虫培养法的31．7％，差异有统计学意义（P=0．005）；K0H封片镜检的总阳性率为56．7％，real—timePCR法检测的总阳性率为61．7％，均略低于直接PCR法，差异均无统计学意义（P=0．056、0．172）。结论直接PCR法操作简单，在上述4种方法中对棘阿米巴原虫检测的特异性和敏感性最高，能够快速诊断棘阿米巴角膜炎，尤其对于待检标本少而
- 袁青宋子成孙士营赵格
- 关键词：棘阿米巴角膜炎聚合酶链反应
