覃晓玲
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 供职机构：三峡大学医学院分子生物学研究所更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人PD1胞外段基因的克隆、蛋白表达及抗体制备被引量：3
- 2010年
- 目的:研究人PD1的生物学活性,制备人PD1胞外段区域及其特异性抗体。方法:用PCR方法扩增编码人PD1胞外段的基因序列(hPD1ecr),将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达蛋白用SDS-PAGE和Western blot鉴定。纯化目的蛋白免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA),流式细胞术检测抗体滴度及其特异性。结果:原核表达载体pET28a(+)-PD1ecr成功构建,并可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到的PD1胞外区蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定正确。用纯化蛋白免疫日本大耳白兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性。结论:得到纯化的人PD1胞外蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下人PD1蛋白,为进一步研究PD1功能奠定了实验基础。
- 史继静刘朝奇李斌覃晓玲任东明
- 关键词：原核表达免疫原性多克隆抗体
