薛春艳
- 作品数：1 被引量：8H指数：1
- 供职机构：南京军区南京总医院更多>>
- 发文基金：江苏省博士后科研资助计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分离纯化及鉴定被引量：8
- 2009年
- 目的:调节性T细胞(Treg)是近年来免疫学研究的热点。文中研究获取高纯度Treg的方法及其表型的鉴定。方法:流式细胞术(FACS)分析正常小鼠脾脏中CD4+、CD4+CD25+、CD4+CD25-3个细胞亚群的表型;采用二步磁性细胞分选法(MACS)纯化小鼠脾细胞中CD+CD25+Treg,并对分离后的细胞表型进行鉴定。结果:①依CD25表达水平不同将小鼠天然CD4+T细胞划分为3群,转录因子Foxp3、细胞毒T淋巴细胞相关分子-4(CTLA-4/CD152)、糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体(GITR)、CD69在CD4+CD25+细胞亚群呈显著性高表达(P<0.01),CD4+CD25+T细胞主要存在于CD45RB低表达细胞亚群,CD28的表达在CD4+CD25+细胞亚群明显下降(P<0.05)。②使用二步MACS法从正常小鼠脾脏中分离CD4+CD25+T淋巴细胞的得率为1%～1.2%,纯度为87.29%～92.04%。FACS分析结果显示,Foxp3优先表达于CD4+CD25+T细胞亚群,表达率为(66.60±1.03)%,而在CD4+和CD4+CD25-T细胞亚群呈低水平表达,分别为(23.97±2.00)%和(16.78±3.24%)。CTLA-4在CD4+CD25+T细胞亚群表达率为(77.37±1.67)%,明显高于在CD4+和CD4+CD25-T细胞亚群的表达[(21.97±2.39)%和(18.04±3.16)%]。纯化的CD4+CD25+T细胞亚群表现为CD127的低表达。结论:MACS阴性加阳性二步分选法避免激惹CD4分子,可获得高纯度且具有天然CD4+CD25+Treg细胞表型及功能特征的细胞。
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- 关键词：调节性T细胞流式细胞术分析
