焦道忠
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 供职机构：郑州轻工业学院食品与生物工程学院更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 鸡α干扰素基因的克隆与表达被引量：5
- 2008年
- 通过对鸡α干扰素基因的克隆,获取一定纯度的干扰素蛋白。从NCBI上搜索出鸡α干扰素基因的序列,根据其成熟蛋白编码序列设计引物,通过PCR从家鸡肝脏基因组中扩增出成熟鸡α干扰素的编码基因,利用基因重组技术构建出pUCm-T/IFN-α,再亚克隆至载体质粒pET-43.1a(+),构建出pET-43.1a(+)/IFN-α重组质粒,经酶切鉴定、DNA测序,证明重组质粒构建正确。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行发酵,IPTG诱导表达后进行纯化及SDS-PAGE分析。工程菌诱导表达后的电泳图谱在相对分子量约19kDa的位置出现明显目的条带,约占菌体总蛋白的30%,表达产物主要以包涵体形式存在,经过NI2+-NTA亲和层析纯化,SDS-PAGE电泳后经凝胶扫描纯度达95%以上。获得了纯度较高的目的蛋白,为下一步对鸡α干扰素进行复性及活性研究奠定了基础。
- 焦道忠王云龙李晨阳李春利
- 关键词：PCR扩增纯化
- 猪血清白蛋白基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2007年
- 血清白蛋白融合技术是一种开发长效重组蛋白药物的新技术。为了获得猪血清白蛋白(PSA)基因,根据GenBank(登录号:AY663543)中PSA的基因序列,设计一对引物,采用RT-PCR从新鲜猪肝组织中扩增出PSA基因的全长cDNA,产物纯化后连接至pBS-T载体,转化大肠埃希菌TG1,采用PCR法及酶切鉴定法筛选出阳性菌株后进行测序。序列分析结果表明,成功克隆了PSA基因的1 821 bp全长cDNA,与GenBank中参照基因序列同源性为99.6%,氨基酸序列同源性为99.5%。本研究数据已提交至GenBank,并申请到一个登录号EF202601。
- 吴阳李晨阳李玲玲焦道忠李春利张宁宁王岁楼
- 关键词：融合技术
