周国超
- 作品数：7 被引量：3H指数：1
- 供职机构：北京药物化学研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 稳定表达人TLR5及NF-κB响应报告分子的HEK-293细胞系的建立被引量：1
- 2017年
- 目的构建人Toll样受体-5(hTLR5)和NF-κB信号通路响应的荧光素酶(luciferase)-绿色荧光蛋白(GFP)报告分子的慢病毒质粒,获得稳定表达hTLR5及NF-κB响应报告分子的HEK-293细胞系。方法通过PCR及全基因合成方法获得hTLR5和5×NF-κB结合位点序列,分别构建pWSLV-hTLR5-puro和pWSLV-5×NF-κB-nanluc-GFP慢病毒质粒;将2个慢病毒质粒分别与包装质粒共转染HEK-293T细胞进行慢病毒包装,将获得的慢病毒上清经浓缩后共感染HEK-293细胞,经嘌呤霉素筛选和流式细胞分选后得到表达hTLR5及NF-κB响应报告分子的HEK-293细胞。经传代后,采用Western印迹法和免疫荧光法鉴定hTLR5表达情况,荧光显微镜下观察并采用荧光素酶定量法检测不同浓度细菌鞭毛蛋白(flagellin)对NF-κB信号通路的激活情况。结果质粒酶切鉴定及DNA测序结果表明插入目的片段与预期相符,重组慢病毒质粒构建正确;HEK293-N-T细胞高表达hTRL5,且hTLR5能正确定位到细胞膜表面;鞭毛蛋白能显著激活HEK293-N-T细胞的NF-κB信号通路,且具有剂量依赖关系。结论正确构建了hTLR5和NF-κB信号通路响应的荧光素酶-GFP报告分子的慢病毒质粒,并成功建立了稳定表达hTLR5及NF-κB响应报告分子的HEK-293细胞系。
- 石童周国超李丽琴张瑞华陈学军王陈鹿晓晶
- 关键词：核因子-ΚB慢病毒
- G蛋白偶联受体异源表达技术研究进展被引量：1
- 2016年
- G蛋白偶联受体(GPCRs)是具有7次跨膜螺旋的细胞整合膜蛋白,大约占人类蛋白质组的3%,它们广泛地参与到人体的细胞增殖、分化和迁移等各类生理活动中,是一类非常重要的药物作用靶点。GPCRs的结构学研究进展缓慢,因为它们在体内含量很低,必须通过体外重组技术才能获得大量有活性的GPCRs用于结构学研究。近年来,GPCRs已经在大肠杆菌、酵母、哺乳动物、昆虫杆状病毒、无细胞等多种异源表达系统中成功表达,该文对GPCRs在不同表达系统的高水平表达策略进行综述,为GPCRs的分子结构研究和以GPCRs为作用靶点的药物筛选研究奠定基础。
- 周国超石童李丽琴
- 关键词：G蛋白偶联受体包涵体拮抗剂启动子
- MST技术在生命科学中的应用进展被引量：1
- 2017年
- 在生命科学领域中,生物分子间的相互作用具有非常重要的作用。通过分子间相互作用分析不仅可阐明细胞生物学事件,而且为疾病发生机制和药物发现提供基础。MST技术是一种基于检测在温度梯度中的生物分子电泳迁移率的变化而检测生物分子间结合、解离过程,获取分子间相互作用的模式和动力学常数等方面信息的新技术,是近年来发展的研究生物分子相互作用的强有力工具,已广泛应用于生命科学领域研究。本文综述了MST的技术原理、分析方法及其在生命科学领域的应用进展。
- 李丽琴石童周国超王陈陈学军张瑞华徐建富
- G蛋白偶联受体高效表达体系研究进展
- G蛋白偶联受体（GPCRs）又称7次螺旋跨膜蛋白受体,是体内最大的蛋白质超家族,迄今为止发现的人GPCR有上千种。G蛋白偶联受体是细胞整合膜蛋白,它可以与激素、神经递质、光、气味分子等小分子物质发生相互作用,在细胞信号传...
- 周国超李丽琴石童鹿晓晶张瑞华
- 关键词：G蛋白偶联受体
- 文献传递
- 稳定表达TLR5受体及NF-κB响应LUC-GFP报告基因的HEK293细胞系的构建
- 目的:Toll样受体-5(toll-like receptor 5,TLR5)是TLR家族中唯一识别和结合蛋白抗原的受体,TLR5能够特异性识别并结合细菌鞭毛蛋白(Flagellin),诱导MyD88依赖性的信号传导和促...
- 石童周国超鹿晓晶王陈李丽琴
- 文献传递
- 昆虫杆状病毒表达系统改进策略研究进展
- 传统昆虫细胞杆状病毒表达系统(IBEVS)重组成功率仅有0.1%
- 周国超石童张瑞华陈学军李丽琴
- 文献传递
- 生物分子定量分析技术研究进展
- ＜正＞在生命科学领域中,生物分子间的相互作用分析有助于为疾病发生机制和治疗药物筛选发现方面提供依据。生物分子间的定量分析主要包括生物化学和生物物理学方法。生物化学方法主要有电泳迁移率分析法,酶联免疫分析法和放射配基受体结...
- 李丽琴周国超石童鹿晓晶王陈
- 文献传递
