张欢
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：“十二五”国家科技计划农村领域教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- CRISPR/Cas9系统介导敲除CSN2基因奶山羊胎儿成纤维突变细胞的制备被引量：2
- 2017年
- 旨在研究β-酪蛋白(β-casein,CSN2)对奶山羊泌乳性能的影响,利用CRISPR/Cas9系统敲除奶山羊胎儿成纤维细胞(GFFs)CSN2基因,为转基因动物模型构建提供核供体。针对CSN2第二号、八号外显子设计5个靶向CSN2基因sg RNA(T1、T2、T3、E1和E2),与PX330-e GFP载体连接,构建PX330-e GFP-sg RNA敲除表达载体,经T7E I酶切实验评估敲除效率;选择第八号外显子敲除效率最高sg RNA,构建PX330-Neo-sg RNA敲除载体,将PX330-e GFP-sg RNA T及PX330-e GFP-sgRNAE与PX330-Neo-sgRNAE组合转染细胞,经流式分选、G418药筛获得敲除CSN2基因细胞。Western blot测定转染细胞CSN2表达情况。测序结果表明各sgRNA均正确连入PX330表达载体中,T7E 1酶切实验表明sg RNA T1、sgRNAE2敲除效率最高达34.9%和25.9%;经荧光定量PCR及免疫荧光检测结果表明,eGFP+Neo转染组CSN2敲除细胞比例显著高于e GFP+e GFP转染组(P<0.05)。综上表明,CRISPR/Cas9系统可有效应用于奶山羊胎儿成纤维细胞基因编辑,产生的突变细胞为制备CSN2基因敲除奶山羊提供核供体材料。
- 贾启鹏申培磊张欢张勇
- 关键词：奶山羊Β-酪蛋白
- 牦牛TMEM-18基因多态性及其与生产性能关联分析被引量：5
- 2017年
- 跨膜蛋白18基因(TMEM-18)是一个末端为低聚嘧啶的基因,与动物生长发育密切相关。为了研究牦牛TMEM-18基因多态性与生产性能的关系。以192头天祝雌性牦牛血样NDA构建混合池,扩增TMEM-18基因内含子1和外显子5的序列。运用BLAST和Chromas软件分析突变位点,运用高分辨率熔解曲线分析技术(HRM)统计基因型分型,采用SHEsis软件进行基因型频率和等位基因频率计算,同时对多态位点进行配对连锁不平衡和单倍型分析,运用SPSS21.0分析基因多态位点与生产性能关联。结果表明,牦牛TMEM-18基因内含子1处存在2个多态位点,分别是861(A/G)和1267(C/T),外显子5处存在1个多态位点为4 447(C/T)。关联分析表明,牦牛TMEM-18基因861(A/G)位点的不同基因型与牦牛的体高、体重、胴体重和屠宰率差异性显著(P<0.05);1267(C/T)位点的不同基因型与牦牛的体高、体重和屠宰率差异性显著(P<0.05),而牦牛TMEM-18基因4447(C/T)位点的不同基因型与牦牛的体斜长、管围、胸围、体重、胴体重、净肉重、净肉率和屠宰率均存在显著性差异(P<0.05)。通过单倍型分析发现群体中存在3种单倍型组合,即ACC单倍型、GTC单倍型和GTT单倍型,其中ACC单倍型组合个体数目明显多于其他单倍型组合,为优势单倍型。本实验揭示TMEM-18基因可作为牦牛生产性能开发的候选分子标记,为牦牛遗传资源的利用、开发与新品种的选育提供依据。
- 张欢张全伟王琪马友记张勇赵兴绪
- 关键词：牦牛SNPHRM生产性状
- 牦牛PPARδ基因多态性与生长性状的相关性被引量：2
- 2017年
- 【目的】揭示牦牛PPARδ基因的遗传变异特征,发现与牦牛生长性状显著相关的候选分子标记,为牦牛分子育种积累基础资料.【方法】以96头牦牛血样为材料,运用DNA池测序和PCR-HRM等技术检测PPARδ基因的序列变异.【结果】检测到牦牛PPARδ基因内含子中2个SNPs.遗传变异特征分析显示,SNP1(g.10045A/G)和SNP2(g.10226A/G)位点属于中度多态性.连锁不平衡和单倍型分析表明,牦牛PPARδ基因2个多态位点之间为弱连锁,单倍型AA属于优势单倍型(频率为42.2%).方差分析表明,单个的SNP与牦牛生长性状有着显著或极显著的关联.【结论】牦牛PPARδ基因的2个SNPs与其生长性状显著相关,此结果可以应用于牦牛的分子育种实践.
- 纪永吉张全伟王琪张欢张勇赵兴绪
- 关键词：牦牛多态性单倍型生长性状
- AGO2和AGO3在不同月龄绵羊睾丸中的表达与定位研究
- <正>引言:Argonaute(AGO)是一类高度保守的家族蛋白,该家族中AGO2和AGO3主要在生殖细胞系中表达,对维持生殖系DNA完整、抑制转座子转录、抑制翻译、参与异染色质的形成、执行表观遗传调控和生殖细胞发生等均...
- 张全伟张欢王琪张勇马友记赵兴绪
- 文献传递
- 奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌耐药基因型和表型的相关性分析被引量：1
- 2016年
- 为研究奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌耐药基因型和表型的分布,并对其相关性进行分析,采用PCR方法对从奶牛乳腺炎乳样中分离的33株金黄色葡萄球菌进行耐药基因检测,采用微量肉汤稀释法测定其对7种药物的敏感性。PCR结果显示,fos A、erm B、erm Cb、aph(3′)-IIIa和lin A/A′基因的检出率分别为51.52%、87.88%、100%、100%和6.06%;未检测到mec A、fos B、fos C、tet M、erm Ab、msr A、msr B、mef A、aac(6′)-Ie+aph(2″)、ant(4′)-Ia、van A、van B、van C1、van C2/3等14种耐药基因。药敏试验结果显示,金黄色葡萄球菌对磷霉素最为敏感,敏感率高达100%,磷霉素可作为临床备用药物;对红霉素的耐药现象最为严重,达到了93.94%;对氨苄西林和克林霉素的耐药率均达到72.73%。相关性分析表明,fos B、fos C基因型和磷霉素耐药表型一致;红霉素耐药占比为93.94%,与erm B基因(87.88%)、erm Cb基因(100%)比较接近。
- 李光超武小虎马友记贡继尚胡俊杰张勇张欢赵兴绪
- 关键词：奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌抗生素基因型表型
- 牦牛乳新鲜干酪加工工艺研究被引量：3
- 2013年
- 针对牦牛乳新鲜干酪的加工过程,分析了凝乳温度、pH、CaCl2添加量、发酵剂添加量对新鲜干酪产率、感官评价、凝乳时间的影响,以上述3种指标为衡量依据,优化了新鲜干酪的加工工艺.结果表明:在发酵剂添加量为2%,凝乳温度为35℃,发酵pH 5.8,CaCl2添加量0.02g/100mL时,牦牛乳新鲜干酪出品率为20.07%,且品质最佳.
- 张欢甘伯中杨敏乔海军梁琪宋雪梅
- 关键词：出品率感官评价凝乳时间
