周丽军 作品数:11 被引量:31 H指数:4 供职机构: 四川农业大学动物医学院 更多>> 发文基金: 国家科技支撑计划 国家自然科学基金 四川省科技支撑计划 更多>> 相关领域: 农业科学 更多>>
兔出血症病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:2 2017年 为建立快速检测兔出血症病毒(RHDV)的TaqMan荧光定量PCR方法,根据RHDV VP60基因保守序列设计1对特异性引物和1条探针,进行条件优化,检测重复性、敏感性和特异性,建立了RHDV TaqMan荧光定量PCR方法。结果显示,标准品浓度在2.8×10~6~2.8×10~2 copies/L范围内具有良好的线性关系,最低可检测到2.8×10~1copies/L的标准品阳性质粒,变异系数小于2%。结果表明,建立的TaqMan荧光定量PCR方法的特异性、敏感性、重复性均达到试验设计要求,能快速检测临床样品中的RHDV,为我国RHDV的检测及其定量检测的相关研究提供了一种可靠的技术工具。 蒙正群 李桂黎 周丽军 冷依伊 罗怡琳 刘亚东 王印 姚学萍 杨泽晓关键词:兔出血症病毒 TAQMAN 荧光定量PCR 兔脾脏成纤维型细胞RS-17系的建立及其生物学特性 被引量:1 2019年 采用胰酶消化法培养技术,对乳兔脾脏组织的细胞进行原代培养,从脾脏组织中分离出1株成纤维型细胞,命名为RS-17。通过对细胞传代培养条件优化,细胞标志性蛋白检测,细胞生长曲线分析,细胞核型以及细胞致瘤性等测定,结果显示,RS-17细胞具有血清依懒性,成纤维细胞标志性蛋白检测阳性,具有正常的核型,无致瘤性,且目前细胞传至95代仍可稳定生长。这为RHDV(兔出血症病毒)感染机制等相关研究提供了细胞材料。 罗怡琳 蒙正群 周丽军 王印 姚学萍 杨泽晓 罗燕 耿毅关键词:脾脏组织 细胞系 生物学特性 四川部分地区禽源空肠弯曲菌MLST分型及遗传进化分析 被引量:4 2019年 目的为了解四川部分地区分离到的48株禽源空肠弯曲菌间的分子特征,以对来源不同的空肠弯曲菌进行分子分型及遗传进化分析。方法本研究参照MLST数据库,选取了空肠弯曲菌MLST分型7个管家基因aspA,glnA,glyA,gltA,tkt,pgm和uncA作为目的基因分别扩增及测序,并将所得序列经比对后进行遗传进化分析。结果 48株分离株中共含24种不同的序列型分属于9种不同的克隆系及11种独特型,其中22株分离株含有新序列型,占分离株的45.83%(22/48);9种不同的克隆系中以CC-21、CC-353、CC-464克隆系所含菌株相对较多,而克隆系CC-45、CC-48最少,均为1株分离株;11种独特型共存于21株分离株中,其中以ST-8675序列型最多,为8株。遗传进化树显示,属同一克隆系的不同型别间的分离株亲缘关系较近,如同属于CC-21克隆系的ST-298与ST-760型别分离株处于同一小分支、亲缘关系较近,但不同克隆系的分离株间遗传进化关系较远,鹌鹑源分离株(V13-20)单独处于一大分支与其余禽源分离株间的亲缘关系最远。总体而言,不同地区、宿主来源的分离株呈现遗传多样性。结论本研究中分离株间具有基因多样性,MLST分型为了解该地区空肠弯曲菌的遗传特性和分布特点提供了参考依据。 姚学萍 张博 王寒 邬旭龙 周丽军 曹随忠 王印 王印 杨泽晓关键词:空肠弯曲菌 管家基因 遗传进化 RHDV抗体检测胶体金与量子点标记试纸条的试制 兔病毒性出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)主要引起兔的一种急性、烈性、高度传染性和高度死亡性的疾病,由于感染该病毒后会导致患兔多器官的出血充血,而将该病称为兔病毒性出... 周丽军关键词:RHDV VP60 抗体 胶体金 文献传递 检测猪瘟病毒胶体金和量子点试纸条的初步研制 被引量:6 2020年 为建立快速、简便检测猪瘟病毒(CSFV)抗体的方法,本研究采用胶体金和量子点免疫层析技术,将纯化的重组CSFV E2蛋白作为捕捉抗原,以纯化的抗CSFV E2蛋白多克隆抗体和HRP兔抗猪IgG分别包被于硝酸纤维素膜上,作为质控线(C线)和检测线(T线),优化反应条件,制备免疫层析试纸条,用于临床检测。结果表明,制备的2种试纸条都可用于检测CSFV标准阳性血清,使用不同批次试纸条进行检测,结果无差异。2种试纸条与CSFV阳性血清反应呈阳性,与伪狂犬病毒(PRV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和圆环病毒2型(PCV2)反应呈阴性;胶体金试纸条在临床样品中阳性检出率为84.38%(81/96),与CSFV抗体检测ELISA试剂盒检测阳性符合率为92.05%(81/88);量子点试纸条阳性检出率为87.50%(84/96),与ELISA试剂盒检测阳性符合率为95.45%(84/88)。本研究制备的2种试纸条都具有较好的特异性、敏感性、重复性和稳定性。 江地科 尹清清 项明源 王印 姚学萍 罗燕 杨泽晓 张鹏飞 张保海 周丽军关键词:猪瘟病毒 E2蛋白 胶体金 量子点 副猪嗜血杆菌及巴氏杆菌双重荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:10 2019年 为建立副猪嗜血杆菌(Hps)、多杀性巴氏杆菌(Pm)的双重荧光定量PCR检测方法,本研究基于Hps的Omp P2基因,Pm的PlpE基因设计两对特异性引物及探针,通过对反应条件优化,建立了一种同时检测Hps及Pm的双重荧光定量PCR方法。该方法能够特异性地检测Hps和Pm,其对重组质粒标准品的最低检测浓度分别为5.60×10^2拷贝/μL、7.58×10^2拷贝/μL。双重与单一荧光定量PCR最低检测限相同,且均是常规PCR的100倍。重复性试验结果显示,该方法的组内和组间变异系数均小于2.5%。临床应用结果显示:该方法对阳性样品的检出率为53.57%,明显优于常规PCR和细菌分离鉴定。该方法能够用于两种疾病的同时检测和快速排查疾病。为两种疾病的防治提供有效检测工具。 姜睿姣 周丽军 邬旭龙 张鹏飞 罗梓丹 肖璐 王印 姚学萍 杨泽晓 罗燕关键词:副猪嗜血杆菌 巴氏杆菌 一种基于DMEM的霉菌固体培养基及其制备方法 本发明公开了一种基于DMEM的霉菌固体培养基及其制备方法,该培养基由以下原料制备而成:琼脂粉3g;氯化钠0.5‑1g;蒸馏水或超纯水150mL;DMEM培养液50‑100mL;葡萄糖0.175‑0.35g,双抗2‑3mL... 杨泽晓 王印 姚学萍 李岩 耿毅 蒙正群 张晗 刘亚东 徐秋梅 罗怡琳 周丽军文献传递 猪源莫拉菌的分离鉴定与部分生物学特性分析 被引量:4 2018年 从病死仔猪心脏中分离到一株革兰阴性菌,对该细菌进行形态学观察、生化鉴定、16S r DNA序列测定,确认该菌为猪源莫拉菌属亚种,将该菌株命名为猪源莫拉菌-ZY20001。对菌株进行致病性试验、药敏试验和部分耐药基因的检测。结果显示,该菌引起小鼠胸腔积液,不致死,对红霉素、青霉素、多粘菌素等21种抗生素药物表现不同程度的敏感,对哌拉西林耐药。菌株ZY20001具有TEM型β-内酰胺酶耐药基因,表型与基因型不符。该实验可为深入研究莫拉菌的分类进化及药物治疗提供参考依据,同时对青霉素耐药表型与基因型关系所做的初步探讨也丰富了流行病学调查资料。 廖倡宇 张鹏飞 王印 杨泽晓 姚学萍 姜睿姣 邬旭龙 张博 周丽军 周丽军关键词:RDNA 耐药性 2株兔出血症病毒全基因测定与遗传进化分析 2018年 对2株兔出血症病毒(RHDV)SCH04、Sch07进行全基因组序列测定,并进行同源性及遗传进化分析。按照病毒核酸组成,将病毒基因分7段进行RT-PCR扩增,将分段扩增产物分别克隆到p MD-19T载体进行测序,用DNAStar进行拼接,得到全基因组序列;参照Gen Bank上登陆的31株RHDV毒株全基因核苷酸序列、VP60基因核苷酸序列以及ORF2编码基因核苷酸序列对2株病毒进行同源性和遗传进化分析。结果显示,SCH04基因组全长7 439 bp,Sch07基因组全长7 438 bp,2株病毒全基因的核苷酸序列同源性为99.8%,与31株参考毒株全基因的核苷酸序列同源性为78.3%~97.0%;2株病毒的VP60基因核苷酸序列同源性为99.7%,ORF2编码基因核苷酸序列同源性为99.2%。进化树显示2株病毒同属于抗原变异株RHDVa(GI.1a)基因群,且亲缘关系最近。VP60基因核苷酸序列与ORF2编码基因核苷酸序列均可以作为RHDV遗传进化分析。 蒙正群 周丽军 罗怡琳 冷依伊 张鹏飞 王印 姚学萍 耿毅 杨泽晓关键词:兔出血症病毒 全基因 遗传进化 鸡柏氏禽刺螨感染的初步研究 2017年 为探索四川某鸡场近年来肉鸡每年夏季均发生以腹部、腿部皮肤出现丘疹与痂皮为特征性病变的疫病病因,根据送检病鸡的临床症状、剖检病变和疾病流行特点进行初步诊断,并采用常规实验室诊断方法和PCR技术进行寄生虫检查、细菌分离鉴定、鉴别诊断和治疗的初步研究。结果显示,从病鸡体表检查到的禽刺螨为柏氏禽刺螨,PCR扩增其线粒体细胞色素氧化酶亚单位1(CO 1)基因的576 bp大小靶片段与柏氏禽刺螨OB株核苷酸序列的同源性为99%;同时从丘疹病变组织中分离到1株阿尼蒂斯葡萄球菌,该葡萄球菌分离株不致死昆明小鼠,耐受青霉素、阿莫西林、环丙沙星、头孢他啶、复方新诺明、卡那霉素和强力霉素等13种受试药物;确定此疫病由鸡柏氏禽刺螨感染引起,灭鼠、杀螨和敏感药物抗菌措施具有良好防治效果。这是国内鸡发生柏氏禽刺螨感染的首次报道,为鸡禽刺螨感染的防控及相关研究提供了科学参考。 杨泽晓 刘亚东 李俐睿 姚学萍 王印 周丽军 蒙正群 罗怡琳 李岩关键词:皮炎 葡萄球菌