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非酯化脂肪酸对原代培养犊牛肝细胞胰岛素信号通路的影响: 2016年; 旨在探讨非酯化脂肪酸(nonestesterified fatty acids,NEFAs)对体外原代培养犊牛肝细胞胰岛素信号通路的影响及SIRT1在其中的调控作用。选择培养48h的原代犊牛肝细胞,添加不同浓度的NEFAs(0、0.6、1.2、1.8mmol/L),继续培养12h,胰岛素处理组在收样前用100nmol/L胰岛素处理30min,每个浓度3个重复。另外选取已培养48h的细胞,用SIRT1抑制剂Nicotinamide(10mmol/L)处理12h,胰岛素处理组在收样前用100 mmol/L胰岛素处理30min。运用免疫印迹Western blot方法,检测NEFAs和Nicotinamide对肝细胞胰岛素信号通路关键蛋白IR和Akt的磷酸化水平及SIRT1蛋白表达水平的影响。结果显示,与对照组相比,1.2、1.8 mmol/L NEFAs组胰岛素刺激的IR磷酸化水平显著降低(P<0.01),而Akt的磷酸化程度在NEFAs浓度为0.6 mmol/L时即显著降低(P<0.01),同时,SIRT1的蛋白表达水平在NEFAs为1.2、1.8mmol/L显著降低(P<0.01);添加SIRT1抑制剂显著降低SIRT1的蛋白表达水平(P<0.01),同时胰岛素刺激的Akt磷酸化水平也显著降低(P<0.01)。结果表明,高浓度的NEFAs可以损伤体外原代培养肝细胞的胰岛素信号通路,SIRT1在NEFAs损伤的胰岛素信号通路中发挥重要作用。; 杜希良王亚洲杨宇宸赵志波刘欢张世奇王哲李心慰刘国文; 关键词：SIRT1 胰岛素信号通路肝细胞犊牛

非酯化脂肪酸对原代犊牛肝细胞内质网应激信号通路的影响被引量：3: 2016年; 通过体外添加一定浓度的非酯化脂肪酸(nonestesterifiedfatty acid,NEFAs)(1.8 mmol/L)处理犊牛原代肝细胞不同时间,运用Western blot和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,测定NEFAs对内质网应激(ER stress)标志分子IRE1α磷酸化水平和GRP78、CHOP、XBP-1的mRNA表达水平的影响。结果显示,随着NEFAs作用时间的增加,与0.5h组相比,IRE1α磷酸化水平逐渐升高,NEFAs处理小于5h时,IRE1α磷酸化水平呈时间依赖性增加。并在5h达到最高水平,极显著高于0.5h组(P<0.01),此后,磷酸化水平降低。与0.5h组相比,GRP78、CHOP、XBP-1的mRNA的表达水平整体逐渐升高,NEFAs处理9h时极显著高于0.5h时组(P<0.01)并达到最高水平。结果表明,一定浓度的NEFAs可诱导奶牛肝细胞发生内质网应激。; 雷林赵志波王亚洲朱艺玮刘欢张世奇王哲李心慰刘国文; 关键词：内质网应激肝细胞奶牛

罗格列酮对非酯化脂肪酸体外诱导的犊牛原代肝细胞线粒体功能紊乱的影响被引量：1: 2016年; 本试验旨在探讨非酯化脂肪酸（Nonestesterified fatty acid,NEFAs）对体外原代培养犊牛肝细胞线粒体功能以及罗格列酮对NEFAs诱导的线粒体功能紊乱的影响。体外添加NEFAs（1.8mmol/L）处理犊牛原代肝细胞不同时间,运用Western blot和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法检测线粒体呼吸链复合体IV（COX IV）蛋白水平及mRNA水平的影响。另外选取细胞,罗格列酮（10nmol/L）预处理细胞24h后添加NEFAs（1.8mmol/L）处理9h。运用Western blot和qRT-PCR方法检测PGC-1α、Mfn-2的蛋白表达水平及COX IV mRNA表达水平。结果显示,随着NEFAs作用时间的增加,与0h组相比,NEFAs处理5h以上时COX IV蛋白表达水平极显著降低（P〈0.01）,处理7-12h时COX IV mRNA表达水平呈显著降低（P〈0.05）。添加罗格列酮后,罗格列酮可极显著增加COX IV mRNA水平,PGC-1α、Mfn-2蛋白表达水平（P〈0.01）。结果表明,NEFAs可诱导犊牛原代肝细胞发生线粒体功能紊乱,罗格列酮可缓解由NEFAs诱导的犊牛原代肝细胞线粒体功能紊乱。; 高文文王亚洲赵志波刘欢张世奇王哲李心慰刘国文; 关键词：罗格列酮肝细胞奶牛

一株奶牛粪便中甲烷氧化菌的分离与鉴定被引量：2: 2016年; 甲烷氧化菌是一类能以甲烷和甲醇作为唯一碳源和能源进行生长的微生物。利用甲烷氧化菌选择性培养基从健康奶牛粪便样本中分离、筛选多株甲烷氧化菌,选择其中一株对甲烷代谢率较高的菌株命名为M17,并对其进行形态学观察、16S rDNA同源性比对以及理化性质分析的研究。结果表明,该菌株属于甲烷氧化菌Methylobacterium属,能够利用多种碳源进行生长,但以甲醇为碳源生长最为良好,最适生长温度为35℃,最适pH为6.8左右。; 刘欢王亚洲赵晨旭赵志波张妍崔媛旭李心慰刘国文; 关键词：甲烷氧化菌甲烷

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刘欢