目的探讨不同条件微波辐射对PC12细胞的损伤效应,为深入研究微波辐射的损伤机制提供剂量学依据。方法采用平均功率密度(重复频率×脉宽)分别为10 m W/cm2(100 pps$500 ns)、30 m W/cm2(300 pps$500 ns)和30 m W/cm2(1000 pps$150 ns)的微波辐射NGF诱导后的PC12细胞5 min,于辐射后6 h,采用流式细胞术检测细胞周期、凋亡和坏死率,采用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞凋亡和坏死率,采用透射电镜观察PC12细胞超微结构的改变。结果10 m W/cm2(100 pps$500 ns)辐射后6 h,G0-G1期PC12细胞数减少(p<0.05),G2-M期细胞数增加(p<0.01);30 m W/cm2(1000 pps$150 ns)辐射后6 h,G0-G1期细胞数增加(p<0.05),G2-M期减少(p<0.01);30 m W/cm2(300 pps$500 ns)辐射后6 h,G0-G1期细胞数增加(p<0.05),S期细胞数减少(p<0.01),细胞凋亡率增加(p<0.01),PC12细胞核膜间隙增宽,染色质浓缩边集,核仁呈蜂窝状;线粒体肿胀、空化。结论 30 m W/cm2(300 pps$500 ns)微波辐射可引起PC12细胞生长抑制,凋亡率增加,结构损伤;30 m W/cm2(300 pps$500 ns)可作为深入研究微波辐射的损伤机制的辐射剂量。
目的探讨单层培养细胞总RNA提取过程中先行细胞消化或离心富集对所提RNA质量是否产生影响。方法培养NGF诱导的PC12细胞,采用Trizol试剂提取RNA:离心组(A)先将贴壁生长细胞经胰酶消化、离心获得细胞沉淀,加入1 ml Trizol进行RNA提取;直接组(B)将培养液弃尽后直接加入Trizol试剂(1 ml/10 cm2瓶壁)进行RNA提取;均采用琼脂糖凝胶电泳分析RNA完整性,紫外分光光度仪测定RNA浓度和OD260/OD280比值。结果凝胶电泳结果显示,直接组出现3条清晰的条带(28S、18S和5S条带),离心组在电泳末端5S区出现粗大的条带。两组OD260/OD28比值相似,约为1.6。直接组组间样品间RNA浓度相差较大。结论采用离心法和直接法提取贴壁细胞总RNA,先行细胞离心富集增加了RNA降解机会,直接法提取的RNA质量较高,考虑对后续实验的影响,直接法更优于离心法。
