李鹏飞 作品数:3 被引量:9 H指数:1 供职机构: 郑州大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 河南省科技攻关计划 国家自然科学基金 国家科技支撑计划 更多>> 相关领域: 农业科学 更多>>
伊维菌素人工抗原的制备及鉴定 被引量:1 2015年 为制备伊维菌素人工完全抗原,通过对伊维菌素进行化学修饰,引入活性基团羧基,合成具有半抗原结构特征的伊维菌素半琥珀酸酯。然后采用NHS法将半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联,制备人工免疫原IVM-BSA和检测原IVM-OVA,经SDS-PAGE和紫外光谱扫描鉴定。用人工免疫原IVM-BSA免疫Balb/c小鼠,间接竞争ELISA法测定抗血清效价。结果发现:偶联物IVM-BSA和IVM-OVA的偶联比分别为14.1:1和14.7:1,免疫小鼠抗血清效价达到1:12800,结果说明成功制备出人工完全抗原并且具有良好的免疫原性。 王爱萍 裴艳艳 周景明 李鹏飞 赵金梦 陈菲 车志芬 祁艳华关键词:伊维菌素 半抗原 人工抗原 多克隆抗体 猪圆环病毒Ⅱ型抗体检测ELISA试剂盒的制备 被引量:1 2015年 猪圆环病毒(PCV)两个血清型中只有PCV2为致病性病毒.将ORF2蛋白作为抗原建立区别两型PCV的血清学检测方法.去除N端信号肽的ORF2片段在大肠杆菌中BL21(DE3)中进行了表达.SDS-PAGE凝胶电泳表明在26 k D处有一个明显的表达条带,并且可以和猪圆环病毒阳性血清发生反应,表明重组蛋白表达成功.以表达的ORF2蛋白作为包被原,建立了检测猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的间接ELISA方法.与商品化试剂盒同时检验78份临床血清,符合率为95%;同时与猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒均无交叉反应. 王爱萍 李鹏飞 周景明 张改平 祁艳华 扣莉云 车志芬 蒋敏关键词:猪圆环病毒 ORF2 抗体检测 试剂盒 猪瘟病毒E2蛋白在大肠杆菌中的表达及其可溶性分析 被引量:7 2015年 旨在表达出囊膜糖蛋白E2,为猪瘟病毒的亚单位标记疫苗研制、血清学诊断等提供依据。以pMD-18T-E2为模板,扩增猪瘟病毒E2基因,克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组原核表达质粒pET-28a-E2,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中诱导表达。结果显示,通过SDS-PAGE凝胶电泳可检测到46ku的蛋白条带,与预期结果一致;目的蛋白主要以包涵体形式存在。将E2蛋白变性纯化后,分别采用透析复性和稀释复性2种方法进行复性,成功得到可溶性E2蛋白。 周景明 李鹏飞 张改平 祁艳华 裴艳艳 扣莉云 蒋敏 王爱萍关键词:原核表达 包涵体 蛋白复性