刘芳宁
- 作品数：9 被引量：8H指数：1
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- 发文基金：国家自然科学基金现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金更多>>
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- 新生犊牛皱胃平滑肌细胞的原代培养——组织块培养法和胶原酶消化法的比较研究被引量：1
- 2012年
- 通过组织块培养法和胶原酶消化法分离培养犊奶牛皱胃平滑肌细胞,采用免疫细胞化学方法和免疫荧光化学方法对其进行鉴定,并将鉴定结果、细胞生长曲线进行比较。结果,两种方法培养出的细胞生长曲线基本相同,细胞纯度免疫细胞化学鉴定结果为:组织块培养法为95%以上,胶原酶消化法为90%;免疫荧光鉴定结果为:组织块培养法为96%,酶消化法为89%。组织块培养法操作简单、经济,但耗时较长;胶原酶消化法快速、获得细胞较多,但价格昂贵,故在实际操作中可将两种方法联合应用。
- 许远靖刘芳宁贾艳田武林李彬魏腾张乃生靳朝刘国文谢光洪
- PRRSV GP5类特异性肽对CSFV弱毒疫苗免疫猪骨髓中细胞因子分泌的影响被引量：1
- 2017年
- 试验从猪骨髓中分离T淋巴细胞,待细胞培养达到相应时间点时,分别用PRRSV GP5类特异性肽进行刺激,继而检测细胞因子IL-10、IL-12以及IFN-γ分泌量的变化情况。结果显示:在PRRSV GP5类特异性肽刺激后,骨髓中IL-10分泌量减少,表明G1、G2肽具有减弱免疫抑制,促进抗炎性细胞因子产生的作用;此外,IL-12的分泌量也减少,提示猪的免疫保护作用减弱,表明PRRSV GP5类特异性肽可能具有双面性;而IFN-γ的分泌量变化不稳定,有待于进一步研究。
- 刘芳宁徐鹏孔惟博孙宏伟任少敏梁志选张玉珠舒馨赵建增高英杰孟凡生
- 关键词：PRRSV骨髓
- PRRSV特异性肽对猪骨髓、脾脏、胸腺、肺门淋巴结中CD4+、CD8+和CD4+CD8+T细胞表型的影响
- 猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)又称蓝耳病严重危害我国养猪业。PRRS以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸系统疾病为主要特征。由于PRRSV能够侵袭猪的免疫系统,造成猪的免疫力下降,常常与猪瘟混合型感染的形式发生,加大了病死率。但...
- 刘芳宁
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征
- 文献传递
- SREBP-1c基因重组腺病毒的构建及其在犊牛原代肝细胞中的表达
- 2013年
- 将携带有化学合成的SREBP-1c基因的质粒先用XbaⅠ酶切,Klenow补平突出末端,纯化回收后再用HindⅢ酶切,切胶回收目的基因片段;并将其克隆至用EcoRⅤ/HindⅢ酶切回收的pShuttle-EGFP-CMV(-)TEMP穿梭载体上。经酶切鉴定后,重组穿梭质粒和腺病毒pAdxsi质粒分别用I-CeuⅠ+I-SceⅠ双酶切处理,T4DNA连接酶连接,获得重组质粒pAdxsi-GFP-SREBP1c,酶切鉴定后经Pac I酶切线性化转染HEK293细胞,经包装扩增后用TCID50测定病毒滴度。以重组腺病毒感染犊牛原代肝细胞,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中SREBP-1cmRNA和蛋白的表达量。结果显示,重组腺病毒酶切鉴定正确,滴度可达1.2×1010,腺病毒感染犊牛原代肝细胞中SREBP-1cmRNA和蛋白的表达显著升高。结果表明,本试验成功构建了SREBP-1c基因过表达重组腺病毒,且SREBP-1c在犊牛原代肝细胞中高度表达。
- 杨文涛丁红研付世新邓清华宋玉祥史晓霞张璐莹张仁和郭立辉刘芳宁刘兆喜李心慰陈灰张良赵晨旭李小兵王哲
- 关键词：SREBP-1C重组腺病毒
- 猪药源性伪膜性肠炎的诊治报告
- 2016年
- 随着兽用抗生素的广泛应用、新型抗生素的不断出现以及猪场应用抗生素进行保健的错误措施,近年来越来越多的临床病例显示抗生素可导致结肠炎及腹泻,称之为抗生素相关性结肠炎及抗生素相关性腹泻,其中药源性伪膜性肠炎（Peudo menbraneous colitis,PMC）最为常见。研究证实,伪膜性肠炎几乎全部与使用抗生素有关,其病情危重并伴有结肠甚至空回肠假膜形成。
- 孙宏伟陈建东高发辉任少敏孔维博刘芳宁张玉珠徐鹏区亮欣高英杰王泽岩罗胜军
- 关键词：慢性猪瘟猪副伤寒猪增生性肠炎空回肠猪痢疾
- PRRSV特异性肽对猪骨髓、脾脏、胸腺、肺门淋巴结中T细胞表型的影响
- 2017年
- 通过猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)特异性肽PRRSV-GP5(GP5aa96-104)、PRRSV-N(Naa49-57)刺激PRRS免疫后的仔猪骨髓、脾脏、胸腺、肺门淋巴结,用流式细胞仪检测T淋巴细胞表型的变化。结果显示:(1)骨髓和脾脏T细胞受到刺激时,首先转化为以CD4^+ T细胞为主,而胸腺和肺门淋巴结主要转化为以CD8^+ T细胞为主,并产生CD4^+ CD8^+ T细胞。其中,胸腺和肺门淋巴结中CD4的降低为一过性降低。(2)N特异性肽对骨髓CD3^+ 和CD4^+ CD8^+ T细胞有抑制作用,对脾脏和肺门淋巴结中的CD3^+ T细胞有促进作用,该抑制作用在48h后得以改善。(3)胸腺中T淋巴细胞转化能力最持久。(4)骨髓中T淋巴细胞开始以CD4^+ T细胞为主,后转为以CD8^+ T细胞为主。这为进一步研究有效防制PRRS的途径提供理论数据。
- 刘芳宁张昊龙徐鹏孔惟博张玉珠孙宏伟任少敏赵建增梁志选高英杰
- 关键词：PRRS
- PRRSV N类特异性肽对CSF、PRRS免疫猪肺门淋巴结细胞因子分泌的影响被引量：4
- 2017年
- 为研究猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)免疫猪肺门淋巴结中淋巴细胞对PRRSV N类特异性肽刺激的应答特点,试验从猪肺门淋巴结中分离T淋巴细胞,分别用PRRSV N类特异性肽进行刺激,待细胞培养至24,48h时,离心取细胞上清液,检测上清液中细胞因子TGF-β1、IL-10、IL-12分泌含量的变化。结果显示,PRRSV N类特异性肽能够抑制TGF-β1、IL-10的分泌,表明N1、N2肽具有减弱免疫抑制,促进抗炎性细胞因子分泌的作用;此外IL-12的分泌量也减少,且有逐渐恢复平衡的趋势,提示PRRSV N类特异性肽可能具有双面性,有待于进一步研究。本试验为PRRSV合成肽疫苗及疫苗佐剂的研制提供理论依据。
- 徐鹏张昊龙刘芳宁孔惟博孙宏伟任少敏梁志选张玉珠舒馨赵建增高英杰孟凡生
- 关键词：PRRSV肺门淋巴结
- PRRSV特异性肽-N对CSFV弱毒疫苗免疫猪骨髓细胞因子分泌的影响被引量：1
- 2016年
- 本试验探讨PRRSV特异性肽-N对CSFV弱毒疫苗免疫猪骨髓细胞因子分泌量的影响。选择已免疫CSFV弱毒疫苗的猪为实验动物,提取四肢长骨骨髓,进行T淋巴细胞的分离培养。分别在培养后的24、72 h,用PRRSV特异性肽N1、N2对所培养细胞进行刺激,再进行培养12 h,经离心方法得到细胞上清液,最终检测上清液中细胞因子IFN-γ、IL-12、IL-10的分泌含量变化。结果显示,PRRSV特异性肽-N对于免疫猪骨髓中IFN-γ的分泌影响较小,能够抑制IL-12的分泌,不利于机体免疫反应,对IL-10的分泌影响复杂,需进一步研究。
- 孔惟博孙宏伟梁志选任少敏刘芳宁张玉珠徐鹏舒馨赵建增高英杰
- 关键词：骨髓
- PRRSV特异性肽N对PRRS免疫猪IL-12分泌的影响被引量：1
- 2016年
- 选取体质量相同、雌雄各半、生长环境相同的乳猪26头,通过检测筛选出猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)、圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病毒(PRV)阴性仔猪15头。对这些猪正常免疫PRRSV疫苗,特定时间分离外周血淋巴细胞进行培养,用PRRSV特异性肽N进行刺激,采用ELISA方法测定不同时间点淋巴细胞分泌IL-12的水平。结果显示:PRRSV免疫确切(经ELISA抗体检测呈阳性)14d时淋巴细胞用PRRSV-N-1肽刺激前期能够抑制IL-12的分泌,PRRSV免疫确切(经ELISA抗体检测呈阳性)28d时淋巴细胞用PRRSV-N-1肽能刺激IL-12的分泌量增加。表明淋巴细胞经PRRSV-N-1肽刺激后其IL-12的分泌量会受PRRSV抗体水平的影响,在抗体水平较高时促进淋巴细胞对IL-12的分泌。猪只在PRRSV免疫确切时(经ELISA抗体检测呈阳性),淋巴细胞经PRRSV-N-2肽刺激的时间点越往后其IL-12的分泌量会降低,随着时间的推移受抑制。可以得出PRRSV特异性肽N可以调节外周血淋巴细胞对IL-12的分泌,临床上可以使用PRRSV特异性肽N来增强对PRRSV的抵抗力,但其影响机制还有待研究。
- 任少敏孙宏伟梁志选孔惟博刘芳宁赵建增高英杰
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒IL-12
