胡春华
- 作品数：14 被引量：69H指数：6
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- pthA-nls及其ScFv基因转化柑橘获得抗溃疡病新种质的研究
- 柑橘溃疡病(citrus bacterial canker disease)是由地毯黄单胞杆菌柑橘致病变种(Xanthomonas axonopodis pv.citri)引起的一种世界性检疫性病害,对柑橘产量及品质影响...
- 胡春华
- 关键词：柑橘溃疡病
- 文献传递
- 导入pthA-nls及其ScFv基因获得抗溃疡病柑橘新种质的研究
- 柑橘溃疡病(citrus bacterial canker disease)是由地毯黄单胞杆菌柑橘致病变种(Xanthomonas axonopodis pv.citri)引起的一种世界性检疫性病害,病原基因pthA是柑...
- 胡春华张家银杨莉马先锋李大志邓子牛
- 关键词：柑橘溃疡病抗病种质抗病育种
- 文献传递
- 转rolA、B、C基因枳橙快繁技术被引量：11
- 2006年
- 通过对转rol基因枳橙B、D、E系及对照的高接植株春梢茎段进行萌芽诱导、增殖及试管苗生根成苗的试验,摸索出适宜枳橙快繁各种培养基配方及培养条件。结果表明,以MS+6-BA1mg/L的培养基适合于芽萌发,以MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L的培养基适合于芽增殖,生根则以1/2MS+NAA0.5mg/L+0.2%活性炭的组合最佳,转基因各系生根率均在93.3%以上,显著高于对照生根率(66.7%)。快繁苗移栽成活率可达90%,目前生长良好。
- 胡春华谢玉明黄训才郭琛焦徕吴芯茹邓子牛
- 关键词：ROL快速繁殖
- 抗柑橘溃疡病pthA-nls基因及其构建方法与应用
- 抗柑橘溃疡病pthA-nls基因及其构建方法与应用。本发明利用柑橘溃疡病的致病基因pthA介导广谱抗性原理，构建了抗柑橘溃疡病的新基因pthA-nls。其构建方法包括以下步骤：(1)引物设计；(2)NLS序列的克隆；(3...
- 邓子牛胡春华张家银徐磊杨莉李娜
- 文献传递
- 柑橘溃疡病致病基因pthA的克隆及序列分析被引量：6
- 2008年
- 根据pthA基因和溃疡病病菌大质粒序列设计特异性引物,利用long-PCR方法,获得了包括pthA完整编码区及两端部分非编码区在内的约4100bp的DNA片段,再利用net-PCR获得了pthA完整的编码区,经XbaⅠ和SacⅠ双酶切后将其克隆到植物表达载体pBI121中.经双酶切及核酸序列测定鉴定的阳性克隆重组质粒被命名为pBI-pthA.序列分析结果表明,克隆得到的pthA与登录到Genbank上的pthA序列有99.8%的同源性,pthA全长基因编码1163个氨基酸,具有17.5个102bp单元的重复序列,每个单元编码34个氨基酸,重复区后有1个亮氨酸拉链结构(LZ),3个核定位信号(NLS)序列和C末端酸性转录激活(AAD)保守区.
- 胡春华邓子牛
- 关键词：柑橘溃疡病克隆
- 抗PthA-NLS多肽单克隆抗体的制备及单链抗体基因的构建被引量：4
- 2009年
- 【目的】制备抗PthA-NLS多肽单克隆抗体并构建其单链抗体(single chain variable fragment,ScFv)基因,为从PthA角度进一步研究柑橘溃疡病致病机理创造条件,并为构建单链抗体基因植物表达载体,尝试利用转基因和植物抗体技术创制抗溃疡病柑橘新种质奠定基础。【方法】利用PthA-NLS重组多肽免疫Balb/c小鼠,制备抗PthA-NLS多肽单克隆抗体,从分泌抗PthA-NLS多肽单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA,采用RT-PCR和重叠延伸PCR(splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)法构建其单链抗体基因,并克隆到pGEM-T载体和原核表达载体pET32a(+)中,重组原核表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导重组蛋白的表达。【结果】获得了3株能稳定分泌抗PthA-NLS多肽的单克隆抗体杂交瘤细胞株1C8H1、2D12B6、3D8A10。成功构建了单链抗体基因ScFv,获得的ScFv基因大小约750bp,其中重链可变区(VH)基因有360bp,轻链可变区(VL)基因有342bp,中间连接肽基因45bp,经过IPTG诱导ScFv原核表达,获得了大小为44.5kD的ScFv重组蛋白。【结论】试验获得了3株能稳定分泌抗PthA-NLS多肽的单克隆抗体杂交瘤细胞株,成功构建了ScFv基因,并实现了原核表达,为进一步探索PthA的致病机理和下一步利用抗体技术获得抗溃疡病柑橘种质[0]的研究打下了基础。
- 胡春华龙桂友戴素明马先锋谢玉明李娜邓子牛
- 关键词：柑橘溃疡病单克隆抗体单链抗体
- 转rol基因枳橙分子鉴定及部分生物学的观测被引量：17
- 2006年
- 对转rol基因枳橙B、D、E3个系及对照田间高接植株进行了PCR分子鉴定、RT-PCR转基因表达分析和生物学特征的观测。PCR分析表明rolA、rolB、roIC已成功转入到3个转化枳橙系中。利用RT-PCR在田间转化植株中只检测到npt Ⅱ和rolC基因的表达，而rolA、rolB基因未检测到。3个转化系枳橙均表现出顶端优势减弱，侧枝增多，植株矮化性状明显，高度只有对照植株的44％～50％，节间长度缩短，叶面积减少；光合作用增强；内源赤霉素、生长素、玉米素等促进类激素在中部、下部叶片含量均高于对照，这可能是诱导上述形态特征的变化的因素之一。
- 胡春华邓子牛A.Gentile徐艳熊兴耀
- 关键词：转基因枳橙RT-PCR内源激素
- 发根农杆菌Ri质粒rol基因矮化性状表达研究进展被引量：2
- 2006年
- rol基因的表达能诱导被感染植物产生发根,再培养后所形成的植株具有一系列的如矮化,生根力强等表现型,国内外学者对rol基因这一特性作了深入的研究.对rol基因产生的矮化性状及表达进行了综述,并探讨了rol基因矮化性状研究面临的问题和可能的解决途径.
- 陶爱群谢深喜胡春华
- 关键词：RI质粒矮化
- 农杆菌介导甜橙遗传转化的初步研究被引量：18
- 2005年
- 为改良柑桔品种,以普通溆浦甜橙(CitrussinensiscvXupu)实生苗上胚轴为外植体,建立了农杆菌介导的遗传转化体系,并把chit42基因和phyB基因导入其中.上胚轴经农杆菌工程菌液浸染后,在共培培养基(MS+3mg/LBA)上培养3d,然后分别转移到含有100mg/LKan(卡那霉素,Kanamycin)和500mg/LCef(头孢噻肟霉素,Cefotaxime)的选择培养基上培养14d后,上胚轴开始分化抗性芽,chit42基因和phyB基因的抗性芽再生率分别为27.8%和35.6%.将抗性芽在筛选培养基上培养30d后用茎尖微芽嫁接成苗.目前,嫁接苗在温室中生长良好,经PCR鉴定为转化植株.
- 谢玉明邓子牛郭琛焦徕胡春华熊兴耀
- 关键词：甜橙农杆菌介导
- 柑橘主要病毒病的RT-PCR法鉴定被引量：9
- 2006年
- 为建立主要柑橘病毒病准确、快速的分子检测体系,在表现柑橘衰退病(CTV)、柑橘裂皮病(CEV)和柑橘碎叶病(CTLV)典型症状的病树上采叶样提取总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析.病毒鉴定用的特异引物为CTV3对、CEV2对和CTLV1对.通过不同退火温度的测试,发现所有参试引物均能在56℃退火时扩增出相应的病毒特异带,从而在保证鉴定准确性的前提下,极大地简化了鉴定程序.用建立的RT-PCR体系对云南、重庆、湖南等地有衰退病、裂皮病和碎叶病症状的样品进行检测,结果表明该体系均能对相应病毒进行准确检测.
- 黄训才邓子牛胡春华焦徕韩健谢跃兰
- 关键词：柑橘病毒病反转录聚合酶链式反应
