程世孝
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 曲古抑菌素A通过p53转录激活途径诱导尤文肉瘤细胞凋亡
- 2013年
- 目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)诱导尤文肉瘤细胞株WE-68和VH-64凋亡及作用机制。方法:四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)测定细胞增殖抑制率。流式细胞计数法测量TSA给药后细胞周期中sub-G1含量的变化。免疫印迹法(Western-blot)检测细胞中活化型多聚ADP核糖多聚酶(cleaved-PARP),p53-lys382残基乙酰化和p53蛋白总量的表达。实时定量PCR和siRNA转染技术测定p53多个下游基因的mRNA水平改变和p53表达下调对TSA诱导凋亡的影响。结果:TSA抑制了尤文肉瘤细胞的增殖,诱导细胞周期中sub-G1含量和凋亡终产物cleaved-PARP蛋白表达的增加。TSA给药后,p53-lys382残基乙酰化表达量呈浓度依存性增加,同时上调p53下游因子p21,mdm2,Bax和PUMA的mRNA水平。另一方面,p53蛋白表达的下调明显削弱了TSA介导的p21表达的上调和cleaved-PARP的产生。结论:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA能够通过激活p53高乙酰化表达来恢复p53转录功能,从而诱导尤文肉瘤细胞株产生凋亡。
- 李旭李岩程世孝李雷明孟凡贺王立国王君范广宇
- 关键词：曲古抑菌素A尤文肉瘤P53凋亡
- Livin促进骨肉瘤细胞增殖和侵袭作用的实验研究
- 2013年
- 目的:探讨凋亡抑制蛋白(IAP)家族成员Livin基因在骨肉瘤发生发展以及转移中的作用。方法:联合RNA干扰和质粒重组技术构建Livin基因短发夹RNA(shRNA)表达载体,筛选稳定沉默Livin表达的克隆。四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)测定细胞增殖状况。划痕实验(Wound healing)和侵袭实验(Matrigel invasion assay)评价沉默Livin表达后细胞迁移和浸润能力的变化。免疫印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白Cyclin D1和基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2,9)的蛋白表达变化。结果:shRNA稳定转染的骨肉瘤U2-OS细胞中Livin mRNA和蛋白水平明显下调。与对照组相比,细胞增殖,游走和侵袭能力明显下降,并且该克隆中Cyclin D1,MMP-2和MMP-9的蛋白表达也明显减弱。结论:凋亡抑制蛋白Livin能够在体外条件下促进骨肉瘤细胞增殖和侵袭作用,这一过程可能与Cyclin D1和MMP-2,9的表达增强有关。
- 李旭李岩程世孝李雷明孟凡贺王立国王君范广宇
- 关键词：LIVIN骨肉瘤
- Livin基因增强骨肉瘤转化和顺铂耐药性的体外实验研究被引量：3
- 2013年
- 目的探讨凋亡抑制蛋白(IAP)家族新成员Livin基因在骨肉瘤形成以及多药耐药过程中的作用。方法应用亚克隆技术构建Livin基因短发夹RNA(shRNA)表达载体,稳定转染并筛选沉默Livin表达的克隆。细胞克隆形成法测定阳性克隆的非贴附性生长状态。流式细胞计数法测量Livin表达短期沉默后细胞周期和顺铂化疗敏感性的变化,以及长期沉默后的Hoechst33258核染色情况。Western blot检测Cyclin D1、Bcl-2、Bax、活化型Caspase-3和多聚ADP核糖多聚酶的表达变化。结果在骨肉瘤U2-OS细胞中,shRNA介导了Livin mRNA和蛋白水平的下调,细胞克隆形成能力明显下降。在Livin表达沉默早期,处于G0/G1期细胞增加,Cyclin D1的表达减弱,对顺铂药物敏感性增强;长期沉默后凋亡小体形成,Bcl-2蛋白的表达下调,Bax、活化型Caspase-3和PARP的表达上调。结论凋亡抑制蛋白Livin不但促进骨肉瘤的发生而且促进顺铂化疗耐药性的形成。
- 李旭李岩程世孝李雷明孟凡贺王立国王军范广宇
- 关键词：LIVIN骨肉瘤肿瘤发生耐药性
- 细胞周期蛋白激酶抑制剂flavopiridol对尤文肉瘤耐药细胞增殖抑制的实验研究
- 2013年
- 目的:探讨细胞周期蛋白激酶抑制剂(flavopiridol)在体内外抑制尤文肉瘤阿霉素耐药细胞株WE-68/ADR增殖的作用及其机制。方法:四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)测定细胞增殖抑制率。流式细胞计数法测量flavopiridol给药后WE-68/ADR细胞周期的变化及凋亡率。免疫印迹法(Western-blot)检测细胞中Bax、Bcl-2、p53及活化型多聚ADP核糖多聚酶(PARP-85)蛋白的表达。皮下注射WE-68/ADR细胞建立荷瘤裸鼠模型,17flavopiridol腹腔内给药,测量肿瘤体积及裸鼠体重变化,计算肿瘤抑制率。结果:Flavopiridol可抑制尤文肉瘤阿霉素耐药细胞株WE-68/ADR的细胞增殖,其效果呈时间及浓度相关性(P<0.05)。Flavopiridol给药后,耐药细胞株WE-68/ADR的细胞凋亡比明显高于对照组(P<0.05)。同时,耐药细胞株中的Bax、p53及PARP-85的表达增加,而Bcl-2的表达被下调。Flavopiridol可有效抑制荷瘤小鼠体内耐药细胞株的生长。结论:细胞周期蛋白激酶抑制剂flavopiridol可在体内外有效抑制尤文肉瘤阿霉素耐药细胞株的增殖,其机制可能与p53介导的线粒体凋亡信号传导途径有关。
- 李旭李岩程世孝李雷明孟凡贺朱悦范广宇
- 关键词：细胞周期尤文肉瘤P53
- 细胞周期蛋白激酶抑制剂flavopiridol对骨肉瘤耐药细胞MG63/ADR增殖抑制的体内外实验研究
- 2012年
- 目的探讨细胞周期蛋白激酶抑制剂(flavopiridol)在体内外抑制骨肉瘤耐阿霉素细胞株MG63/ADR增殖的作用及其机制。方法四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)测定细胞增殖抑制率。流式细胞计数法测量flavopiridol给药后MG63/ADR细胞周期的变化及凋亡率。免疫印迹法(Western-blot)检测细胞中pro-caspase-9、pro-caspase-3、caspase-8、Bcl-2、Bcl-xL、p53、Bax及活化型多聚ADP核糖多聚酶(PARP-85)蛋白的表达。采用MG63/ADR建立荷瘤裸鼠模型,FP腹腔内给药,测量肿瘤体积及裸鼠体质量变化,计算肿瘤抑制率。结果 Flavopiridol可抑制骨肉瘤耐阿霉素细胞株MG63/ADR的细胞增殖,其效果呈时间及浓度依赖性。Flavopiridol给药后,耐药细胞株MG63/ADR的细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。Flavopiridol给药后,耐药细胞株中的pro-caspase-9、pro-caspase-3、Bcl-2以及Bcl-xL的表达下降,活化型caspase-8、PARP-85的表达增加。Flavopiridol可有效抑制荷瘤小鼠体内耐药骨细胞的生长。结论细胞周期蛋白激酶抑制可在体外及体内有效抑制骨肉瘤耐药细胞株的增殖,其机制可能与死亡受体介导的caspase信号传导途径及非p53介导的线粒体凋亡信号传导途径相关。
- 李旭李岩程世孝李雷明孟凡贺朱悦范广宇
- 关键词：FLAVOPIRIDOL骨肉瘤CASPASE
