王春岩
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：吉林农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”吉林省科技发展计划基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 猪白细胞介素18成熟蛋白基因的克隆与表达被引量：1
- 2012年
- 目的克隆猪白细胞介素18(pIL-18)成熟蛋白基因,并在植物乳杆菌(Lb.plantarum)NC8中进行表达。方法通过RT-PCR方法从猪脾脏细胞中扩增出pIL-18成熟蛋白基因,克隆到T载体pMD18-T后测序;将阳性基因片段克隆至大肠埃希菌-乳酸菌穿梭表达载体pSIP-409构建重组表达载体pSIP-409-IL-18,进行酶切和PCR鉴定;应用电穿孔技术将其转化至Lb.plantarum NC8中,经SppIP诱导表达后,进行SDS-PAGE及Western-blot分析。结果经测序,pIL-18成熟蛋白基因核苷酸长度为579 bp,编码193个核苷酸;酶切和PCR鉴定证明成功构建了重组表达载体pSIP-409-IL-18;SDS-PAGE及Western-blot分析表明重组菌表达了18 kD的融合蛋白,该重组蛋白可以与鼠抗猪IL-18多克隆抗体反应。结论成功克隆了pIL-18成熟蛋白基因,并获得有生物活性的pIL-18重组乳酸菌,为研制开发IL-18重组乳酸菌制剂奠定基础。
- 王春岩刘莉杨文涛王美芳石春卫杨桂连王春凤
- 关键词：白细胞介素18乳酸菌克隆基因表达
